全 文 ：第二军医大学学报　2008年 12月第 29卷第 12期　 http:// www.a jsmmu.cn
Academic Jou rnal of S econd Mili tary Medical Universi ty , Dec.2008 , Vol.29 , No.12 ·1479　 ·
DOI:10.3724/SP.J.1008.2008.01479 ·论　著·
多棘海盘车的化学成分
程　萍1 ,汤　华2 ,朴淑娟1 ,陆　祎1 ,王增蕾2 ,林厚文1＊
1.第二军医大学长征医院药学部 ,上海 200003
2.第二军医大学药学院海洋药物研究室 ,上海 200433
[ 摘要] 　目的:研究多棘海盘车正丁醇萃取部位的化学成分。方法:利用溶媒萃取和多种色谱法 , 对多棘海盘车的正丁醇萃
取部位化学成分进行分离 ,根据理化性质和现代波谱技术鉴定化合物的化学结构 , 并测试了其中 5 个化合物的生物活性。结
果:分离并鉴定了 5 个化合物 , 分别为多羟基甾体皂苷 amurensoside D(Ⅰ)、色氨酸(Ⅱ)和 3 个硫酸甾醇 , 包括 3β -O-硫酸酯
化-6α, 23β-二羟基-胆甾-9(11)-23-羰基-硫酸盐(Ⅲ)、3β-O-硫酸酯化-6α-羟基-胆甾-9(11), 20(22)-二双键
-23-羰基-硫酸盐(Ⅳ)和 3β-O-硫酸酯化-6α-羟基-麦角甾-9(11)-双键-23-羰基-硫酸盐(Ⅴ)。结论:化合物Ⅱ
是首次从多棘海盘车中得到 ,化合物Ⅲ和Ⅴ对稻瘟霉菌 P-2b 显示较强的药理活性。
[ 关键词] 　多棘海盘车;皂苷;硫酸甾醇
[ 中图分类号] 　R 284.1　　　[ 文献标志码] 　A　　　[ 文章编号] 　0258-879X(2008)12-1479-04
Study on chemical constituents of Starf ish Asterias amurensis
CHENG Ping 1 , TANG Hua2 , P IAO Shu-juan1 , LU Yi1 ,WANG Zeng-lei2 , L IN Hou-w en1＊
1.Depar tment o f Pharmacy , Chang zheng Hospital , Second M ilitary Medical Univer sity , Shanghai 200003 , China
2.Depar tment o f Marine D rugs , Schoo l of Pharmacy , Second M ilita ry Medical Univ ersity , Shanghai 200433
[ ABSTRACT] 　Objective:To inve stigate the chemical constituents in the BuOH ex tract o f Asterias amurensis.Methods:The
compounds w ere obtained by a combination of ex tr action and purification with suitable so lvent and multiple colum n
chromatog raphies;their structures were determined based on spectral analy sis and physicochemical proper ties.The bioactivitie s
of 5 compounds were te sted.Results:F ive compounds w ere iso lated and identified , and they w ere amurensoside D(Ⅰ),
tryptophan Ⅱ , and 3 sulfated stero ls , including 3β -O-sulfated-6α, 20β -dio l-cho lest-9(11)-en -23-one sodium sa lt
(Ⅲ), 3β-O-sulfated-6α-o l-chole sta-9(11), 20(22)-dien-23-one sodium salt(Ⅳ), and 3β-O-sulfated-6α-ol-
e rg ost-9(11)-en -23 -one sodium salt(Ⅴ).Conclusion:T ryptophan Ⅱ is obtained from this species for the fir st time;
compoud Ⅲ and compound Ⅴ exhibit potent inhibito ry activ ity against P yricularia ory zae P-2b.
[ KEY WORDS] 　Asterias amurensis;saponin;sulfated ste rols
[ Acad J Sec M il Med Univ , 2008 , 29(12):1479-1482]
[收稿日期] 　2008-05-05　　　　[ 接受日期] 　2008-07-31
[基金项目] 　国家高新技术研究发展计划(“ 863”计划)(2006AA09Z423);长征医院“三重三优”学科人才建设计划.Supported by Nat ional High
-tech R&D Program (863 Program)(2006AA09Z423)and Key Superior P rog ram of Changcheng H ospital.
[作者简介] 　程　萍 ,硕士生.
