全 文 ：赶黄草中没食子酸的提取方法比较研究
柯发敏，侯杰荣，余昕，刘剑，李菲菲
（四川医科大学，四川泸州 646000）
摘 要：从回流法、超声法、冷浸法 3种常用提取方法中选择提取赶黄草中没食子酸的最佳方法。以没食子酸含量为指
标，采用反相高效液相色谱法测定提取液中没食子酸的含量，分别对回流法、超声法、冷浸法 3种提取方法对赶黄草药
材中的没食子酸的提取效果进行比较。没食子酸在 27.45 μg/mL～54.90 μg/mL（r=0.999 7）与峰面积呈良好的线性关系，
平均回收率 100.29 %，RSD为 1.13 %（n=9）。3种提取方法的提取效率分别为 1.98、1.67、0.86 mg/g。赶黄草中没食子酸的
提取最佳工艺为回流法。
关键词：赶黄草；提取；没食子酸；反相高效液相色谱法
Comparison of Different Extraction Methods of Gallic Acid from Penthorum chinense Pursh
KE Fa-min，HOU Jie-rong，YU Xin，LIU Jian，LI Fei-fei
（Sichuan Medical University，Luzhou 646000，Sichuan，China）
Abstract： The research aimed to optimize the extraction process of gallic acid from Penthorum chinense Pursh.
With extraction amount of gallic acid as index，the content of gallic acid was determined by reversed-phase high
performance liquid chromatography （ RP-HPLC） . Reflux method， ultrasonic method and cold-maceration were
used in the extraction of gallic acid in Penthorum chinense Pursh． There was a good linear relationship between
gallic acid and peak area when the sample injection was from 27.45 μg/mL-54.90 μg/mL（ r=0.999 7） ；the aver－
age recovery was 100.29 %，and RSD was 1.13 %（ n=9） .Extraction ratio were obtained as follows： 1.98，1.67，
0.86 mg/g respectively for reflux method， ultrasonic method and cold-maceration. The best extraction process is
reflux method.
Key words： Penthorum chinense Pursh ； extract ； gallic acid ； reversed -phase high performance liquid
chromatography
食品研究与开发
Food Research And Development
2016 年 4 月
第 37 卷第 7 期
DOI：10.3969/j.issn.1005-6521.2016.07.018
基金项目：四川医科大学青年基金项目（0212005）；泸州市科技局项
目（2012-135）
作者简介：柯发敏（1983—），女（汉），讲师，硕士，主要从事药物分析
的教学与科研工作。
分离提取
赶黄草为虎耳草科扯根菜属植物扯根菜 Pentho－
rum chinense Pursh的干燥地上部分，为苗族民间草药，
主要分布于海拔约 1 000 m的乌蒙山麓原始森林，在
我国主要分布于四川、贵州、湖南等地 [1]，现大量种植
于四川省泸州市古蔺县境内，是四川古蔺县的道地药
材[2]。民间以其全草入药，其全草性平、味苦、微辛，无
毒，具有清热解毒、利水消肿、活血散瘀、退黄化湿之功
效，临床广泛用于治疗水肿、跌打损伤，黄疸、带下以及
各型肝炎、脂肪肝等症[3]。赶黄草中含有的主要成分为
