全 文 ：第 11 期
收稿日期：2009－05－18
基金项目：通化师范学院自然科学科研基金项目（200941）
作者简介：胡彦武（1980－），男，吉林四平人，讲师，硕士，从事生药有效成分的分离鉴定及生物活性研究，（电话）13844545298
（电子信箱）hywcz＠163．com。
黄花忍冬（Lonicera chrysantha Turcz．）为忍冬
科忍冬属多年生灌木，主要分布于华北、东北、西北
等地，可供药用。 国内外大部分研究主要集中在其
花和果实上［1］，而对其茎、叶的研究鲜有报道。为此，
本试验采用超声提取法对黄花忍冬茎和叶中绿原
酸进行提取，采用高效液相色谱法对绿原酸进行含
量的测定，以期了解黄花忍冬茎和叶中绿原酸的含
量差异，为评价黄花忍冬不同部位的药用价值及资
源合理开发利用提供参考依据。
1 材料与方法
1．1 试验材料
美国 Agilent1100 型高效液相色谱仪 ， 包括
1100四元泵，柱温箱，二级管阵列检测器，Agilent 化
学工作站；KQ-200KDB 型超声波清洗器（昆山市超
声波仪器有限公司）；AL104 电子分析天平 （梅特
勒－托利多仪器有限公司）。
绿原酸对照品购自中国药品生物制品检定所，
批号 110753－200413，乙腈、甲醇为色谱纯，水为纯
化水，其他试剂均为分析纯。
黄花忍冬茎、 叶采自通化师范学院校园周边，
经鉴定为忍冬科忍冬属黄花忍冬的茎、叶，阴干、低
温烘干后粉碎成粉末备用。
1．2 试验方法
1．2．1 色谱条件 Phenomsil C18 色谱柱（150 mm×
4.6 mm，5 μm）；流动相为乙腈－0．4％磷酸溶液（13∶
87）；流速为 0．8 mL·min－1；柱温为 25℃；检测波长为
327 nm；理论板数以绿原酸峰计算应不低于 1 000。
1．2．2 绿原酸对照品溶液的制备 精密称取绿原
酸对照品 10 mg， 用甲醇溶解并定容至 10 mL 棕色
黄花忍冬茎和叶中绿原酸的提取及含量测定
胡彦武，于俊林，孙仁爽
（通化师范学院制药与食品科学系，吉林 通化 134002）
摘要：采用超声提取法提取黄花忍冬茎和叶中绿原酸并用 HPLC 法测定其含量。 Phenomsil C18 色谱柱
（150 mm×4．6 mm，5 μm），流动相为乙腈－0．4％磷酸溶液（13∶87），流速为 0．8 mL·min－1，检测波长为 327
nm。 结果表明，在 0．20～1．00 μg 范围内绿原酸呈现良好的线性关系（r＝0．999 8），平均回收率为 95．50％，
RSD＝2．86％。 此方法快速简便，重现性好，绿原酸的含量因部位的不同而有差异。
关键词：黄花忍冬茎和叶；高效液相色谱；绿原酸；含量测定
中图分类号：Q94－334 文献标识码：A 文章编号：0439－8114（2009）11－2837-02
Extraction and Determination of Chlorogenic Acid in the stems and
leaves of Lonicera chrysantha Turcz．
HU Yan－wu，YU Jun－lin，SUN Ren－shuang
（Department of Pharmaceutics and Food Science， Tonghua Teachers College， Tonghua 134002， Jilin， China）
Abstract： The chlorogenic acid in the stems and leaves of Lonicera chrysantha Turcz. were extracted with ultrasonic extrac-
tion and analyzed with HPLC． The separation was preformed on Phenomsil C18 （150 mm×4．6 mm，5 μm） with acetonitrile－
0．4％H3PO4 （13∶87） as mobile phase． The results showed the contents of chlorogenic acid were different in different parts of
Lonicera chrysantha Turcz． The linear range was 0．20～1．00 μg （r＝0．999 8）． The average recovery of chlorogenic acid was
95．50％，RSD＝2．86％． As a result， this method was simple， rapid with a good reproducibility．
Key words： stems and leaves of Lonicera chrysantha Turcz．； HPLC； chlorogenic acid； content determination
第 48卷第 11期
2009年 11月
湖北农业科学
Hubei Agricultural Sciences
Vol． 48 No.11
Nov．，2009
DOI:10.14088/j.cnki.issn0439-8114.2009.11.048