＊通讯作者(C orresp onding author).Tel:021-65585154 , E-mai l:f rank lin67@126.com
　　多棘海盘车(Asterias amurensis)是棘皮动物门
(Echinodermata)海星纲(Asteroidea)的一种海洋无
脊椎动物 ,在我国资源量丰富 ,但是国内仅有 1 篇研
究其化学成分硫酸甾体的文章 ,为了进一步对我国
多棘海盘车化学成分进行系统的研究 ,探索我国北
海海域海洋生物中次生代谢产物的化学结构特征 ,
我们对产自青岛海域的多棘海盘车进行了化学成分
研究。从多棘海盘车 95%醇提物的正丁醇萃取部位
分离得到了10个化合物 ,鉴定了其中5个化合物结构 ,即
amurensoside D(Ⅰ),色氨酸(Ⅱ),3β-O-硫酸酯化-6α,23β
-二羟基-胆甾-9(11)-23-羰基-硫酸盐(Ⅲ),3β-O
-硫酸酯化-6α-羟基-胆甾-9(11),20(22)-二双键
-23-羰基-硫酸盐(Ⅳ),3β-O-硫酸酯化-6α-羟基
-麦角甾-9(11)-双键-23-羰基-硫酸盐(Ⅴ)。其中
化合物Ⅱ为首次从多棘海盘车中分离得到。　　　
·1480　 · 第二军医大学学报　2008年 12月 ,第 29卷
1　材料和方法
1.1　仪器和试剂　Yamato MP -21型熔点测定仪
(温度计未校正 ,天津分析仪器厂);Varian INOVA
-400型 、Bruker AVANCE -600 型核磁共振仪;
MA T -212 型质谱仪;Quatrro 质谱仪(Micromass
公司);HSGF254高效薄层色谱板(烟台市芝罘黄务硅
胶开发试验厂);RP C18高效薄层色谱板(Merck 公
司);柱色谱硅胶(200 ～ 300 目 , 300 ～ 400目 , 烟台
市芝罘黄务硅胶开发试验厂);葡聚糖凝胶 Sephadex
LH-20(Pharmacia 公司);反相硅胶 ODS -A(50
μm YMC公司);VSP3050 中压泵(EYELA 公司);
LiChroprep Si60(40 ～ 63 μm)Lobar 柱(Merck 公
司);Waters 1525 泵 PDA 2996 检测器(Water s公
司);SymmetryPrep C18 , 7.8 mm ×300 mm(Wate rs
公司);二氯甲烷 、甲醇均为分析纯(上海化学试剂公
司);液相甲醇为色谱纯(Merck公司)。
1.2　样品　多棘海盘车样品于 2006 年 8月采于中
国青岛附近海域 ,其生物种属由中国科学院海洋研
究所廖玉林教授鉴定 。样品保存于第二军医大学药
学院海洋药物研究室 ,编号 DJHPC-0608。
1.3　提取和分离　多棘海盘车样本湿质量 14 kg ,
剪碎后用 95%乙醇 10 L 渗漉提取 2周 ,再用 10 L
甲醇回流提取 24 h ,合并 2 次浸提液浓缩至浸膏状
后用蒸馏水混悬 ,再依次用 3 500 ml乙酸乙酯萃取
8次 ,3 000 m l饱和正丁醇萃取 7次 。浓缩得乙酸乙
酯部分 201 g ,正丁醇部分 28 g 。正丁醇部分(28 g)
经大孔树脂柱 AmberliteXAD-2 色谱 ,乙醇 -水
(0%,10%, 30%,50%, 70%, 95%)梯度洗脱得到 6
个流分。乙醇-水 30%洗脱流分经Sephadex LH-
20 及 ODS 快速反相柱层析 , 得到化合物 Ⅱ(90
mg), 50%乙醇-水洗脱流分 、70%乙醇-水洗脱流
分 ,经 Sephadex LH -20及 ODS 快速反相柱层析 ,
HPLC-C18流动相为 55%甲醇-水和 65%甲醇-
水洗脱 ,得化合物Ⅰ(5.2 mg)和Ⅲ(3.5 mg)、Ⅳ(4.2
mg)、Ⅴ(5.5 mg)。
1.4　生物活性测定　稻瘟霉(Pyricularia ory zae)
P-2b菌株(日本东京大学分子细胞生物学研究所
提供),接种于土豆培养基斜面上 ,26 ～ 28℃培养 8 ～
14 d ,镜检使用。将化合物 Ⅰ ～ Ⅴ分别取 2.0 mg 超
声溶解于 1.0 m l水中。每一菌株斜面加蒸馏水 8 ～
10 ml ,刮下孢子 ,振摇片刻 ,四层纱布过滤 ,滤液加
入 2%～ 3%沙氏液体培养基 ,镜检调整至孢子数为
40 000个/ml ,用连续加样枪加入 96孔培养液中 ,每
孔加孢子液 50 μl ,再用微量加样枪在第一行孔中分
别加入 50 μl样品溶液 ,依次倍半稀释为 1 000 、500 、
250 、125 、63 、31 、16 、8 μg/ml浓度。每块板均做阴性
对照(水溶液)、空白对照(不加入样品试液)和阳性
对照(Rhizo xin 或 5-FU)。然后置于 26 ～ 28℃培
养箱中培养 17 h ,于倒置显微镜下观察孢子和菌丝
