全 文 ：环境与健康杂志 2011 年 4 月第 28 卷第 4 期 J Environ Health, April 2011, Vol．28, No．4
【 论著】
基金项目：泸州市重点科技项目（ 泸市科[2008]50 号）
作者简介：杜曦（ 1973-） ，女，副教授，硕士，从事催化及药物分析研究。
赶黄草中没食子酸、槲皮素及 β-谷甾醇的
高效液相色谱测定法
杜曦 1，唐斌 1，张青碧 2，何兵 3
1. 泸州医学院化学教研室，四川 泸州 646000;2. 泸州医学院公共卫生系，3. 泸州医学院药学院
摘要 ：目的 同时测定赶黄草中活性成分 β-谷甾醇、槲皮素及没食子酸的含量。方法 粉碎后的赶黄草采用乙醇溶
液浸提、过滤，滤液浓缩后用甲醇溶解获得供试品溶液。采用高效液相色谱法，SunFireC18色谱柱，以乙腈-0.1％磷酸溶液为
流动相梯度洗脱，流速为 1.0 ml/min，检测波长为 254 nm。 利用标准曲线法定量。 结果 β-谷甾醇在 1.40~3.50 μg、槲皮素
在 0.42-4.20 μg、没食子酸在 0.32~6.40 μg 范围内线性关系良好，β-谷甾醇的回收率为 99.08%，RSD 为 1.50%；槲皮素的
回收率为 99.06%，RSD 为 0.98%；没食子酸的回收率为 98.58%，RSD 为 1.04%。 β-谷甾醇、槲皮素、没食子酸的检出限分
别为 2.8、3.4、2.4 ng。结论 该方法简便、分离效果好、结果准确，适于赶黄草中 β-谷甾醇、槲皮素及没食子酸的含量测定。
关键词：赶黄草；β-谷甾醇；槲皮素；没食子酸；液相色谱法
中图分类号：O657.7 文献标志码：A 文章编号：1001-5914（2011）04-0358-02
Simultaneous Determination of Content of Gallic Acid, Quercetin and β -sitosterol in Penthorum Chinense Pursh by
HPLC DU Xi, TANG Bin, ZHANG Qing -bi, et al. Department of Chemistry，Luzhou Medical College，Luzhou, Sichuan
646000，China
Abstract：Objective To determine the content of β -sitosterol, quercetin and gallic acid simultaneously in Penthorum
Chinense Pursh. M ethods The sample solution was prepared by following procedure consisted of crude medicines grinding,
ethanol impregnation, filtering, concentration and dissolved with methanol. An HPLC method was established using SunFireC18
(150 mm×4.6 mm，5 μm) with acetonitrile and 0.1% phosphoric acid aqueous solution as the mobile phase of gradient elution at a
flow rate of 1.0 ml/min and the detection wavelength of 254 nm. The standard curve method was adopted for quantification. Results
The calibration curves were linear in 1.40-3.50 μg for β-sitosterol, 0.42-4.20 μg for quercetin and 0.32-6.40 μg for gallic acid,
the corresponding average recovery rates were 99.08%，99.06% and 98.58% with RSDs of 1.50%,0.98% and 1.04%. The limits of
detection were 2.8 ng for β-sitosterol, 3.4 ng for quercetin and 2.4 ng for gallic acid respectively. Conclusion The method is
satisfactory in separation effect , simple and accurate，and it is applicable to the simultaneous determination of β -sitosterol,
quercetin and gallic acid in Penthorum Chinense Pursh.
