全 文 ：ＨＰＬＣ法测定白背叶中大波斯菊苷含量
谢　巍１，蒋受军１，２＊
（１．广西中医药大学，广西 南宁５３０００１；２．广西玉林食品药品检验所，广西 玉林５３７０００）
摘　要：目的：建立高效液相色谱法测定白背叶药材中大波斯菊苷含量的方法。方法：采用Ｇｅｍｉｎｉ－Ｃ１８
色谱柱（４．６ｍｍ×２５０ｍｍ，５μｍ），以甲醇－０．１％磷酸水溶液（４０∶６０）为流动相，柱温：２５℃，流速：
１．０ｍＬ·ｍｉｎ－１，检测波长：３３６ｎｍ。结果：大波斯菊苷达到基线分离，在０．０４４８６～０．８９７２μｇ范围内线性
关系良好（ｒ＝０．９９９　３），大波斯菊苷平均加样回收率（ｎ＝６）为９７．６７％（ＲＳＤ＝１．９４％）。结论：所建立
的含量测定方法操作简单、快速、重复性好，可用于白背叶药材的质量控制。
关键词：白背叶；大波斯菊苷；ＨＰＬＣ；含量测定
中图分类号：Ｒ２８４　　　文献标识码：Ａ　　　文章编号：１６７３－２１９７（２０１５）１３－００１６－０３
ＤＯＩ：１０．１１９５４／ｙｔｃｔｙｙ．２０１５１３００７
收稿日期：２０１５－０２－０５
基金项目：广西科技创新能力与条件建设项目（桂科攻１０１２４００８－１５）；广西自然科学基金项目（２０１０ＧＸＮＳＦＡ０１３２３３）
作者简介：谢巍（１９８９－），男，广西中医药大学硕士研究生，研究方向为食品药品安全性评价。
通讯作者：蒋受军（１９６９－），男，广西玉林食品药品检验所主任药师，研究方向为中药化学成分及中药质量控制。Ｅ－ｍａｉｌ：
ｊｉａｎｇｓｈｏｕｊｕｎ＠ｓｉｎａ．ｃｏｍ
ＨＰＬＣ　Ｍｅｔｈｏｄ　ｆｏｒ　Ｄｅｔｅｒｍｉｎａｔｉｏｎ　ｏｆ　Ａｐｉｇｅｎｉｎ－７－Ｏ－ｇｌｕｃｏｓｉｄｅ　ｉｎ　Ｍａｌｌｏｔｕｓ　ａｐｅｌｔａ
Ｘｉｅ　Ｗｅｉ　１，Ｊｉａｎｇ　Ｓｈｏｕｊｕｎ１，２＊
（１．Ｇｕａｎｇｘｉ　Ｕｎｉｖｅｒｓｉｔｙ　ｏｆ　Ｃｈｉｎｅｓｅ　ｍｅｄｉｃｉｎｅ，Ｎａｎｎｉｎｇ　５３０００１，Ｃｈｉｎａ；
２．ＹｕＬｉｎ　Ｉｎｓｔｉｔｕｔｅ　ｆｏｒ　Ｆｏｏｄ　ａｎｄ　Ｄｒｕｇ　Ｃｏｎｔｒｏｌ，Ｇｕａｎｇｘｉ　５３７０００，Ｃｈｉｎａ）
Ａｂｓｔｒａｃｔ：Ｏｂｊｅｃｔｉｖｅ：Ｔｏ　ｅｓｔａｂｌｉｓｈ　ａｎ　ＨＰＬＣ　ｍｅｔｈｏｄ　ｆｏｒ　ｄｅｔｅｒｍｉｎａｔｉｏｎ　ｏｆ　Ａｐｉｇｅｎｉｎ－７－Ｏ－ｇｌｕｃｏｓｉｄｅ　ｉｎ　Ｍａｌｌｏｔｕｓ　ａｐｅｌｔａ．Ｍｅｔｈｏｄｓ：