有机酸类、黄酮类等，其中稳定存在的黄酮类成分为
槲皮素、有机酸类成分为没食子酸。对槲皮素和没食
子酸的单一成分药理试验表明，槲皮素和没食子酸这
两种成分为已知的具有抗乙肝病毒和保肝作用的
成分[4]。
没食子酸的含量测定方法现有紫外-可见分光光
度法、反相高效液相色谱法等。其中反相高效液相色
谱法具有分离效能高、分析速度快、分析结果准确等
优点，因此，本次研究选择反相高效液相色谱法作为
测定赶黄草中没食子酸的方法。本文以没食子酸为测
定指标，考察了回流法、超声法、冷浸法 3种常用的提
取方法对赶黄草中没食子酸的提取率进行了比较
研究。
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1 仪器与材料
1.1 仪器
UV1700PC型紫外可见分光光度计：购自上海凤
凰光学科仪有限公司；FA1104N型电子天平：购自上
海精密仪器公司；KQ3200B型超声波清洗器：购自昆
山市超声仪器有限公司；戴安 U-3000液相色谱仪；
B-220恒温水浴锅：购自上海亚荣生化仪器厂。
1.2 试剂
赶黄草：购于四川泸州荷花中药饮片公司；没食
子酸标准品：中国药品生物制品检定所，批号：
110831-200803；甲醇为色谱纯；其余试剂均为分析纯。
2 方法与结果
2.1 提取方法
2.1.1 超声法
精密称取赶黄草药材粉末约 0.3 g，加入 15 mL 60 %
乙醇，称重，采用超声功率 120 W，超声提取 30 min，用
60 %乙醇补足减失的重量，过滤，初滤液弃去，取续滤
液适量，用微孔滤膜（0.45 μm）过滤，即得供试品溶液。
2.1.2 回流法
精密称取赶黄草药材粉末约 0.3 g，加入 15mL60%
乙醇，称重，回流提取 2 h，放冷至室温，用 60 %乙醇补
足减失的重量，过滤，初滤液弃去，取续滤液适量，用微
孔滤膜（0.45 μm）过滤，即得供试品溶液。
2.1.3 冷浸法
精密称取赶黄草药材粉末约 0.3 g，加入 15mL60%
乙醇，称重，冷浸 24 h，用 60 %乙醇补足减失的重
量，过滤，初滤液弃去，取续滤液适量，用微孔滤膜
（0.45 μm）过滤，即得供试品溶液。
2.2 槲皮素的含量测定
2.2.1 对照品溶液的制备
精密称取干燥至恒重的没食子酸对照品适量，加
60 %乙醇配成制成 0.549 mg/mL 的没食子酸标准品
溶液。
2.2.2 色谱条件
色谱柱采用 Agilent Eclipse Plus C18柱（4.6 mm×
100 mm，3.5 μm），流动相为甲醇-0.05 %磷酸水溶液
（5 ∶ 95）（体积比），流速为 0.6 mL/min，检测波长：264 nm，
柱温：25℃，进样量：5 μL。分别精密吸取“2.2.1”项的
对照品、“2.1.2”项供试品溶液各 5 μL，进样，记录色谱
图见图 1。
2.2.3 测定波长的选择
精密吸取没食子酸对照品溶液 0.2 mL，用 60 %
乙醇定容至 10 mL，以 60 %乙醇为空白，在 200 nm～
800 nm处对没食子酸标准溶液进行紫外扫描。扫描结
果显示没食子酸在 264 nm处有最大吸收，因此本次实
验选择 264 nm波长为没食子酸的测定波长。
2.2.4 线性关系的考察
取 2.2.2 中的没食子酸标准品溶液 0.5、0.6、0.7、
0.8、0.9、1.0 mL置于 10 mL容量瓶中，用 60 %乙醇的
稀释到刻度，摇匀，经过 0.45 μm微孔滤膜过滤，即得
对照品溶液。分别精密吸取上述对照品供试液各 5 μL，
照“2.2.2 色谱条件”测定峰面积，以没食子酸的浓度
（μg/mL）为横坐标 x，峰面积为纵坐标 y，绘制标准曲
线，得回归方程 y=2.128 6x+6.487 5，r=0.999 7。结果表
明，没食子酸在 27.45 μg/mL～54.90 μg/mL浓度范围内
线性关系良好。
2.2.5 精密度试验
精密吸取没食子酸标准品溶液（0.549 μg/mL）5 μL，
照“2.2.2色谱条件”项下测定峰面积，重复进样 6次，
测得没食子酸峰面积，计算 RSD为 0.85 %，试验结果
表明该仪器精密度良好，符合试验要求。
2.2.6 稳定性试验
将样品溶液储存在室温条件下，取样品溶液（60 %
乙醇、超声 30 min制的）5 μL，于 0、2、6、8、12、24 h 测