Key words：Penthorum Chinense Pursh；β-sitosterol；Quercetin；Gallic acid；Liquid chromatography
赶黄草， 是虎耳草科扯根菜属植物扯根菜的干燥地上部
分。 广泛分布于中国、日本、韩国及俄罗斯东部，在我国为苗族
民间的草药，主要分布于四川、贵州、湖南等地，现大量种植于
四川省古蔺县境内。 民间以其全草入药，主治黄疸 、水肿 、经
闭、血崩、带下、跌打损伤，以及各型肝炎、胆囊炎、脂肪肝等 [1]。
赶黄草的化学成分主要为黄酮类、挥发油类、苷类等。 Zhang等[2]
用 95%的乙醇浸提赶黄草，浓缩后分别用石油醚、乙酸乙酯 、
正丁醇萃取， 所得萃取部分分别经硅胶柱分离得到了包括没
食子酸、槲皮素、β-谷甾醇在内的 22 种物质，并通过光谱测定
进行了结构鉴定。 对单一组分的药理实验表明，没食子酸、槲
皮素为已知的具有抗乙肝病毒和保肝作用的成分 [3]，而 β-谷
甾醇具有明显的降胆固醇、止咳、抗癌、抗炎等药理作用 [4]。 目
前已有文献报道采用高效液相色谱（ HPLC）对赶黄草中没食
子酸、槲皮素的含量进行测定，但未见赶黄草中 β-谷甾醇的含
量测定报道，也未见赶黄草中多组分的同时测定 [5-6]，本实验采
用高效液相色谱法对赶黄草中活性成分 β-谷甾醇、没食子酸、
槲皮素的含量进行同时测定。
1 材料与方法
1.1 仪器与试剂 KQ5200 型超声脱气机，Waters1525-2487 型
高效液相色谱仪，梅特勒-托利多电子分析天平。 甲醇、乙腈为
色谱纯，水为超纯水，其余试剂为分析纯。 赶黄草样品采集于四
川古蔺。对照品为 β-谷甾醇、没食子酸（ 成都瑞芬思生物科技有
限公司） ，槲皮素（ 上海晶纯试剂有限公司） 。
1.2 色谱条件 色谱柱为 SunFireC18柱(150 mm×4.6 mm，5μm)，
流动相为乙腈-0.1％磷酸溶液 (梯度洗脱 )，梯度洗脱程序为 ：
0～40 min，乙腈体积分数为 90％～45％；40～50 min，乙腈体积分
数为 45％～5％；50～53 min， 乙腈体积分数为 5％；53～55 min，
乙腈体积分数为 5%～90％。 检测波长为 254 nm， 流速为 1.0
ml/min。在此条件下，β-谷甾醇、槲皮素、没食子酸能达到较好
分离效果。
1.3 对照品溶液的配制 精密称取 β-谷甾醇 14.0 mg、槲皮素
20.8 mg、没食子酸 31.6 mg 置 100 ml 容量瓶中，加甲醇溶解并
稀释至刻度，摇匀，即得对照品溶液。
1.4 样品前处理 将药材粉碎，过 20 目筛，取粉末约 15 g，精
密称定，置于具塞锥形瓶中，用 95%的乙醇水溶液 300 ml 分 3
次浸泡，浸泡后过滤赶黄草粉末，滤液蒸干，残余物用甲醇溶解
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DOI:10.16241/j.cnki.1001-5914.2011.04.005
环境与健康杂志 2011 年 4 月第 28 卷第 4 期 J Environ Health, April 2011, Vol．28, No．4
并转移至 10 ml 容量瓶中， 加甲醇至刻度， 摇匀， 用微孔滤膜
(0.45 μm)滤过，即得供试品溶液。
1.5 标准曲线绘制 取 1.3 节混合对照品溶液 1、2、5、8、10、
15、20、25 μl 按 1.2 节色谱条件分析（ 图 1） ，以进样量 (m，μg)为
横坐标，峰面积值（ y）为纵坐标，绘制标准曲线。
1.6 实际样品测定 移取样品溶液 10 μl， 注入高效液相色谱
仪，按 1.2 节条件测定赶黄草药材中 β-谷甾醇、槲皮素和没食
子酸含量（ 图 2） 。
2 结果与讨论
2.1 测定波长的选择 应用二极管阵列检测器[戴安高效液相
色谱仪(P680A LPG 四元低压梯度泵，PDA-100 二极管阵列检测
器)]对 β-谷甾醇、槲皮素、没食子酸进行扫描，三组分在不同波
长处有最大吸收，根据吸收光谱选择 254 nm 作为检测波长。
2.2 流动相的选择 用固定比例的乙腈与水作为流动相达不
到很好的分离效果，通过试验，采取梯度洗脱，并加入 1%的磷
酸来改善峰形。
2.3 线性关系与检出限 考察各组分的线性关系，获得其回归
方程及线性范围，并按(D=3RN/S)计算各组分检出限，见表 1。
表 1 可见，β-谷甾醇、槲皮素、没食子酸的线性范围分别为
1.40~3.50,0.42~4.20，0.32~6.40 μg，检出限分别为 2.8、3.4、2.4 ng。
2.4 精密度 吸取上述对照品溶液 10 μl， 按上述色谱条件连
续进样 5 次测定峰面积值， 计算得 β-谷甾醇含量为 （ 1.390 2±
0.012 8）μg，RSD 为 0.92％；槲皮素含量为（ 2.071 5±0.015 5）μg，
