全 文 ：· 180· China Pharm acy 2007 Vol.18 N o.3 中国药房 2007年第 18卷第 3期
灰树花多糖抗荷瘤小鼠 S180肉瘤的实验研究
侯晓青 1 *,程桂芝 2(1.山东聊城市人民医院 ,聊城市 252000;2.山东聊城市光明医院 ,聊城市 252000)
中图分类号 R282.71;R730.51;R965 文献标识码 A 文章编号 1001-0408(2007)03-0180-02
摘 要 目的:研究灰树花多糖(GFP)抗实验性肉瘤作用的效果及其对肿瘤坏死因子(TNF -α)、白细胞介素-2(IL -2)的影响 ,
探讨其作用机制 。方法:将瘤细胞悬液接种于小鼠右前肢腋皮下制备荷瘤小鼠动物模型 , 分为 GFP 高 、中 、低剂量组和环磷酰胺
(Cy)组、生理盐水组 。以高 、中 、低剂量 GFP 溶液和环磷酰胺分别灌胃 10d ,检测小鼠肿瘤的抑制率 ,小鼠血清中 TNF -α、IL -2
的水平变化 。结果:3种剂量的 GFP 、环磷酰胺对 S 180荷瘤小鼠的抑瘤率分别为 34.37%、42.67%、47.92%和 41.5%,GFP 组荷
瘤小鼠血清内 T NF-α、IL -2含量明显高于 Cy 组和生理盐水组(P <0.05)。结论:GFP 具有抗肿瘤作用 , TN F-α、IL -2的释放
可能是其抗肿瘤作用的机制之一 。
关键词 灰树花多糖;肉瘤;TNF -α;IL-2
*主管药师 。研究方向:中药抗肿瘤作用机制。电话:0635-
82763917。E-mail:du jingwei007@163.com
Study on Grifola Frondosa Polysaccharide Against S180 Sarcoma in Tumor-bearing Mice
HOU Xiaoqing (Peoples Hospi tal of Liaocheng City , Liaocheng 252000 , China)
CHENG Guizhi(Guangm ing Hospi tal of Liaocheng Ci ty , Liaocheng 252000 , China)
ABSTRACT OBJECT IVE:To study effect s of g rifola frondosa Polysaccharide on experimental sarcoma and its influence on
TNF -αand IL -2 and discuss its function m echanism.M ETHODS:S 180 tumour -bearing mice mode w as established by t he
inocula tion of cancer cell suspension subcut aneously in mices right anterio r limbs.T he mice w ere divided into high , medium ,
low dose GFP groups , cyclophosphane group and contro l g roup.The inhibition rate o f mice and the alte ra tion o f TNF -α、IL-
2 level in se rum were de term ined 10 d a fter intragastric administ ration of high , medium , low dose of GFP so lution and cy-
clophosphane , respec tively.RESU LTS:Inhibition rate o f S180 sarcoma w as 34.37%, 42.67%, 47.92%and 41.55%afte r ad-
minist rating the three amounts o f dosage GFP solution and cyclophosphane respec tively ;The leve ls of S180 sarcoma mouse
blood serum TNF-αand IL -2w as higher obviously in the GFP group than that in the Cy group and control g roup (P<0.05).
CONCLUSION :G rifola frondosa Polysaccharide has the anti- tum or e ffect , and the release o f TN F-αand t he IL-2 can be
one of it s anti-t um or mechanism.