形态 ,确定活性结果 。
2　结　果
2.1　化合物 Ⅰ的结构鉴定 　白色无定型粉末 ,
Libermann-Burchard 反应阳性 。SIPI -MS 给出
准分子离子峰 m/z:607 [ M +Na] + , 583 [ M -
H] - ,得到相对分子质量为 584 ,结合13 CNM R推测
分子式为 C32H 56O 9 。SIPI-MS 中有 m/z:451 [ M
-H -132] ,推测该化合物连有五碳糖。1 HNMR
(600 MHz , MeOH -d6):0.93(3 H , s , 18 -H 3),
0.87(3 H , s , 19-H 3),0.93(6 H , d , J =6 Hz , 26-
H 3 ,27-H3),0.92(3 H , d , J =9 Hz , 21-H 3),3.5
(1 H ,m , H -3), 4.02(1 H , t , J =2.4 Hz , H -3),
4.30(1 H ,m , H -7), 4.23(1 H , d , J =7.2 Hz , 1′-
H),推测化合物 Ⅰ为连有 1 个木糖的胆甾醇结构 。
糖上其他氢的信号为:3.50(1 H , m ,3′-H),3.82(1
H ,dd ,5′eq-H), 3.16(1 H , t , J =9 Hz , 5′ax -H),
2′-H 和 3′-H 被溶剂峰掩盖;13 CNMR(600
MHz ,MeOH -d6):38.5(C-1),31.9(C -2), 72.1
(C-3), 32.8(C -4), 44.5(C -5), 72.5(C -6),
70.5(C-7), 35.7(C-8), 46.4(C -9), 37.3(C -
10), 22.0(C -11), 42.3(C -12), 43.3(C -13),
55.7(C-14),71.8(C -15), 42.5(C-16), 57.7(C
-17),15.0(C-18), 12.8(C -19), 37.0(C -20),
19.3(C-21),32.8(C -22), 28.6(C-23), 86.2(C
-24),32.0(C-25), 18.3(C -26), 18.3(C -27),
105.0(C-1′), 75.4(C-2′), 78.1(C-3′), 71.4(C
-4′), 66.8(C-5′)。化合物 Ⅰ的波谱数据与文献[ 1]
报道的 amurensoside D数据基本一致 ,因此鉴定化
合物 Ⅰ为 amurenso side D(图 1)。
2.2　化合物 Ⅱ的结构鉴定 　白色无定型粉末 。
m.p.288 ～ 289℃。ESI-MS给出准分子离子峰 m/
z:205 [ M +H ] + ,得相对分子质量为 204 , 结合
13
CNMR推测分子式为 C11H 12N 2O 2 , 1HNMR(600
MHz ,DMSO-d6):10.65(1 H , s , COOH), 7.59(1
H ,m , H -4),7.33(1H , m , H -7), 7.15(1 H , m , H
-2),7.06(1 H , m , H -6), 6.97(1 H , m , H -5),
第 12期.程　萍 ,等.多棘海盘车的化学成分 ·1481　 ·
3.58(1 H , dd , J =9.0 , 4.0 Hz , H -2′),3.30(1 H ,
dd , J =15.2 , 4.0 Hz , H -1′), 2.75(1 H , dd , J =
15.2 ,9.0 Hz , H -1′)。13 CNMR(600 MHz , DMSO
-d6):125.11(C-2),109.40(C-3), 119.31(C-
4),119.61(C-5),122.19(C-6),112.31(C-7),137.14
(C-8), 127.82(C-9), 27.57(C-1′), 55.59(C-2′),
172.33(C-3′)。以上数据与文献[ 2] 报道的色氨酸数据
基本一致。因此鉴定化合物Ⅱ为色氨酸(图 1)。
图 1　化合物Ⅰ ～ Ⅴ结构式
Fig 1　Chemical structure of compounds Ⅰ -Ⅴ
2.3　化合物 Ⅲ的结构鉴定 　白色无定型粉末 ,
Libermann-Burcha rd 反应阳性 。SIPI-MS 给出
准分子离子峰 m/z:557 [ M +Na] +和 511 [ M -
Na] - ,得相对分子质量为 534 , 结合1 HNM R和13
CNM R推测分子式为C27H 43O 7SNa 。1 HNMR(600
MHz , MeOH -d6):4.88(m , H -3), 5.24(1 H , br ,