湖 北 农 业 科 学 2009 年
容量瓶中，摇匀，精密量取 1 mL，用甲醇稀释至 25
mL，摇匀，配制得 0．04 mg·mL－1的对照品溶液。
1．2．3 黄花忍冬茎和叶中绿原酸的提取 取黄花
忍冬茎和叶粉末各约 1 g， 精密称定， 加体积分数
50％甲醇 50 mL，精密称定重量，超声处理 30 min，
补足减轻的重量， 摇匀， 过滤， 精密量取续滤液 5
mL，置于 25 mL棕色容量瓶中，加 50％甲醇至刻度，
摇匀。 0．45 μm 微孔滤膜滤过，弃初滤液，取续滤液
作为待测样品溶液。
2 结果与分析［2－4］
2．1 绿原酸的色谱分离与线性关系
2．1．1 样品的测定 取 1．2．2 的对照品溶液和 1．2．3
待测液各 10 μL（经 0．45 μm 滤膜过滤），分别进样
分析，平行进样 3次，得色谱图（图 1～4）。
2．1．2 标准曲线的绘制 精密吸取对照溶液 0．1、
0．2、0．3、0．4、0．5、1．0 mL， 分别置于 1 mL 容量瓶中，
甲醇定容，摇匀，进样 10 μL，按上述色谱条件测定
峰面积，以对照品进样量 x为横坐标，峰面积值 y为
纵坐标，绘制标准曲线，得回归方程为 y＝416．074 5x＋
0．671 5，（r＝0．999 8，n＝5），绿原酸在 0．20～1．00 μg 范
围内线性关系良好。
2．2 方法学考察
2．2．1 稳定性试验 精密吸取同一份供试溶液，于
0，2，4，8，12，24 h 后测定，结果 RSD＝1．15％，表明供
试品溶液在 24 h内基本稳定。
2．2．2 重现性试验 取同一样品，平行制备 5 份供
试品溶液，按上述色谱条件测定，计算含量，结果
RSD＝1．14％，表明方法的重现性良好。
2．2．3 精密度试验 取同一浓度绿原酸对照溶液，
在上述色谱条件下， 连续进样 5 次， 测定， 结果
RSD＝1．30％，表明仪器精密度良好。
2．2．4 加样回收率试验 精密称定已知含量（含量
为 0．11％）的黄花忍冬叶粉末约 0．15 g，5 份，按上述
方法提取后分别加入绿原酸对照品溶液 10 mL，按
样品测定方法测定峰面积。 计算回收率，结果见表
1。 平均回收率为 95．50％，RSD 值为 2．86％，表明测
定方法稳定可靠。
2．3 样品的测定
取 1．2．3 制备的黄花忍冬茎和叶提取液各 10
μL，按上述色谱条件，平行进样 3 次，测得黄花忍冬
茎和叶中绿原酸含量，结果见表 2。
3 小结
采用超声提取法对黄花忍冬叶、茎韧皮部及茎
木质部中绿原酸进行提取，经 HPLC检测，结果表明
黄花忍冬叶和茎中均含有绿原酸，经外标法测定其
含量为茎木质部 （0．34％）＞茎韧皮部 （0．27％）＞叶
表 2 样品含量的测定（n＝3）
编号
1
2
3
部位
茎韧皮部
茎木质部
叶
绿原酸平均含量/%
0.27
0.34
0.11
相对标准偏差（RSD） ／ ％
1.14
0.97
1.03
表 1 黄花忍冬叶加样回收率的测定结果（n＝5）
编号
1
2
3
4
5
样品量
mg
0.16
0.17
0.16
0.17
0.16
加入量
mg
0.40
0.40
0.40
0.40
0.40
测得量
mg
0.55
0.56
0.53
0.54
0.55
回收率
%
97.50
97.50
92.50
92.50
97.50
平均回收率
%
95.50
相对标准偏差（RSD）
％
2.86
14
12
10
8
6
4
2
0 1 2 3 4 5 6 7
保留时间/min
图 1 绿原酸对照品色谱图
4.0
3.5
3.0
2.5
2.0
1.5
1.0
0.5
0 1 2 3 4 5 6 7
保留时间/min
图 2 黄花忍冬叶中绿原酸色谱图
图 3 黄花忍冬茎韧皮部绿原酸色谱图
10
8
6
4
2
0 1 2 3 4 5 6 7
保留时间/min
图 4 黄花忍冬茎木质部绿原酸色谱图
12
10
8
6
4
2
0 1 2 3 4 5 6 7
保留时间/min
m
Au
m
Au
m
Au
m
Au
2838
第 11 期
111111111111111111111111111111111111111111111
（责任编辑 王晓芳）
（0．11％）。
黄花忍冬具有较高的观赏、绿化价值，其茎、叶
资源广泛，但其药用价值一直未被开发利用。 本试
验以黄花忍冬的茎韧皮部、茎木质部及叶为试验材
料，分别进行绿原酸的提取及含量测定。 结果表明，
黄花忍冬茎和叶中均含有绿原酸，尤以茎木质部含
量为高，这为黄花忍冬茎及叶的综合开发利用奠定
了基础。
本试验参照中国药典金银花项下绿原酸的提
取及含量测定方法，对样品直接以甲醇溶解并经超
声处理及微孔滤膜过滤，即可进样测定，操作简单，
测定误差较小，结果较准确，重现性好，可用于黄花
忍冬茎和叶中绿原酸的定量分析。
参考文献：
［1］ 于加平，蔡金玲．黄花忍冬花中绿原酸的提取及含量的测定［J］．
北方园艺，2009（2）：88－89．
［2］ 国家药典委员会．中华人民共和国药典（一部）［M］．北京：化学工
业出版社，2005．152．
［3］ 胡彦武，于俊林，孙仁爽，等．金银忍冬茎和叶中绿原酸的提取及
含量测定［J］．安徽农业科学，2008，36（25）：10940－10941．