ＨＰＬＣ　ｗａｓ　ｐｅｒｆｏｒｍｅｄ　ｏｎ　ａ　Ｇｅｍｉｎｉ－Ｃ１８ａｎａｌｙｔｉｃａｌ　ｃｏｌｕｍｎ（４．６ｍｍ×２５０ｍｍ，５μｍ）ａｔ　２５℃ ｗｉｔｈ　ｍｅｔｈａｎｏｌ　ａｎｄ　０．１％ Ｐｈｏｓｐｈｏｒｉｃ
ａｃｉｄ（４０：６０）ａｓ　ｔｈｅ　ｍｏｂｉｌｅ　ｐｈａｓｅ．Ｒｅｓｕｌｔｓ：Ｔｈｅ　ｂａｓｅｌｉｎｅ　ｓｅｐａｒａｔｉｏｎ　ｏｆ　Ａｐｉｇｅｎｉｎ－７－Ｏ－ｇｌｕｃｏｓｉｄｅ　ｗａｓ　ａｃｈｉｅｖｅｄ　Ｔｈｅ　ｌｉｎｅａｒ　ｒａｎｇｅｓ　ｏｆ
０．０４４８６～０．８９７２μｇ（ｒ＝０．９９９０）．Ｔｈｅ　ａｖｅｒａｇｅ　ｒｅｃｏｖｅｒｙ（ｎ＝６）ｗａｓ　９７．６７％ （ＲＳＤ＝１．９４％）．Ｃｏｎｃｌｕｓｉｏｎ：Ｔｈｅ　ｍｅｔｈｏｄ　ｏｆ　ｄｅｔｅｒ－
ｍｉｎａｔｉｏｎ　ｉｓ　ｐｒｏｖｅｄ　ｔｏ　ｂｅ　ｓｉｍｐｌｅ，ｑｕｉｃｋ，ｒｅｐｅａｔａｂｌｅ，ａｎｄ　ｃａｎ　ｂｅ　ｕｓｅｄ　ｆｏｒ　ｑｕａｌｉｔｙ　ｃｏｎｔｒｏｌ　ｏｆ　Ｍａｌｌｏｔｕｓ　ａｐｅｌｔａ．
Ｋｅｙｗｏｒｄｓ：Ｍａｌｌｏｔｕｓ　ａｐｅｌｔａ；Ａｐｉｇｅｎｉｎ－７－Ｏ－ｇｌｕｃｏｓｉｄｅ；ＨＰＬＣ；Ｃｏｎｔｅｎｔ
　　白背叶为大戟科野桐属植物白背叶（Ｍａｌｌｏｔｕｓ　ａｐｅｌｔａ
（Ｌｏｕｒ．）Ｍｕｅｌ．Ａｒｇ．）的干燥叶，又名野芙蓉、白林树、白面
虎等，具有健脾化湿、柔肝活血、收敛固脱、消炎止血等功
效。主要用于慢性肝炎、肝脾肿大、脱肛、白带、妊娠水肿、
耳炎、外伤出血等［１］疾病。在我国主要分布于河南、广西、
海南、陕西、云南等地［２］。王志萍等［３－５］研究表明白背叶有一
定的保肝、抗肿瘤、抗菌、止血等药理作用。经查阅有关文
献资料，国内外已有对白背叶中化学成分研究的报道［６－８］。
大波斯菊苷具有较强的抑制肿瘤细胞作用［９］，提示其可能
为白背叶药材所具功效的活性成分。本实验建立了 ＨＰＬＣ
测定白背叶药材中大波斯菊苷含量的方法，以期为建立全
面合理的白背叶药材质量控制标准奠定基础。
１　仪器与试药
ＵｌｔｉＭａｔｅ　３０００高效液相色谱仪（Ｔｈｅｒｍｏ　Ｓｃｉｅｎｔｉｆｉｃ）；
ＨＨ－Ｓ６数显恒温水浴锅（金坛市医疗仪器厂）；ＡＧ－２０４电子
分析天平（ＭＥＴＴＬＥＲ　ＴＯＬＥＤＯ）；Ｍｉｌｉｐｏｒｅ　Ｓｉｍｐｌｉｃｉｔｙ－ＵＶ
超纯水器（美国密里博）。
白背叶由广西金秀圣堂制药有限公司提供，经广西食
品药品检验所韦家福副主任药师鉴定为大戟科植物白背叶
