全 文 ：成分之一。当前，关于地榆炒炭后鞣质变化及止血效果的
研究报道较多，但结果存在较大差异。有研究认为，地榆
炒炭后鞣质含有量下降［14-15］。也有研究结果显示，地榆炒
炭后鞣质含量增加，且能缩短小鼠出血时间［16-18］。
本实验采用《中国药典》2010 年版规定方法制备了生
地榆和地榆炭两个炮制品种，探讨了地榆炮制前后鞣质和
吸附力的变化，观察了地榆炮制前后对小鼠出血时间和凝
血时间的影响，并观察了对大鼠体外血栓形成和凝血参数
的影响。实验结果显示，地榆炒炭后与收敛止血功效相关
的成分鞣质含有量升高，吸附力增强;地榆炭组小鼠的出
血时间和凝血时间均显著低于生地榆组;地榆炭能够抑制
大鼠体外血栓的形成，缩短凝血酶原时间、凝血酶时间和
活化部分凝血酶时间，升高纤维蛋白原含量，说明地榆炒
炭后止血作用增强。本实验从地榆炒炭后鞣质含有量和止
血效果变化揭示了地榆炒炭止血的合理性。有关地榆炒炭
止血的机制及是否仅与鞣质的量的增加有关有待进一步深
入研究。
参考文献:
［1］ 高学敏． 中 药 学［M］． 北 京:中 国 中 医 药 出 版 社，
2002:338．
［2］ 郭淑艳，贾玉良，徐美术． 地榆炒炭前后止血作用的研究
［J］． 中医药学报，2001，29(4) :28．
［3］ 夏红旻，孙立立，孙敬勇，等． 地榆化学成分及药理活性
研究进展［J］． 食品与药品，2009，11(7) :67-69．
［4］ 黄雪芳，彭宣宪，傅文红． 甘草或冰片与虎杖和地榆配伍
对其抑菌能力的影响［J］． 江西医学院学报，1998，16
(2) :92-96．
［5］ 聂淑琴． 地榆提取物对老化加速小鼠抗氧化保护能力的影
响［J］． 国外医学·中医中药分册，2001，23(2) :89-90．
［6］ 国家药典委员会． 中华人名共和国药典:2010 年版一部
［S］． 北京:中国中医药出版社，2010:117-118．
［7］ 孟 江，许舒娅，陈 磊，等． 干姜“炒炭存性”质量标
准初探［J］． 中国中药杂志，2012，37(4):453-456．
［8］ 李五林，叶发青． 亚甲基蓝含量测定方法改进［J］． 数理
医药学杂志，1995，8(4) :334-336．
［9］ 连晓晓，胡昌江，余凌英，等． 藕节“炒炭存性”标准的
研究［J］． 中成药，2010，32(9):1545-1548．
［10］ 郭东艳，王 梅，唐志书，等． 大黄炒炭前后化学成分变化
及止血作用的实验研究［J］． 时珍国医国药，2010，21
(12):3152-3153．
［11］ 郭 齐，赵 乐，郝 伟，等． 牡丹皮有效组分重组方对
大鼠体外血栓形成及血液流变学的影响［J］． 中华中医药
杂志，2010，25(2):231-233．
［12］ 徐丹洋，马长振，陈佩东，等． 茅根炭止血机理的实验研
究［J］． 中成药，2010，32(12) :2114-2117．
［13］ 徐楚江． 中药炮制学［M］． 上海:上海科学技术出版社，
1985:57．
［14］ 赵伟康，洪筱坤，倪黎平． 对炒炭止血药炮制前后所含鞣
质的分析［J］． 上海中医药杂志，1963(7):39-40．
［15］ 陈新玉，李健和，黎银波，等． 地榆、地榆片、地榆炭的
质量标准研究［J］． 中国医药导报，2011，8(17) :64-67．
［16］ 龚跃新，何启章，骆美玲，等． 20 种中药炒炭前后的鞣质
含量测定［J］． 中国中药杂志，1991，16(11) :664-665．
