免费文献传递   相关文献

赶黄草慢性肾脏毒性研究



全 文 :赶黄草慢性肾脏毒性研究*
谢惠波,汤艳,刘青青
(泸州医学院公共卫生学院,泸州 646000)
摘 要 目的 对赶黄草的慢性肾脏毒性进行研究,为赶黄草在食品、药品中的开发应用提供科学依据。方法 将
48只 SD大鼠随机分为 0.9%氯化钠溶液组和生药 5,10,20 g·kg-1赶黄草组,每组 12只,每天灌胃 1次,每周 6天,星期
日停 1天,持续 3个月。取血检查血清尿素( Urea) 、尿酸( UA) 、肌酐( Cre) ,苏木精-伊红( HE) 染色观察肾脏的形态结
构。结果 赶黄草各组大鼠体质量与 0.9%氯化钠溶液组比较均差异无统计学意义( P>0.05) ;赶黄草各组动物血清尿
素、尿酸、肌酐等肾功能指标与0.9%氯化钠溶液组比较均差异无统计学意义( P>0.05) ;赶黄草各组肾脏脏器系数与0.9%
氯化钠溶液组比较差异无统计学意义( F= 1.37,P= 0.268) ;赶黄草各组大鼠肾脏组织学观察无明显异常,仅见间质内少
量炎性细胞浸润、水肿与点状坏死。结论 长期给予赶黄草灌胃对大鼠肾脏的形态结构和功能无明显的损伤。
关键词 赶黄草;毒性,肾脏,慢性
中图分类号 R282.71; R285.5 文献标识码 A 文章编号 1004-0781( 2015) 08-1007-03
Study on Chronic Nephrotoxicity of Penthorum chinense
XIE Huibo,TANG Yan,LIU Qingqing( School of Public Health,Luzhou Medical College,Luzhou 646000,
China)
ABSTRACT Objective To study chronic nephrotoxicity of Penthorum chinense.To provide a scientific evidence for the
development and application of Penthorum chinense in food and drug. Methods 48 SD rats were randomly divided into 4
groups ( n = 12) ,0.9% sodium chloride solution group and three Penthorum chinense treated groups. The Penthorum chinense
groups were treated by intragastric administration with 5,10,20 g·kg-1 crude drug once a day for 3 months.The levels of Urea,
UA,Cre in serum were detected,and the HE dyeing was chosen to observe the kidney morphology. Results The body weight,
nephritic organ quotiety,and the level of Urea,UA,and Cre in each exposure group have no statistically significant difference
compared with 0. 9% sodium chloride solution group ( P > 0. 05 ) . There were no obvious kidney morphology changes in the
Penthorum chinense group( F= 1.37,P = 0.268) . Conclusion The kidney morphology and function of rat shows no apparente
injury after long-term intragastric administration of Penthorum chinense.
KEY WORDS Penthorum chinense; Toxicity,kidney,chronicity
赶黄草(Penthorum chinense Pursh)为虎耳草科扯根
菜属植物赶黄草的干燥地上部分,主要分布于华北、华
东、中南及陕西、四川和贵州等地。近年来逐渐采用家
种,大量种植于四川省古蔺县境内[1]。赶黄草全草性温、
味甘、无毒,具清热、利尿、解毒、活血、平肝、健脾、祛黄疸
等功效,主治黄疸、水肿、经闭、血崩、带下、跌打损伤,以及
各型肝炎、胆囊炎、脂肪肝等[2]。目前针对赶黄草的药物
作用研究比较多,对于其毒性作用研究甚少。肾脏是体
内最大的排泄器官,故笔者以斯泼累格·多雷(Sprague
Dawley,SD)大鼠为研究对象,研究赶黄草的慢性肾脏毒
性,为赶黄草的开发利用提供科学的实验依据。
1 材料与方法
1.1 动物 清洁级 SD大鼠 48只,体质量 90~120 g,
收稿日期 2013-11-12 修回日期 2014-02-15
基金项目 * 泸州市科技局 2012 年自然科学基金资助项