RSD 为 0.75％； 没食子酸含量为 （ 3.159 0±0.026 5）μg，RSD 为
0.84％。 结果表明精密度良好。
2.5 重现性 取同一批样品 5 份，分别按 1.4 节操作，精密吸取
各供试品溶液 10 μl 进样分析测定 ， 结果 β-谷甾醇含量为
（ 0.231 5±0.001 4）mg/g，RSD 为 0.60％；槲皮素含量为（ 0.145 0±
0.000 5）mg/g，RSD 为 0.37％；没食子酸含量为（ 0.127 8±0.000 7）
mg/g，RSD 为 0.54％。 该方法具有较好的重现性。
2.6 稳定性 将样品溶液在室温下贮存。 于 0、2、6、12、24、48 h
分别测定，β-谷甾醇、槲皮素、没食子酸的 RSD 分别为 1.50%，
0.95%，1.23%。 结果显示样品溶液在 24 h 内基本稳定。
2.7 回收率 准确吸取已知 β-谷甾醇、槲皮素、没食子酸含量
的样品溶液 5 μl（ 实际样品量为 7.5 mg） ，准确加入组分浓度分
别为，β-谷甾醇 0.140 0 μg/μl、槲皮素 0.208 0 μg/μl、没食子酸
0.316 0 μg/μl 的对照品溶液 5 μl，按 1.2 节的色谱条件测定，并
计算平均回收率，结果 β-谷甾醇为 99.08％，槲皮素为 99.06％，
没食子酸为 98.54％。 结果见表 2。
2.8 实际样品测定 对 3批赶黄草药材进行了测定，进样量 10μl，
根据峰面积大小， 由线性回归方程计算赶黄草中 β-谷甾醇、槲
皮素、没食子酸的含量（ n=3）分别为（ 0.232 3±0.001 1） 、（ 0.143 3±
0.002 9） 、（ 0.129 0±0.000 8）mg/g。
3 小结
中药成分的提取常采用冷浸取法、 煎煮法及有机溶剂加热
回流提取法等，但提取的效果不尽相同。为尽可能保留赶黄草原
有的活性成分，本实验采用 95%的乙醇水溶液常温浸取后利用
高效液相色谱法测定各组分含量，该法准确性和重现性好，简便
易行，是赶黄草中 β-谷甾醇、槲皮素、没食子酸含量同时测定的
新方法，可以为赶黄草的质量控制提供科学依据。
参考文献：
［1］全国中草药汇编编写组.全国中草药汇编(下册)〔 M〕 .第 2 版.北京 :
人民卫生出版社,2000:480．
［2］Zhang T , Chen YM, Zhang GL . Novel Neolignan from Penthorum
chinense〔J〕. Journal of Integrative Plant Biology,2007,49:1611-1614.
［3］张旭 ,杨明 .赶黄草有效成份的研究〔 J〕 .成都中医药大学学报 ,
2002,25(4):46-47.
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〔 J〕 .中华医学杂志,2006, 86(39):2771-2775．
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〔 J〕 .中国中医药咨讯,2009, 1(6):6-7.
［6］邓科君,胡尚钦,班依蓉,等.苗药赶黄草干燥工艺对槲皮素含量的影
响〔 J〕 .天然产物研究与开发,2009,21(B05):132-134.
（ 收稿日期：2011-01-27 修回日期：2011-03-30）
（ 本文编辑：杜宇欣）
1—没食子酸; 2—槲皮素; 3—β-谷甾醇
时间 t/min
图 1 对照品色谱图
时间 t/min
1—没食子酸; 2—槲皮素; 3—β-谷甾醇
图 2 样品色谱图
表 1 赶黄草中没食子酸等的 HPLC 测定的线性关系与检出限
β-谷甾醇
槲皮素
没食子酸
y=5 093 526.3 m-920 197.9
y=9 332 531.5 m+106 951.3
y=3 422 912.6 m+71 643.9
相关
系数
0.999 0
0.999 8
0.999 9
线性范围
(μg)
1.40~3.50
0.42~4.20
0.32~6.40
检出限
(ng)
2.8
3.4
2.4
回归方程组分
表 2 赶黄草中 β-谷甾醇、槲皮素、没食子酸的
HPLC 测定法的回收率实验
β-谷甾醇
槲皮素
没食子酸
本底值
（ μg）
1.734 8
1.074 8
0.967 5
加标值
（ μg）
0.700 0
1.040 0
1.580 0
测定值
（ μg）
2.428 4±0.010 4
2.105 0±0.010 0
2.525 1±0.016 1
平均回收率
（ %）
99.08
99.06
98.58
RSD
（ %）
1.50
0.98
1.04
组分
（ n=5）
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