［17］ 陈 旭． 地榆炭的炮制质量控制研究［J］． 中国热带医学，
2009，9(5) :971-972．
［18］ 郭淑艳，贾玉良，徐美术． 地榆炒炭前后止血作用的研究
［J］． 中医药学报，2001，29 (4) :28．
芙蓉叶粉的灭菌工艺研究
朱 倩， 付文焕， 李近磊， 张惠清， 李中东
(复旦大学附属华山医院，上海 200040)
收稿日期:2013-08-12
作者简介:朱 倩 (1983—) ，女，硕士生，主要从事临床药学研究及药物质量控制研究。Tel: (021)52889335，E-mail:zhuqianhua-
shan@ 163． com
摘要:目的 通过考察不同灭菌方法对芙蓉叶粉的灭菌效果，确定最佳灭菌工艺。方法 采用热压灭菌、60钴辐射灭
菌及低温间歇灭菌法对芙蓉叶粉进行灭菌，将符合微生物限度标准的样品，用高效液相色谱法测定芙蓉叶粉主要成分
芦丁和槲皮素的量。结果 热压灭菌法、60钴辐射灭菌法及低温间歇灭菌法 80℃下 4 次灭菌均符合药典微生物限度标
准;芙蓉叶粉主要成分在低温间歇灭菌法前后没有差异。结论 低温间歇灭菌法可用于芙蓉叶粉的灭菌。
关键词:芙蓉叶粉;灭菌方法;芦丁;槲皮素;高效液相色谱法
中图分类号:Ｒ282. 4 文献标志码:B 文章编号:1001-1528(2014)06-1320-04
doi:10. 3969 / j． issn． 1001-1528. 2014. 06. 049
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复方芙蓉叶糊 (曾用名:三圣散)为复旦大学附属华
山医院特色外用制剂，由芙蓉叶、赤小豆组方而成，功能
主治解毒排脓，用于消炎消肿［1-2］。临床应用 30 余年，效
果良好。该制剂主要原料为中药材原粉，且辅料为麦芽糖，
制备成糊剂后很难再对其进行常规灭菌，细菌数、霉菌酵
母菌数均难以控制，成品制剂的微生物限度检验结果很难
达到《中国药典》2010 年版要求。因此考虑在制剂制备
前，对原料中的中药原粉进行灭菌处理后再制成制剂，严
格控制制剂制备环境，以使成品制剂达到微生物限度要求。
芙蓉叶粉为本制剂主要原料，且为制剂的主要药用成分。
本实验通过对芙蓉叶粉进行热压灭菌、60钴辐射灭菌和低温
间歇灭菌，考察原料灭菌后的性状、主要成分含有量及灭
菌效果，确定该原料的最佳灭菌工艺。
1 仪器与试药
1. 1 仪器 Waters 2695 高效液相色谱仪，Dikama C18柱
(4. 6 mm × 250 mm，5 μm);Sartorius BL150 电子天平，
YXQ-LS-50S II型立式压力蒸汽灭菌器;DHG-9426 电热恒温
鼓风干燥箱，60钴射线源由中国科学院上海辐照中心提供。
1. 2 试药 芙蓉叶粉 (上海市虹桥饮片厂) ;芦丁对照品
(批号 100080-200707，中国药品生物制品检定所);槲皮素
对照品 (批号 100081-200406，中国食品药品检定研究院)。
1. 3 培养基 营养琼脂培养基 (批号 20101218)、玫瑰红
钠琼脂培养基 (批号 20101121)、蛋白胨水培养基 (批号
20101130)、胆盐乳糖培养基 (批号 20101207)、营养肉汤
培养基 (批号 20101211)、甘露醇氯化钠琼脂平板
(20101208)、溴化十六烷基三甲铵琼脂平板 (批号
20101208)，均购自上海盛思生化科技有限公司。
2 方法与结果
2. 1 灭菌方法