目[2012-S-36(1 /14)]
作者简介 谢惠波(1961-),男,江苏常州人,教授,学士,
功能性食品研发及卫生毒理学。电话:(0)18989132788,E-
mail:lzxiehuibo@ 163.com。
雌雄各半,活动能力相近。购自泸州医学院实验动物
中心,实验动物生产许可证号:SCXK(川)2008-0017。
用全营养饲料及自来水喂养,动物房自然采光,室温
(25±1)℃,相对湿度(50±10)%,每天换垫料,每周消
毒 2次。
1.2 试药 赶黄草来源于四川古蔺宏安药业公司,经
泸州医学院药学院孙琴教授鉴定为虎耳草科植物扯根
菜(Penthorum chinense Pursh)的干燥全草,将全草用水
浸煮后干燥成粉。
1.3 仪器 FA1104N型电子天平(上海民桥精密科学
仪器有限公司,感量:0.1 mg);BECKMAN CS-15R 台式
离心机(美国 Beckman 公司);LEICA EM UC7 切片机
(德国 LEICA公司);奥林巴斯 BX51生物显微镜及图像
分析系统(日本 Olympus 公司);西门子 ADVIA1800 全
自动生化分析仪及原厂配套肾功检测试剂(德国
Siemens公司)。
1.4 实验分组及处理 将大鼠自然喂养 1 周后随机
分为:0.9%氯化钠溶液组,生药 5,10,20 g·kg-1赶黄
草组,每组大鼠 12 只,雌雄各半。将赶黄草棕褐色粉
·7001·医药导报 2015年 8月第 34卷第 8期
末(含量为生药 13.5 g·g-1)溶于双蒸水,赶黄草组各
自分别按生药 5,10,20 g·kg-1进行赶黄草灌胃,0.9%
氯化钠溶液组给予生药 20 g·kg-1赶黄草组等容量
0.9%氯化钠溶液灌胃,每天灌胃 1 次,每周 6 天,星期
日停一天,连续灌胃 3个月。
1.5 指标观察
1.5.1 一般常规观察 实验期间每天观察大鼠一般
状态、体征、摄食量、饮水及粪便状况。以间隔 15 d 的
大鼠体质量为体质量指标。
1.5.2 肾功指标检查 取血检查血清尿素(Urea)、尿
酸(uric acid,UA)、肌酐(creatinine,Cre)等肾功能指
标。
1.5.3 病理学检查 处死大鼠并进行详细的系统尸
检,解剖中注意观察肾脏的色泽、质地、肿块及空腔脏
器的黏膜完整性及色泽,并根据体质量计算其脏器系
数[脏器系数 = 器官(湿)质量 /体质量(mg·g-1)]。
肾脏经 10%中性甲醛溶液固定后,于相同部位分别取
一块组织,经梯度乙醇脱水、二甲苯透明、石蜡包埋、切
片(厚 4 mm)、苏木精-伊红(hematoxylin-eosin,HE)染
色,进行病理组织学镜检,记录组织改变,并观察有无
肾结晶。
1.6 统计学方法 应用 SPSS13.0 版软件进行统计分
析,多组间均数比较采用单因素方差分析,两两比较用
SNK法,以 P<0.05为差异有统计学意义。
2 结果
2.1 一般情况 在实验周期内,赶黄草各组大鼠的精
神状态,摄食量、饮水及粪便等一般情况与 0.9%氯化
钠溶液组比较无明显异常改变。赶黄草各组大鼠体质
量与 0.9%氯化钠溶液组比较均差异无统计学意义
(P>0.05)。见表 1。
2.2 赶黄草对大鼠肾功指标的影响 赶黄草连续灌
胃 3个月后,赶黄草各组动物 Urea、UA、Cre 等肾功指
标与 0.9%氯化钠溶液组比较未见明显变化,均差异无
统计学意义(P>0.05)。见表 2。
2.3 系统尸检及脏器系数 给予赶黄草 3 个月后,各
组大鼠肾脏均无肉眼可见的病理改变(图 1)。赶黄草
生药 5,10,20 g·kg-1赶黄草组肾脏脏器系数依次为
(5.33±0.53),(5.04±0.89) ,(5.49±0.53) ,与 0.9%氯
化钠溶液组(5.47±0.57)比较,差异无统计学意义(F =
1.37,P= 0.268)。
2.4 组织学检查 赶黄草给药 3 个月后,进行病理组
织学检查,赶黄草各组大鼠肾脏组织学无明显异常,仅
见间质内少量炎性细胞浸润、水肿与点状坏死。见图
2。
3 讨论
赶黄草是虎耳草科扯根菜属植物扯根菜的干燥地
上部分,为苗族传统药物[3]。张中贤等[4]研究发现赶
黄草水提物能明显促进正常大鼠胆汁的分泌,抑制胆
管结扎和 1-萘异硫氰酸酯所致的大鼠胆汁淤积,降低
血清中总胆红素的含量,以及碱性磷酸酶、谷酰转肽
酶、丙氨酸氨基转移酶 (alanine aminotransferase,
ALT)、 天 冬 氨 酸 氨 基 转 移 酶 (aspartale
aminotransferase,AST)的活性。张蕊[5]研究发现赶黄
草茶剂作用于 50%乙醇诱导的小鼠肝损伤模型,血清
转氨酶有明显降低作用,其低、中、高剂量组均能明显
降低小鼠血清中 ALT、AST 的活性。丁庆[6]用赶黄草
提取物进行抗突变动物实验,结果表明高低剂量总皂
苷对环磷酰胺引起的小鼠微核率均有明显对抗作用。
袁叶飞等[7]用赶黄草原料药提取而成的肝苏颗粒,对
82例乙型肝炎患者进行保肝治疗,患者治疗后血清肝
纤维化指标 HAHPCⅢ水平明显降低。以上研究表明
赶黄草具有保肝、利胆、抗肝纤维化等作用。
本研究对大鼠给予赶黄草连续灌胃 3 个月,3 个
剂量组分别相当于临应用量的 20,40和 80倍,结果显
