全 文 ：基金项目:山东省 2009—2010 年度中医药科技发展计划项目(编号:2009 － 201)
活血通经消瘀巴布剂组方药物木芙蓉叶等
乙醇提取工艺研究
杨一丁1 张 伟2 杨文婷3 高文勇4
(1 青岛市市立医院，青岛，266071;2 青岛市海慈医疗集团，青岛，266033;3 山东中医药大学药学院，
济南，250355;4 青岛四方嘉兴路街道人民路社区卫生服务站，青岛，266033)
摘要 目的:研究活血通经消瘀巴布剂组方药物的乙醇提取工艺。方法:采用正交设计法，以醇浸物和大黄素的含量为考察指
标优选醇提取工艺。结果:最佳提取工艺为用浓度为 60%的乙醇，提取 3 次，每次乙醇用量为药材重量的 6 倍，每次提取时间为
40 min。结论:优选的活血通经消瘀巴布剂组方药物的乙醇提取工艺稳定可行。
关键词 醇浸物;大黄素;高效液相色谱法;正交设计
Study on Ethanol Extraction Technology on Components of Huoxue Tongjing Xiaoyu Cataplasma Such
as Cottonrose Hibiscus Leaf
Yang Yiding1，Zhang Wei2，Yang ewnting3，Gao Wenyong4
(1 Department of Traditional Chinese Medicine，Qingdao Municipal Hospital，Qingdao 266071，China;2． Qingdao Haici Medical
Group，Qingdao 266033，China;3 College of Pharmacy，Shandong University of Traditional Chinese Medicine，Jinan 250355，China;
4 Community Health Service Station of Qingdao Sifang Jiaxing Street，Qingdao 266071，China)
Abstract Objective:To study ethanol extraction of components of Huoxue tongjing xiaoyu cataplasma．Methods:By orthogonal design，
the ethanol extraction process was optimized with the yield of the contents of alcohol extracts and emodin as indexes． Ｒesults:The opti-
mum alcohol extraction process was obtained with 60% alcohol，extracting twice for 40 minutes，and the amount of ethanol was six times
over the weight of the herbal． Conclusion:The optimum extraction process of Huoxue tongjing xiaoyu cataplasma by orthogonal design is
stable and feasible．
Key Words Alcohol extracts;Emodin;High-performance capillary electrophoresis;Orthogonal design
doi:10． 3969 / j． issn． 1673 － 7202． 2013． 04． 035
我们在本实验以醇浸物和大黄素为指标，对活血
通经消瘀巴布剂组方药物中的木芙蓉、紫草和大黄进
行乙醇提取工艺正交设计优化实验研究，考察乙醇浓
度，乙醇用量(倍) ，提取时间(h) ，提取次数等因素，确
定最佳工艺条件。
1 仪器、试剂与药材
1. 1 仪器 Agilent 1100 型高效液相色谱仪二元泵
DAD检测器(美国) ;JA2003 型电子分析天平(上海) ;
超声波清洗器:KQ100 型(昆山市超声波仪器厂)工作
频率 40 kHz，输出超声电功率 100 W;BuchiＲ215V 型
旋转蒸发仪(瑞士)。
1. 2 试剂 大黄素对照品(中国药品生物制品检定
所，批号:0756 － 00110) ;甲醇为色谱纯(美国天地试剂
公司) ，乙醇为药用，水为重蒸馏水，其余试剂均为分析
纯。
1. 3 药材 药材购自安徽亳州，经青岛市药检所吴爱
英主任中药师鉴定，木芙蓉叶为锦葵科植物木芙蓉 Hi-
biscus mutabilis L. 的叶，大黄为 Ｒheum officinale Baill.