2. 1. 1 热压灭菌法［3］ 将 20 g 芙蓉叶粉称入干燥灭菌试
管中，密封。置压力蒸汽灭菌器中，121 ℃ 下，灭菌
30 min。
2. 1. 2 60钴辐射灭菌法［4-5］ 将 20 g 芙蓉叶粉称入干燥灭
菌试管中，密封。在中国科学院上海辐照中心进行60钴辐
射灭菌，辐照强度 6 kGy。
2. 1. 3 低温间歇灭菌法［6-7］ 将 5 g 芙蓉叶粉称入直径 90
mm有盖灭菌培养皿中，置电热恒温鼓风干燥箱中，60 ℃
恒温 1 h后，于 25 ℃保持 24 h，记为灭菌 1 次;同法在 60
℃下分别灭菌 2 次、3 次和 4 次。依上述方法同法操作，于
70 ℃与 80 ℃下分别各灭菌 2 次、3 次、4 次。
2. 2 微生物限度检查［8-9］ 对原粉及上述 3 种方法灭菌后
的样品，按《中国药典》微生物限度检查法，进行微生物
限度检查。按芙蓉叶原料占原制剂处方百分比 16%，换算
细菌数与霉菌数。灭菌前后原料性状及微生物限度检查结
果见表 1。
表 1 芙蓉叶粉不同灭菌方法微生物限度检查结果 (n =3)
方法 性状 细菌数 /(个·g － 1)
霉菌酵母菌数
/(个·g － 1)
金黄色葡萄球菌 铜绿假单胞菌 结果
原粉 + 96 × 103 37 × 102 未检出 未检出 不合格
热压灭菌 － ＜ 10 ＜ 10 未检出 未检出 合格
60钴辐射灭菌 + 0. 72 × 103 4. 8 未检出 未检出 合格
60 ℃间歇灭菌 2 次 25. 6 × 103 20. 8 × 102 不合格
3 次 + 14. 4 × 103 20. 5 × 102 未检出 未检出 不合格
4 次 11. 2 × 103 17. 5 × 102 不合格
70 ℃间歇灭菌 2 次 19. 2 × 103 22. 4 × 102 不合格
3 次 + 9. 6 × 103 16. 5 × 102 未检出 未检出 不合格
4 次 8 × 103 8. 8 × 102 不合格
80℃间歇灭菌 2 次 16 × 103 4. 8 × 102 不合格
3 次 + 8 × 103 1. 9 × 102 未检出 未检出 不合格
4 次 4. 8 × 103 0. 48 × 102 合格
性状 +为淡绿色粉末;性状 －为黄褐色粉末、结块
2 . 3 定量测定［10-12］
2. 3. 1 对照品溶液的制备 分别精密称取对照品适量，用
60%乙醇溶解后配制成含芦丁 105. 6 μg /mL、槲皮素 105. 4
μg /mL的对照品溶液。
2. 3. 2 供试品溶液的制备 精密称取芙蓉叶粉末 (过 80
目筛)2 g，于 100 mL 锥形瓶中，加入 60 mL 60%乙醇溶
液，称定质量，超声提取 3 h，冷却后用 60%乙醇溶液补
足质量。经 0. 45 μm 的滤膜滤过，取续滤液供 HPLC 测
定用。
2. 3. 3 色谱条件 Dikama C18色谱柱 (4. 6 mm × 250 mm，
5 μm)，流动相为甲醇-0. 1%磷酸水溶液洗脱 (45 ∶ 55) ，
体积流量 1 mL /min，柱温 35 ℃，检测波长 350 nm。在该
色谱条件下，芦丁、槲皮素分离良好。色谱图见图 1 ～ 2。
图 1 芦丁、槲皮素对照品 HPLC图谱
2. 3. 4 线性关系考察 分别精密量取对照品溶液 2、5、
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图 2 芙蓉叶粉供试品 HPLC色谱图