KEY WORDS G rifola frondosa Po lysaccharide ;Sarcom a ;T NF-α;IL -2
肿瘤是一种常见 、多发病 ,严重危害人们的健康 。中医中药
在肿瘤的防治方面一直发挥着重要作用 。灰树花多糖(GFP)是
从真菌灰树花中提取的一种生物活性多糖 , 具有抗肿瘤作用 ,
其机制是多方面的 。本文观察了GFP 对荷瘤小鼠血清中肿瘤
坏死因子(TNF-α)和白细胞介素-2(IL-2)的含量变化影
响 ,探讨其抗肿瘤作用机制 。
1 材料
1.1 仪器
DY15K 电子天平 (上海精密科学仪器有限公司天平仪器
厂);AX205精密电子天平 (瑞士 Sw iter land公司);M CO -
15AC5%CO 2恒温培养箱 (日本三洋公司);手术器械 、 SM IC
(XB-K -25)计数板 、OLYM PUS正置显微镜(日本奥林巴斯
公司);全自动酶标仪(美国Multiskan公司)、长城 SJ504计数
器 (上海申贝长城印刷号码机械有限公司);MK3型酶联免疫
测定仪(美国 Dragon公司)。
1.2 试药
GFP(聊城市人民医院中药制剂室);环磷酰胺(Cy , 江苏
恒瑞医药股份有限公司 , 批号:03072921);S180细胞株(山东
省医科院);RPM I1640培养基(美国 GIBCO 公司);小牛血清
(杭州四季青公司);TN F-α、IL -2酶标试剂盒(北京邦定泰
克生物有限公司)。
1.3 动物
健康昆明种小白鼠 (KM 小鼠)50只 , 6 ～ 8w k龄 , 体重
(20±4)g , ♀♂各半 。购自山东大学实验动物中心 ,动物生产许
可证号:020518。
2 方法
2.1 荷瘤小鼠模型制备
按文献 [1 ] 取冻存复苏的 S 180细胞株在 5%CO 2(体积比)
恒温培养箱中培养 , 传至 2 ～ 3代 , 取处于对数生长期的瘤细
胞 , 用生理盐水稀释成 1×106·mL -1的瘤细胞悬液 , 用 2%的
台盼蓝染色 ,细胞存活率>98%。取 KM 小鼠称重并记录 ,以每
鼠 0.2mL 瘤细胞悬液接种于小鼠右前肢腋皮下 。
2.2 试验动物分组及给药方法
接种 24h后试验小鼠随机分为 5组 , 每组 10只 , ♀♂随
机 。GFP 组 30只(按高 、中 、低剂量均分为 3组)、环磷酰胺(Cy)
组 10只 、生理盐水(NS)组 10只 。接种 24h后开始给药 ,GFP
高剂量组(200mg ·d -1)、GFP 中剂量组(150mg ·d -1)、GFP
低剂量组(50mg · d -1)和生理盐水组 , 每鼠给药量为0.4mL ·
中国药房 2007年第 18卷第 3期 China Pharmacy 2007 Vo l.18 No.3 · 181·
d -1灌胃 , 环磷酰胺组每鼠皮下注射 0.4%Cy0.25mL ·10g -1·
d -1 ,连续给药 10d 。
2.3 检测指标
于末次给药后 1h ,眼眶静脉丛取血 ,离心 ,取上清 , 采用酶
标双抗体夹心 ELISA 法检测血清 TNF -α水平 。按试剂盒说
明书加标准品及上清液 , 加相应的多克隆抗体 , 37℃孵育
60min , 洗涤后加入辣根过氧化酶标记的抗体 , 再次孵育 , 洗涤
后加显色剂 , 终止反应 , 492nm 波长处测吸光度 , 绘制标准曲
线 ,计算出血清样本 T NF-α和 IL-2含量 。处死小鼠 ,称重 ,记
录 ,完整剥离瘤块 ,精密电子天平称重并记录 ,计算肿瘤抑制率 。
肿瘤抑制率= (生理盐水组平均瘤重 —给药组平均瘤
重)/生理盐水平均瘤重×100%。
2.4 统计学处理
用 SPSS12.0软件包统计分析 。各组数据以x ±s表示 ,组
间差异用 t检验判断有无显著性 。
3 结果
3.1 肿瘤对体重的影响
荷瘤小鼠体重均有所下降 , 但 GFP 组小鼠体重下降无统
计学意义 , 详见表 1。NS组和 Cy 组实验过程中小鼠分别死亡
3只和 2只 ,GFP 高剂量组小鼠死亡 1只 。
表 1 GFP对荷瘤小鼠体重的影响(x ±s , n=10)
Tab 1 The effec t of grifola frondosa polysaccharide on
the weight of tumor-bearing mice(x ±s , n=10)
组别 给药方式
剂量/mg ·
kg
-1 ·d-1
小鼠数量 体重
试验前 试验后 试验前 试验后
NS组 ig - 10 7 22.0±3.2 19.0±2.4*
GFP低剂量组 ig 100 10 10 22.1±3.4 21.1±2.6
GFP中剂量组 ig 150 10 10 22.8±1.1 20.0±3.1
GFP高剂量组 ig 200 10 9 22.3±3.2 21.1±2.3
Cy组 sc 50 10 8 22.4±2.1 18.3±3.8*