示大鼠行为活动正常,一般情况良好,各组大鼠血清
Urea、UA、Cre等肾功指标未见异常,大鼠肾脏均无肉
表 1 4组大鼠体质量的变化
Tab.1 Variation of body weight in four groups of rats g,x±s,n= 12
组别 灌胃前 /
灌胃后
15 d 30 d 45 d 60 d 75 d 90 d
0.9%氯化钠溶液组 126.35±18.31 146.68±27.32 207.09±52.34 269.47±58.23 311.35±77.45 309.34±56.34 349.34±97.34
赶黄草
生药 5 g·kg-1组 125.91±12.46 143.45±24.55 205.50±33.28 262.40±46.51 302.70±64.18 310.33±66.94 331.71±77.27
生药 10 g·kg-1组 121.75±14.37 153.08±25.42 215.91±48.97 273.33±75.13 304.83±95.97 310.82±88.41 368.00±107.09
生药 20 g·kg-1组 124.92±11.40 147.46±16.25 211.31±29.42 272.61±51.63 294.53±74.90 300.15±61.87 336.77±71.39
F 0.199 0.304 0.283 0.118 0.115 0.089 0.261
P 0.897 0.823 0.837 0.949 0.951 0.966 0.853
·8001· Herald of Medicine Vol. 34 No. 8 August 2015
表 2 4组大鼠连续灌胃 3个月后肾功能指标
Tab. 2 Renal function of four groups of rats after
continuous intragastric administration for three months
x±s,n= 12
组别
Urea /
(mmol·L-1)
UA Cre
(μmol·L-1)
0.9%氯化钠溶液组 7.12±1.01 52.21±17.03 40.80±4.97
赶黄草
生药 5 g·kg-1组 6.93±0.40 45.04±13.78 40.43±3.19
生药 10 g·kg-1组 6.82±0.65 45.01±15.97 41.08±3.93
生药 20 g·kg-1组 6.63±0.77 39.53±13.23 39.48±3.96
F 2.562 1.133 0.295
P 0.070 0.350 0.829
A.0.9%氯化钠溶液组; B.生药 5 g·kg-1赶黄草组; C.生药
10 g·kg-1赶黄草组; D.生药 20 g·kg-1赶黄草组
图 1 4组大鼠肾脏肉眼观察
A.0.9%sodium chloride solution group;B.crude drug 5 g·kg-1
group;C.crude drug 10 g·kg-1 group;D.crude drug 20 g·kg-1 group
Fig.1 Appearance of kidneys in four groups of rats
A.0.9%氯化钠溶液组; B.生药 5 g·kg-1赶黄草组; C.生药 10 g·kg-1赶黄草组; D.生药 20 g·kg-1赶黄草组
图 2 4组大鼠肾脏组织病理学切片(HE,×200)
A.0.9%sodium chloride solution group;B.crude drug 5 g·kg-1 group;C.crude drug 10 g·kg-1 group;D.crude drug 20 g·kg-1 group
Fig.2 Histopathology of kidneys in four groups of rats(HE,×200)
眼可见的病理改变,大鼠肾脏组织学观察仅见间质内
少量炎症细胞浸润及水肿与点状坏死,提示长期赶黄
草灌胃对大鼠肾脏的形态结构和功能无明显的损伤。
参考文献
[1] 宋丽,臧志和,廖洪利,等.赶黄草的研究进展[J].西南军
医,2007,9(2):87-88.
[2] 全国中草药汇编编写组.全国中草药汇编:下册[M].北
京:人民卫生出版社,2000:480.
[3] 中国科学院植物研究所.中国高等植物属检索表[M].北
京:科学出版社,1979:205.
[4] 张中贤,黄剑臻.赶黄草水提取物利胆退黄作用的研究
[J].热带医学杂志,2008,8(2):125-127.
[5] 张蕊.赶黄草用于酒精性肝病茶剂的制备方法:四川.
CN201010165639.7[P].2010-09-15.
[6] 丁庆.扯根菜总皂苷及其抗肝炎和抗突变作用:北京.
CN200410039582.0[P].2005-08-24.
[7] 袁叶飞,胡祥宇,欧贤红.赶黄草与槲皮素预防酒精性脂
肪肝的比较研究[J].中国药学杂志,2011,46(21):1635-
1638.
DOI 10.3870 /yydb.2015.08.005
·9001·医药导报 2015年 8月第 34卷第 8期