定峰面积，计算 RSD为 1.95 %。表明没食子酸在室温
条件下 24 h内稳定。
2.2.7 回收率试验
取已知没食子酸含量的赶黄草药材粉末约 0.15 g，
20.0
15.0
10.0
5.0
0.0
-5.0
0.00 1.00 8.97
时间/min
2.00 3.00 4.00 5.00 6.00 7.00 8.00
1A
40.0
30.0
20.0
10.0
0.0 1.3 8.8
时间/min
2.5 3.8 5.0 6.3 7.5
1
B
图 1 没食子酸对照品（A）、赶黄草药材（B）HPLC色谱图
Fig.1 Chromatograms of control solution（A），Penthorum chinense
Pursh solution（B）
1为没食子酸。
柯发敏，等：赶黄草中没食子酸的提取方法比较研究 分离提取
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精密称定，共 9份，分别加入没食子酸标准品适量，按
“2.1.2供试品溶液的选择与制备”项下制的 9份供试
品溶液，用 0.45μm微孔滤膜过滤，照“2.2.2色谱条件”
项下测定峰面积，计算回收率。结果表明没食子酸的
平均加样回收率为 100.29 %，RSD为 1.13 %，结果见
表 1。
2.2.8 样品溶液含量测定
精密吸取样品溶液 5 μL，按照“2.2.2”项色谱条件
进行测定，根据标准曲线计算没食子酸的含量。
3 结论
对样品溶液进行含量测定，测定结果见表 2。
结果表明，3种提取方法得到的没食子酸含量冷
浸法最低，而且提取时间最长；超声法其次，超声法提
取时间短，操作简单，温度要求低；回流法最高，回流法
所需提取时间比较短，提取设备简单。因此，比较了 3种
常见的提取方法后，确定回流法是赶黄草中没食子酸
提取的最佳方法。
4 讨论
没食子酸亦称“五倍子酸”、“棓酸”。学名“3，4，5-
三羟基苯甲酸”。广泛存在于掌叶大黄、大叶桉、山茱
萸等植物中，是自然界存在的一种多酚类化合物。李
肖玲等[5]报道了没食子酸具有抗炎、抗氧化、抗突变、、
抗自由基抗病毒等多种生物学活性；同时没食子酸具
有抗肿瘤作用，可以抑制肥大细胞瘤的转移，从而延
长生存期[6]；也是相对适宜的杀锥虫候选药物 [7]；对肝
脏具有保护作用，可以抵抗四氯化碳诱导的肝脏生理
和生化的转变[8]。
超声波法、回流法和冷浸法虽然所用溶剂相同，
回流法加热，根据没食子酸的溶解特性，温度高有利
于没食子酸溶出，而超声法虽然温度不高，但是超声
波可以破坏赶黄草细胞壁结构，细胞壁结构被破换，
使没食子酸等内容物容易溶出[9]，冷浸法温度为室温，
又不能破换细胞壁结构，并且需要的时间长，提取率
比较低。比较了以上 3中提取方法，以回流法不仅提
取效率最高，操作也比较方便，故本次研究最终选择
回流法为赶黄草中没食子酸的最佳提取方法。
参考文献：
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cial Wild Economic Animal and Plant Research,2005(4):21-23
收稿日期：2015-12-07
序号 加入量/mg 测得量/mg 回收率/% 平均回收率/% RSD/%
1 0.238 3 0.533 6 98.70
2 0.238 3 0.526 2 95.85
3 0.238 3 0.539 6 100.88
4 0.296 5 0.592 7 101.05
5 0.296 5 0.598 9 101.62 100.29 1.13
6 0.296 5 0.598 0 101.32
7 0.357 4 0.652 5 98.85
8 0.357 4 0.660 8 101.57
9 0.357 4 0.657 7 100.08
表 1 加样回收试验结果
Table 1 The results of recovery test
表 2 不同提取方法的提取效果
Table 2 Extraction effect of different extraction methods
提取方法 提取率/（mg/g）
回流法 1.98
超声法 1.67
冷浸法 0.86
柯发敏，等：赶黄草中没食子酸的提取方法比较研究分离提取
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