与试验前比较:*P<0.05
vs.that befo re the experiment:*P <0.05
3.2 GFP对荷瘤小鼠的抑瘤率和血清中 TNF-α和 IL-2
的影响
GFP可抑制小鼠肉瘤的生长 ,以中剂量 GFP 的抑瘤率最
高 ,与 Cy 组和 NS组比较差异有显著性(P<0.01);GFP 对血
清中 TNF -α和 IL -2的增加以中剂量最为明显 , 与 Cy 组和
NS组比较差异有显著性(P <0.01),详见表 2。
表 2 GFP对荷瘤小鼠的抑瘤率和血清中 TNF-α、IL-2的影响(x ±s , n=10)
Tab 2 The ef fec t of grifola frondosa polysacchar ide on the tumor inhib it ion rate of mice and TNF-αand IL-2 level in
serum(x ±s , n=10)
组别 剂量/mg· kg -1· d -1 瘤重/ g 抑瘤率/ % T NF-α/ ng·mL -1 IL-2/ ng ·mL -1
NS组 - 413.50±136.54 - 5.27±0.49 0.17±0.03
GFP组 100 320.36±110.31 33.19 6.31±0.30* 0.21±0.02*
GFP组 150 215.36±109.96 47.92# 7.53±0.51## ** 0.37±0.04## **
GFP组 200 247.53±89.85 38.54# 6.72±0.06#* 0.25±0.03#*
Cy组 50 241.67±96.88 41.55 6.15±0.19* 0.29±0.03*
与 NS 组比较:*P<0.05, **P<0.01;与 Cy 组比较:#P<0.05, # #P<0.01
vs.saline group:*P<0.05, **P<0.01;vs.cyclophosphamide group:#P<0.05 , ##P<0.01
4 讨论
TNF -α在肿瘤机体免疫功能中是非常重要的细胞因子 ,
由单核-巨噬细胞产生 , 其可以直接杀伤肿瘤细胞 , 如通过作
用于胞膜磷脂酶 、蛋白酶和核酸酶途径杀伤肿瘤细胞;还可以
通过间接途径杀伤肿瘤细胞 , 如阻断肿瘤细胞血液供应 , 增加
肿瘤血管内皮细胞的凝血活性 , 使血管内皮细胞受损 , 以及抑
制血管内皮细胞迁移等[ 2 ]。IL -2是 T 细胞分泌的 ,是 T 细胞
增值的信号 , 可以促进 T 细胞大量增值 , 此外还可促使自然杀伤
(NK)细胞的活化增值 ,也可促使 B细胞增殖及抗体分泌。
灰树花 (Grifo la frondosa)是一种天然的珍稀食 、药两用
菌 , 又名栗子蘑 、莲花菌等 , 其性味甘 、平 ,有益气健脾 、补虚扶
正的功效 。GFP 是从灰树花中提取的生物活性多糖 ,其抗肿瘤
作用已被众多实验证明 [3 ～5 ] 。本实验研究表明 ,GFP 可使荷瘤
小鼠血清内 TNF-α和 IL -2含量增加 , 高剂量 GFP 组小鼠
TNF -α和 IL -2含量低于中剂量组 , 中剂量组 TNF -α和
IL -2升高显著(P <0.01),抑瘤率也最高 ,提示 GFP 抗肿瘤 、
调节免疫需有合适的剂量 ,这和张善玉等[ 6 ]实验结果相符合 。
总之 ,GFP 可通过促进 TNF-α和 IL -2分泌 , 提高机体
免疫力来发挥抗肿瘤作用。但是GFP 是否能促进其它因子的
分泌 ,分泌的 TNF -α等细胞因子通过哪条途径作用于肿瘤细
胞等还有待于深入研究 。
参考文献
[ 1] 徐淑云 ,卞如濂 ,陈 修.药理实验方法学[ M ].第 2版.
北京:人民卫生出版社 ,1992:1 423.
[ 2] 周振英 , 吴晓柳 , 朱月清 , 等.恶性肿瘤患者外周血细胞
TNF -α和 IFN -γ检测的临床意义[ J] .河南肿瘤学杂
志 ,2003 , 16(3):159.
[ 3] 孙 震 , 陈石良 , 谷文英 , 等.灰树花多糖体内抗肿瘤作
用的实验研究[ J].药物生物技术 , 2001 ,8(5):279.
[ 4] 李小定 , 吴谋成 , 曾晓波 , 等.灰树花多糖 PGF -1对荷
瘤小鼠免疫功能的影响 [ J] .华中农业大学学报 , 2002 ,
21(3):261.
[ 5] 李小定 , 吴谋成 , 曾晓波 , 等.灰树花多糖粗品与纯品的
抗肿瘤作用和对免疫功能的影响 [ J] .营养学报 , 2003 ,
25(1):7.
[ 6] 张善玉 ,扑惠顺 ,申英爱.黄芪多糖与人参总皂苷联用的
免疫调节作用初步研究[ J].中国药房 ,2005 ,16(21):1 620.
(收稿日期:2006-03-14 修回日期:2006-09-06)
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