10、15、20 μL。依照上述色谱条件测定芦丁及槲皮素峰面
积，以峰面积为 Y，进样量为 X，进行线性回归分析，得芦
丁、槲皮素的回归方程分别为:Y芦丁 = 1 468 327X +
244 68，r = 0. 999 4;Y槲皮素 = 2992329X － 123978， r =
0. 999 3。结果表明，芦丁、槲皮素分别在 0. 2112 ～ 2. 112
μg、0. 2108 ～ 2. 108 μg间呈良好的线性关系。
2. 3. 5 精密度试验 对同一份芙蓉叶样品平行测定 5 次，
芦丁、槲皮素的 ＲSD分别为 2. 3%、3. 5% (n = 5)。
2. 3. 6 重复性试验 精密称同一份芙蓉叶样品 5 份，按上
述方法制备供试品溶液，参照上述色谱条件，分别测定芦
丁、槲皮素的重复性 ＲSD分别为 4. 26%、3. 66% (n = 5)。
2. 3. 7 回收率试验 精密称取已知含有量的芙蓉叶药材粉
末 9 份，每份 2 g，按样品含芦丁、槲皮素的 50%精密加入
芦丁、槲皮素对照品溶液，按相同方法制备供试品溶液，
进样量 10 μL。结果芦丁、槲皮素的回收率分别为 97% ～
104%，93% ～ 98%;精密度 (ＲSD)分别为 1. 7% ～
2. 0%、1. 5% ～ 2. 7% (n = 3)。
2. 3. 8 供试品溶液稳定性试验 取同一供试品溶液，分别
在 0、4、8、12、24 h 测定芦丁、槲皮素，其 ＲSD 分别为
2. 1%、4. 2% (n = 5)，表明供试品溶液在 12 h内稳定。
2. 3. 9 样品的测定 分别取不同灭菌工艺处理后的芙蓉叶
药材粉末，参照上述方法制备供试品溶液、按相同的色谱
条件进行含量测定。结果见表 2。
表 2 不同灭菌方法对芙蓉叶粉中芦丁及槲皮素的影响 (n =3)
成分
灭菌方式
未灭菌原粉 热压灭菌(120℃) 60钴辐射灭菌 低温间歇灭菌(80℃ 4 次)
芦 丁
槲皮素
质量分数 /% 0. 391 0. 296 0. 247 0. 386
C /% 100 75. 70 63. 17 98. 72
质量分数 /% 0. 266 0. 305 0. 322 0. 271
C /% 100 114. 66 121. 05 101. 88
C% =各灭菌方法粉末主要成分含有量 /未灭原粉主要成分含有量 × 100%
3 讨论
3. 1 微生物检查及定量测定结果显示，经过 3 种方法灭菌
后，芙蓉叶药材能够符合药典微生物限度标准的为热压灭
菌法、60钴辐射灭菌法及低温间歇灭菌法 80℃下 4 次灭菌。
对这 3 种灭菌后的芙蓉叶粉中芦丁槲皮素进行测定，表 2
结果显示，芙蓉叶主要的黄酮类成分在低温间歇灭菌法前
后差异不大;热压灭菌法及60钴辐射灭菌法对芙蓉叶中芦
丁及槲皮素的含有量有影响。
3. 2 本研究中发现，经热压灭菌后，芙蓉叶粉的性状有明
显改变，粉末颜色发生变化，且有结块现象，并且在放置
冷却过程中粉末容易吸潮不利于下一步的制剂生产，故该
药材粉末不适用于热压灭菌法。
3. 3 上述试验结果表明，通过60钴辐射灭菌，芙蓉叶粉中
主要成分含有量发生变化。使用经60钴辐射灭菌的芙蓉叶
粉制备芙蓉叶糊剂的过程中，在原处方比例条件下难以成
形。辐照灭菌技术与传统的蒸汽压力消毒灭菌、化学及过
滤灭菌法相比，辐照灭菌法可在常温下消毒灭菌而不破坏
易挥发成分及热敏性物质，穿透力强，消毒均匀快速，操作