d , J =5.4 Hz , H -11),1.00(3 H , s , H -18), 0.93
(3 H , s , H -19), 1.58(3 H , s , H -21),2.62(1 H ,
d , J =15 Hz , H -22), 2.79(1 H ,d , J =15 Hz , H -
22), 0.86(3 H ,d , J =2.4 Hz ,3 H-26),0.87(3 H ,
d , J =2.4 Hz , 3 H -27);13 CNMR(600 MHz ,
MeOH -d6):36.2(C -1), 29.5(C-2), 78.0(C-
3),31.2(C-4), 50.7(C -5), 68.4(C-6), 43.4(C
-7),35.7(C -8), 146.2(C -9), 38.3(C -10),
116.5(C-11),42.6(C-12), 41.7(C-13),54.1(C
-14),23.3(C-15), 25.2(C-16), 59.6(C-17),
13.6(C-18),19.3(C-19),73.8(C -20), 27.1(C
-21),55.0(C-22),211.7(C-23), 54.0(C-24),
24.4(C-25),22.5(C-26),22.7(C-27)。以上数
据与文献[ 3] 报道的数据基本一致 ,因此鉴定化合物
Ⅲ为 3β-O-硫酸酯化-6α, 23β-二羟基-胆甾-
9(11)-双键-23-羰基-硫酸盐(图 1)。
2.4　化合物 Ⅳ的结构鉴定 　白色无定型粉末 ,
Libermann-Burchard 反应阳性 。SIPI -MS 给出
准分子离子峰 m/z:539 [ M +Na] + , 493 [ M -
Na] - ,得相对分子质量为 516 , 结合1 HNMR和13
CNMR推测分子式为 C27H 41O 6 SNa。1HNMR(600
MHz ,py ridina-d6):0.52(3 H , s , H -18), 0.99(3
H ,d , J =4.2 Hz , H -26), 0.91(3 H , s , H -19),
1.74(3 H , s , H -27),2.27(3 H , s , H -21),3.78(1
H ,m , H -3),5.65(1 H , s , H -11), 6.13(1 H , s ,H
-22);13CNMR(600 MHz ,py ridina-d6):36.2(C-
1), 29.5(C-2), 77.7(C-3),31.2(C -4), 50.6(C
-5),68.4(C-6),41.9(C-7),36.0(C-8), 146.3
(C-9), 38.3(C -10), 116.3(C -11), 43.4(C -
12), 42.3(C -13), 53.8(C -14), 25.4(C -15),
28.7(C-16),56.6(C -17), 11.7(C-18), 20.5(C
-19), 154.0(C -20), 27.2(C -21), 124.9(C -
22),200.7(C -23), 51.6(C -24), 33.1(C -25),
19.3(C-26),19.6(C -27)。以上数据与文献[ 3] 报
道的数据基本一致 ,因此鉴定化合物Ⅳ为 3β -O -
硫酸酯化-6α-羟基-胆甾-9(11)-双键-23-
羰基-硫酸盐(图 1)。
2.5　化合物Ⅴ的结构鉴定　白色无定型粉末 , Liber-
mann-Burchard 反应阳性。SIPI-MS 给出准分子离
子峰m/z:571 [M+Na] + , 525 [ M -N a] - ,得相对分
子质量为 548 ,结合1HNMR和13 CNMR推测分子式
·1482　 · 第二军医大学学报　2008年 12月 ,第 29卷
为 C28 H 45 O 7 SNa 。1 HNMR(600 MHz , py ridina -
d6):0.79(3 H , d , J =7.2 Hz ,H -26), 0.89(3 H ,d ,
J =7.2 Hz ,H -27),0.98(3 H , d , J =7.2 Hz , H -
28), 0.94(3 H , s , H -18), 1.01(3 H , s , H -19),
1.58(3 H , s , H -21), 3.81(1 H ,m ,H -3), 5.24(1
H ,br d , J =6 Hz , H -11), 2.69(1 H , d , J =15.6
Hz ,H -22), 2.89(1H , d , J =15.6 Hz , H -22);13
CNM R(600 MHz ,py ridina-d6):36.3(C-1), 29.6