［4］ 于俊林，孙仁爽，吕 红，等．金银忍冬和黄花忍冬花及花蕾中绿
原酸的 HPLC 法测定［J］．中草药，2008，39（11）：1738－1739．
第 48 卷第 11期
2009 年 11月
湖北农业科学
Hubei Agricultural Sciences
Vol． 48 No.11
Nov．，2009
收稿日期：2009－02－06
基金项目：国家“十一五”科技支撑计划重大专项（2006BAK02A21 ／ 1）；河南科技学院科技创新基金（20090731）
作者简介：李广领（1976－），男，河南平顶山人，讲师，硕士，研究方向为农药残留分析，（电话）0373－3040907（电子信箱）liguangling＠hist．edu．cn。
小麦子粒中五种有机磷农药多残留分析方法研究
李广领，王建华，邓天福，陈锡岭，张淑静
（河南科技学院资源与环境学院，河南 新乡 453003）
摘要：采用索氏提取法和溶剂提取法对小麦子粒中的甲胺磷、乙酰甲胺磷、乐果、甲基对硫磷、马拉硫磷
进行前处理，采用 SUBTM－5 型毛细管柱、NPD（Ni63）在优化的气相色谱条件下，对添加的 5 种农药的标准
样品进行检测，结果显示，方法的平均回收率均在 75．0％以上，相对标准偏差为 3．52％～9．74％，最低检测
限分别是 0．001 2 mg·kg－1，0．001 9 mg·kg－1，0．002 6 mg·kg－1，0．003 1 mg·kg－1和 0．004 4 mg·kg－1。 同时，确
立了以氧化乐果为内标物的样品定量分析方法，内标物氧化乐果在 0．05～3．20 mg·L－1浓度范围内线性回
归方程为 y＝17．743 6x＋1．274 9，R2＝0．989 8。本方法准确、简便、重现性好。采用同样的试验方法还获取了
所采 3 个批次实际样本的残留结果。
关键词：气相色谱；有机磷农药；多残留；小麦子粒；内标法；检测
中图分类号：S512．1；S481＋．8 文献标识码：A 文章编号：0439－8114（2009）11－2839-04
Detection of 5 Organophosphorus Pesticide Residues in Wheat Grain
LI Guang－ling，WANG Jian－hua，DENG Tian－fu，CHEN Xi－ling，ZANG Shu－jing
（College of Resources and Environment， Henan Institute of Science and Technology， Xinxiang 453003， Henan， China）
Abstract： The residue of Methamidophos， Acephate， Dimethoate， Parathionmethyl and Malathion in wheat grains were ex-
tracted and purified by Soxhlet and solvent extraction． The prepared analytical samples were analyzed by GC－NPD （Ni63） on
the optimized chromatographic conditions with SUBTM－5 column． The results showed that the average recovery were all more
than 75．0％， and the relative standard deviations were 3．52％~9．74％ after spiked pesticides into wheat grain． The detection
limit was 0．001 2 mg ／ kg，0．001 9 mg ／ kg，0．002 6 mg ／ kg，0．003 1 mg ／ kg and 0．004 4 mg ／ kg respectively． At the same time， the
inter－standard quantitative method based on omethoate was established and its linear regression equation and the correlation
coefficient was y＝17．743 6x＋1．274 9 and R2＝0．989 8，respectively． Using this method， 3 samples were analyzed． As a result，
this method was simple， accurate and precise for these 5 organophosphorus pesticides detection．
Key words： gas chromatography； organophosphorus pesticide； pesticide multi－residue； wheat grain； inter－standard quantita-
tive method； analysis