简单等优点，但是对芙蓉叶进行辐照灭菌，会破坏其成
分［13-14］。这提示我们在选择辐射灭菌法对中药材进行处理
时需要注意进行充分考察验证。
综上所述，低温间歇灭菌法可作为芙蓉叶粉控制微生
物限度的灭菌方法。该方法操作不需要特殊设备，操作简
便、安全、快捷，药品质量稳定，成本低，可用于复方芙
蓉叶糊中芙蓉叶粉药材的灭菌。同时本研究为一些不耐高
温高压、湿热的中药原料灭菌提供了参考。
参考文献:
［1］ 秦 荣． 芙蓉叶外敷治疗静脉炎 25 例［J］． 传统医药，
2011，20(10) :75．
［2］ 任桂梅，于洪洲． 红小豆的临床应用［J］． 吉林中医药，
1998(6) :24．
［3］ 李顺祥，谢昭明，朱如彩． 不同灭菌方法对脂宁口服液中
有效成分含量的影响［J］． 中成药，2002，24 (7) :
511-513．
［4］ 彭晓霞，张振巍，张娜娜． 赤芍药材辐照前后芍药苷含量
变化研究［J］． 药物分析杂志，2010，30(3) :521-525．
［5］ 徐维恒，程 钢，黄赵刚． 不同辐照剂量 60 Co-γ 对制痂
酊灭 菌 效 果 的 影 响［J］． 中 成 药， 2012， 34 (7) :
1267-1270．
［6］ 萧 莉． 灵芝孢子粉低温间歇灭菌法除菌效果的考察［J］．
中国药业，2003，12(1) :52．
［7］ 章伟胜，陈燕芬，王 磊，等． 低温间歇灭菌法在外障眼
水中应用研究［J］． 临床医学工程，2011，18 (7) :
1102-1103．
［8］ 国家药典委员会． 中华人民共和国药典:2010 年版一部
［S］． 北京:中国医药科技出版社，2010:附录 XIII
B76-78．
［9］ 张晓明，李智勤． 奇正消痛贴膏的微生物限度检查方法的
研究［J］． 中成药，2007，2(2) :附 4-附 6．
［10］ 邾枝花，蒋大圆，倘余乐． HPLC 测定芙蓉膏水解产物中
2231
2014 年 6 月
第 36 卷 第 6 期
中 成 药
Chinese Traditional Patent Medicine
June 2014
Vol． 36 No． 6
槲皮素的含量［J］． 安徽医药，2009，13(11):1350-1351．
［11］ 卢金清，喻 樊，陈 黎，等． ＲP-HPLC 测定绞股蓝中芦
丁和 槲 皮 素 的 含 量［J］． 中 成 药， 2007， 29 (8) :
1193-1195．
［12］ 黄兴富，黎其万，刘宏程，等． 高效液相色谱法同时测定
苦荞中芦丁、槲皮素和山柰酚的含量［J］． 中成药，2011，
33(2):345-347．
［13］ 黄 阳． 药品辐照灭菌应用及存在问题浅析［J］． 中国制药
装备，2009，11:3-9．
［14］ 张立雯，江英桥，林 彤，等． 中药辐照检测研究现状概
述［J］． 中药材，2011，34(3):482-487．
系统生物学在经方配伍规律研究中的运用
林 飞1， 王 阶1，2*
(1． 湖北中医药大学，湖北 武汉 430061;2． 中国中医科学院广安门医院，北京 100053 )
收稿日期:2013-03-16
基金项目:科技部“重大新药创制”专项 (2012ZX09102-201-006)
作者简介:林 飞 (1972—) ，女，博士生，研究方向:病证结合、方证对应、方剂组分配伍规律。Tel:13601178399，E-mail:linfeix-
ixi@ aliyun． com