(C-2), 77.7(C -3), 31.3(C -4), 50.8(C -5),
68.4(C-6),42.6(C-7), 35.7(C-8), 146.2(C-
9), 38.4(C -10), 116.5(C -11), 43.4(C -12),
41.7(C-13),54.2(C-14),23.3(C -15), 25.5(C
-16),59.4(C-17), 13.6(C-18), 19.4(C-19),
73.8(C-20),27.1(C-21),53.8(C-22),215.8(C
-23),53.8(C-24), 30.0(C-25), 18.5(C-26),
21.4(C-27),11.99(C-28)。以上数据与 3β-O-
硫酸酯化-6α-羟基-麦角甾-9(11),20(22)-二
双键-23-羰基-硫酸盐数据一致[ 3] 。结构式见图
1。而参考文献[ 3] 中的分子式C27H43O 7SNa与波谱数
据 6.16(1H ,br , s ,H -22)有误[ 1] 。
3　讨　论
　　多棘海盘车功效为平肝和胃 、止痛及镇惊[ 4] 。
在沿海地区常被食用或作为肥料 ,国内较多报道它
的食用价值 、营养成分[ 5-7] 和抗菌活性研究[ 8] 。我
们对其 95%乙醇提取物有抗菌和抗癌活性的正丁醇
部分进行系统研究 ,并分离鉴定了其中 5个化合物 ,
稻瘟霉菌生物活性实验显示化合物 Ⅲ和Ⅴ的最小抑
菌浓度小于 7.9 μg/ml ,化合物 Ⅰ和Ⅳ的最小抑菌浓
度分别为大于 1 mg/ml和 0.5 mg/ml ,而化合物 Ⅱ
无抑菌效果。抗癌成分初步推测为皂苷类成分 ,需
要结合抗癌生物活性实验才能进一步证实抗癌成
分。
[参 考 文 献]
[ 1] 　Riccio R , Iorizzi M , Minale L , Oshim a Y , Yasum oto T .Starfi sh
sponins.Part 34.Novel steroidal glycoside su lphates f rom th e
sarfis h Asterias am urensis [ J] .J Chem Soc Perkin Trans I ,
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[ 2] 　李莉娅,邓志威 ,李　军 ,付宏征 ,林文翰.中国南海海绵 Cin-
achy rella australiensi s 化学成分研究[ J] .北京大学学报:医学
版 , 2004 , 36:12-17.
[ 3] 　Liu H W , Li J K ,Wang N L , Yao X S , Cai G P.Su lfated sterols
i slated f rom s tarfi sh Aster ias amu rensis Lu tken [ J] .J C hin
Ph arm S ci , 2006 , 15:1-5.
[ 4] 　常丽影 , 高淑华 , 李静辉 , 石向荣.多棘海盘车的生药学研究
[ J] .吉林中医药 , 2001:60.
[ 5] 　郝林华,李八方.多棘海盘车体壁胶原蛋白的研究[ J] .中国水
产科学, 1999 , 6:19-21.
[ 6] 　王长云,顾谦群 ,周　鹏.多棘海盘车用作新型海洋食品原料的
可行性研究[ J] .中国水产科学 , 1999 , 6:67-71.
[ 7] 　郝林华 ,李八方.多棘海盘车营养成分的研究[ J] .水产学报 ,
1998 , 22:385-388.
[ 8] 　刘文杰,周培根.多棘海盘车皂甙抗菌活性研究[ J] .天然产物
研究与开发 , 2005 , 17:283-286.
[本文编辑] 　尹　茶
·消　息 ·
第 26届世界腔道泌尿外科学术大会首次在上海隆重召开
　　由第二军医大学长海医院具体承办的第 26届世界腔道泌尿外科学术大会于 2008 年 11月 30 日在上海国际会议中心隆重
举行。这是首次由我国举办的高规格 、高水平的国际泌尿外科学术大会。第二军医大学长海医院副院长 、泌尿外科主任孙颖浩
教授任大会执行主席。来自近 60 个国家和地区的 1 500 名国际知名专家出席了会议。第二军医大学曹国庆政委 、王建仁副政
委参会。会议期间 ,大会组织了多项学术交流 , 除特邀报告 、专题讲座 、病例讨论 、腔内泌尿外科模拟器训练等传统的交流方式
外 ,会议还安排了多台精彩的卫星直播手术 , 包括最先进的 NOTES 、单孔腹腔镜 、机器人腹腔镜等技术。
　　此次会议不仅为国内外学者提供了良好的交流平台 , 同时也向全世界泌尿外科学界展示了我校 、乃至我国泌尿外科的学术
水平 ,对提升我校的学术地位 , 扩大我校的学术影响 ,推动我国泌尿外科事业有着重大意义。