的干燥根及根茎，紫草为紫草科植物新疆紫草 Arnebia
euchroma(Ｒoyle)Johnst的干燥根。
2 实验方法
2. 1 醇浸物测定方法 量取醇提液 10 mL，精密称
重，置已干燥至恒重的蒸发皿中，水浴蒸干后，于
105℃干燥 3 h，置干燥器中冷却 30 min，迅速精密称
重。计算醇浸物含量［(g /g)× %］。
2. 2 大黄素含量测定方法［1］
2. 2. 1 色谱条件 色谱柱用十八烷基硅烷键合硅胶
为填充剂(4. 6 mm × 250 mm，5 μm，Lichrospher，汉邦
科技) ，流动相为甲醇 － 0. 1%磷酸溶液(85∶ 15) ，流速
1. 0 mL /min;检测波长为 254 nm。理论塔板数按大黄
素峰计算应不低于 1500。
2. 2. 2 标准曲线的绘制 精密称取大黄素对照品
1. 408 2 mg，置 10mL 量瓶中，加甲醇至刻度，摇匀，精
密量取 1 mL置 25 mL量瓶中，加甲醇至刻度，摇匀，制
·054· WOＲLD CHINESE MEDICINE April． 2013，Vol． 8，No． 4
得浓度为 5. 638 2 μg /mL的大黄素对照品溶液。分别
精密吸取大黄素对照品溶液 1. 0、2. 0、4. 0、6. 0、10. 0、
15. 0μL，按 2. 1. 1 色谱条件测定峰面积积分值，以峰面
积积分值为纵坐标、大黄素量为横坐标，结果在选定的
色谱条件下，大黄素含量在 0. 005 6 ～ 0. 084 μg的范围
内均呈现良好的线性关系;回归方程为 y = 361658x －
368，r = 0. 999 5。
2. 3 正交方案设计 以醇浸膏和大黄素提取率为指
标，以乙醇浓度，乙醇用量(倍) ，提取时间(h) ，提取次
数为因素，进行 L9(3
4)的正交试验。正交因素和水平
见表 1。
表 1 L9(3
4)正交试验因素和水平表
因素 1 2 3
乙醇浓度(A) 50 60 70
溶剂量(倍) (B) 6 8 10
提取时间(h) (C) 40 60 80
提取次数(D) 1 2 3
2. 4 乙醇提取实验 将木芙蓉叶、紫草和大黄等 3 味
药药材细粉(过 40 目筛) ，按处方比例量分别称取 9
份，每份 100 g，分别按 L9(3
4)表中给出的条件进行提
取，提取时间从沸腾开始时记录。提取结束后，分别合
并提取液，旋转蒸发回收乙醇至适量，再以无水乙醇定
容至 100. 00 mL，得 1 － 9 号样品液。
3 正交试验结果
1)分别精密量取“2. 4 乙醇提取实验”制得的 1 －
9 号样品溶液各 10 mL，按“2. 1 醇浸物测定方法”分别
测定并计算 1 － 9 号样品醇浸物含量(mg /g)。每个样
品重复测定 3 次，计算 3 次平均值。结果见表 2。2)将
1)步制得的其中 1 份 1 － 9 号醇浸物分别加 8%的盐酸
10. 00 mL溶解，超声处理 2 min，再加三氯甲烷 10 mL，
加热回流 1h，放冷，置分液漏斗中，用少量三氯甲烷洗
涤容器，并入分液漏斗中，分取三氯甲烷层，酸液再用
三氯甲烷提取 3 次，每次 10 mL，合并三氯甲烷液，减
压回收三氯甲烷至干，残渣用甲醇溶解、转移并定容至
10 mL，摇匀，滤过。取续滤液，按“2. 2 大黄素含量测
定方法”分别进样、测定，计算 1 － 9 号样品大黄素含量
(mg /g %)。每个样品重复测定 3 次，计算 3 次平均
值。结果见表 2。
表 2 正交试验表及结果(n = 3)
试验号 A B C D 醇浸物含量［(g /g)× %］ 大黄素提取率［(mg /g)× %］
1 1 1 1 1 0. 9315 135. 71
2 1 2 2 2 1. 1121 148. 22
3 1 3 3 3 1. 4187 179. 85
4 2 1 2 3 2. 2883 219. 52
5 2 2 3 1 1. 1755 166. 42
6 2 3 1 2 2. 1562 207. 15
7 3 1 3 2 1. 9205 188. 38
8 3 2 1 3 2. 4117 238. 32
9 3 3 2 1 1. 2096 160. 22
醇浸物 K1 3. 4623 5. 1403 5. 4994 3. 3166 ∑x = 14. 6241
K2 5. 62 4. 6993 4. 61 5. 1888 CT =(∑x)2 /9 = 23. 7627
K3 5. 5418 4. 7845 4. 5147 6. 1187
Ｒ 1. 9777 0. 441 0. 9847 2. 8021
大黄素 K1 463. 78 543. 61 581. 18 462. 35 ∑x = 14. 6241
K2 593. 09 552. 96 527. 96 543. 75 CT =(∑x)2 /9 = 23. 7627