* 通信作者:王 阶 (1956—) ，男，博士生导师，主任医师，楚天学者，研究方向:中西医结合心血管病治疗。Tel: (010)88001473，
E-mail:wangjie0103@ 126． com
摘要:以中医理论整体观念为指导，应用系统生物学的综合性、整体性和多学科交叉的研究方式，运用基因组学、转
录组学、蛋白质组学、代谢组学深入研究经方配伍规律，探析经方配伍规律的物质基础和相关作用机制，挖掘经方配
伍规律的科学内涵，有助于中药新药研发和指导临床用药，进一步促进中医药发展。
关键词:系统生物学;组分配伍规律;整体观念;病证结合;方证对应
中图分类号:Ｒ94 文献标志码:B 文章编号:1001-1528(2014)06-1323-03
doi:10. 3969 / j． issn． 1001-1528. 2014. 06. 050
经方是汉代以前经典医药著作中记载的方剂， 《伤寒
杂病论》中的方剂，以其言简意赅、法度严密作为经方代
表，力专效宏则是经方生命力核心关键所在。经方组分配
伍规律也一直以来作为众医家和研究者聚焦的靶点，以方
证对应为核心在病证结合的基础上剖析经方组分配伍规律，
对探析经方高效组合作用机制、提高临床疗效以及新药研
发有重要的意义。关于经方的现代研究方法主要有:化学
成分研究、药理研究 (拆方研究、配比研究、药对研究)、
血清药理学研究、有效成分配伍研究、体内化学成分及药
物动力学研究、数学量化研究等等［1］。研究方法较多且分
工越来越精细，甚至出现所谓的“破碎化”现象，但是经
方组分配伍规律的内在机制，却仍需进一步深入探究。
1 系统生物学与整体观念
1. 1 系统生物学与方剂 系统生物学是在细胞、组织、器
官和生物体整体水平上研究结构和功能各异的生物分子及
其相互作用，并通过计算生物学来定量阐明和预测生物功
能、表型和行为。主要包括:基因组学、转录组学、蛋白
质组学、代谢组学、相互作用组学以及表型组学等［2］。目
标是利用计算模型，定向定量描述完整的机体对环境干扰
所起反应，预测“组件到组件”关系的功能性结果［3］。
方剂是辨证、辨病，在确定立法的基础上，根据组方
原则和结构，选择适宜药物组合而成的药方和制剂。 《素
问·至真要大论》言:“主病之为君，佐君之谓臣，应臣之
谓使”，由此提出君臣佐使的组方原则。以病证结合为基
点，与证候相对应，以若干药物配伍而成，是实施与体现
治法的方式与手段。方剂的配伍规律和配伍变化决定着临
床疗效，主要为①方剂配伍规律和配伍变化决定中药的不
同功效;②药物功效与物质基础关系密切;③配伍规律影
响药物的分离提取［4］。
1. 2 系统生物学、整体观念的统一性 生物学物质基础是
人类认知各种疾病及证候发生、发展、转归的物质本质，
系统生物学使用的是大通量的生物信息测定和生物信息学、
生物统计学相结合的研究策略，涵盖了中医独特理论体系
的特点之一整体观念，即人自身整体观和天人合一观。系
统生物学认为构成生物系统的组分在结构上不可区分，且
相互影响，相互作用，并认为各个生物系统构成一定的网
络，这个网络纵横交错，往来有序，网络间的各个信号通
过相关通道有条不紊地、不断地进行多靶点、多组分、多
层次的作用与联系。系统生物学更加注重复杂生命系统中
所有成分以及它们之间的动态关系，而不是将机体作为孤
立的很多部分，这种整体思想与中医证候体系的 “整体
观”、“动态观”、“辨证观”等不谋而合［5］。中医学整体观
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