K3 586. 92 547. 22 534. 65 637. 69
Ｒ 129 9. 35 53. 2 175
表 3 醇浸物方差数据分析(n = 3)
方差来源 A C D 误差 B
SS 0. 9984 0. 1966 1. 3609 0. 0365
V 2 2 2 2
MS 0. 4992 0. 0983 0. 6804 0. 01825
F 27. 36 5. 39 37. 3
P ＜ 0. 05* ＞ 0. 05 ＜ 0. 05*
注:F0. 01(2. 2)= 99. 00，F0. 05(2. 2)= 19. 00，* P ＜ 0. 05，＊＊P ＜ 0. 01。
4 结果分析
以醇浸物提取率为指标，影响因素从大到小依次
为 D ＞ A ＞ C ＞ B;其中 A因素和 D 因素有统计学意义
(P ＜ 0. 05) ，B因素和 C因素无显著影响;最佳条件为
A2B1C1D3。以大黄素提取率为指标，影响因素从大到
小依次为 D ＞ A ＞ C ＞ B，其中 A 因素和 D 因素有非常
显著影响(P ＜ 0. 01) ，C 因素有显著影响(P ＜ 0. 05) ，
B因素无显著影响;最佳条件为 A2B2C1D3。综合醇浸
·154·世界中医药 2013 年 4 月第 8 卷第 4 期
物和大黄素提取率，考虑到 B 因素对这两种指标成分
提取率均无显著影响，选择 A2B1C1D3 方案进行工艺
验证实验，结果该方案两种指标成分提取率分别醇浸
物为 2. 4208［(g /g)× %］，大黄素为 241. 22［(mg /g
× %］。因此确定 A2B1C1D3 为最终生产工艺条件，即
用浓度为 60%的乙醇，提取 3 次，每次乙醇用量为药
材重量的 6 倍，每次提取时间为 40min。
表 4 大黄素方差数据分析(n = 3)
方差来源 A C D 误差 B
SS 3547 560 5133 14. 8
V 2 2 2 2
MS 1773. 5 280 2566. 5 7. 4
F 240 37. 8 347
P ＜ 0. 01＊＊ ＜ 0. 05* ＜ 0. 01＊＊
注:F0. 01(2. 2)= 99. 00，F0. 05(2. 2)= 19. 00，* P ＜ 0. 05，＊＊P ＜ 0. 01。
5 工艺说明
5. 1 关于提取方案 该巴布剂组方药物中的木芙蓉、
紫草和大黄，及提取挥发油后的乳香、没药、三棱、莪术
等药药渣均含有醇溶性成分。木芙蓉主要化学成分为
黄酮苷、酚类、氨基酸、鞣质、还原糖、甾类化合物和挥
发油类成分，其中黄酮苷是其主要活性成分［2 － 3］，具有
抗炎镇痛等药理作用［4］。姚莉韵［5］实验研究认为乙
醇回流提取总黄酮效果大大高于水煎法、温浸法，回流
提取的最佳工艺条件是用 12 倍量 70% 乙醇提取 3
次，每次 3h，其中乙醇浓度是影响提取率的主要因素。
大黄 主 要 含 蒽 醌 类 化 合 物，总 量 为 1. 01% ～
5. 19%［6］。蒋孟良等［7］比较几种提取方法对总蒽醌
提取影响，结果认为醇提 ＞渗漉 ＞水提，热提强于冷
提。朱雪瑜等［8］研究认为 60% ～ 80%乙醇浓度对大
黄总蒽醌(游离蒽醌和结合蒽醌)有较好的提取效果，
最佳工艺为用 70%的乙醇提取 3 次，每次 1 h，溶剂量
为药材的 10、8、8 倍。紫草主要生物活性成分为萘醌
类等多种化合物［9 － 10］，乙醇浓度对萘醌收率有显著影
响［11］。因此，实验设计以乙醇为溶媒进行正交设计优
化实验，确定最佳工艺条件。
图 1 高效液相色谱图
5. 2 关于大黄素含量测定方法 参考含大黄复方制
剂大黄素含量测定的有关报道资料，先后对流动相甲
醇 － 0. 1%磷酸(80 ∶ 20)［12 － 13］、甲醇 － 0. 1%磷酸(85
∶ 15)［14］、甲醇 － 0. 2%磷酸(84∶ 16)［15］、甲醇 － 0. 2%
磷酸(70 ∶ 30)［16］、乙腈 － 甲醇 － 1% 磷酸(35 ∶37 ∶
28)［17］、甲醇 －水 －冰醋酸(72∶ 28∶ 1. 0)［18］等系统进行
了预试验，观察系统分离效果。结果表明，用甲醇 －
0. 1%磷酸溶液(85 ∶ 15)作为流动相测定样品中大黄
素含量较为适宜，出峰时间短，阴性对照品无干扰(见
图 1)。确定大黄素含量测定的色谱条件。
5. 3 关于精密度和重复性 对照品溶液连续进样 5
次大黄素峰面积的 ＲSD为 1. 48%，2 号乙醇提取液按
“3. 2”步处理后依次进样 5 次大黄素峰面积积分值的
ＲSD值为 1. 19%，表明该色谱条件的精密度和重复性
良好。
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(2012 － 11 － 28 收稿)
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