（Ｍａｌｌｏｔｕｓ　ａｐｅｌｔａ（Ｌｏｕｒ）Ｍｕｅｌ－Ａｒｇ）的干燥叶，标本存放于
广西食品药品检验所中药标本室。大波斯菊苷对照品自行
从白背叶药材中分离、精制而得，经 ＭＳ、Ｈ１－ＮＭＲ和１３　Ｃ－
ＮＭＲ确定结构，ＨＰＬＣ峰面积归一化法测得纯度均大于
９８％ 。
—６１—
水为超纯水，甲醇、乙腈（美国Ｆｉｓｈｅｒ公司，色谱纯），其
余试剂均为分析纯。
２　方法与结果
２．１　对照品溶液制备
精密称取１０５℃干燥至恒重的大波斯菊苷２２．４３ｍｇ，置
于２５ｍＬ容量瓶中，加适量７０％甲醇水溶液超声使溶解并
稀释至刻度，摇匀，制成每１ｍＬ含大波斯菊苷０．８９７　２ｍｇ的
对照品溶液。
２．２　供试品溶液制备
取白背叶药材粉末（２４目）约１．０ｇ，精密称定，精密加
入７０％甲醇水溶液２５ｍＬ，称量，加热回流提取１．５ｈ，放冷，
用７０％ 甲醇水溶液补足减失的量，滤过，取续滤液经
０．４５μｍ微孔滤膜滤过，即得。
２．３　色谱条件
采用Ｇｅｍｉｎｉ－Ｃ１８色谱柱（４．６ｍｍ×２５０ｍｍ，５μｍ），以甲
醇－０．１％磷酸水溶液（４０：６０）为流动相，流速为１．０ｍＬ·
ｍｉｎ－１，检测波长３３６ｎｍ，柱温２５℃，进样量１０μＬ。采用外标
法计算含量，理论塔板数以大波斯菊苷计算应不低于
１０　０００，分离度为２．２１。色谱见图１。
图１　大波斯菊苷对照品（Ａ）和白背叶药材（Ｂ）ＨＰＬＣ色谱（Ｉ为大波斯菊苷）
２．４　线性关系考察
精密吸取“２．１”项下大波斯菊苷对照品溶液（每１ｍＬ中
含大波斯菊苷０．８９７　２ｍｇ）０．５、１、２、３、５和１０ｍＬ，分别置于
１０ｍＬ容量瓶中，用甲醇定容至刻度，摇匀，分别进样１０μＬ，
测定峰面积，以大波斯菊苷进样量Ｘ（μｇ）为横坐标，峰面积
Ｙ为纵坐标，绘制标准曲线，得回归方程为 Ｙ＝１　５９４．４Ｘ－
１０３．７５，ｒ＝０．９９９　３，线性范围为０．０４４８　６～０．８９７　２μｇ。
２．５　精密度试验
取白背叶药材粉末（批号０１１１９６）约１．０ｇ，精密称定，按
“２．２”项下方法制备，进样１０μＬ，连续测定６次，记录峰面
积。结果大波斯菊苷峰面积的ＲＳＤ为０．０６％（ｎ＝６），表明
所用仪器的精密度良好。
２．６　稳定性试验
取同一份白背叶供试品溶液，分别于溶液制备后０、２、
—７１—
４、１２、２４ｈ进样，测定，记录大波斯菊苷峰面积。结果大波斯
菊苷峰面积的ＲＳＤ分别为０．１１％（ｎ＝５），表明２４ｈ内供试
品溶液稳定性良好。
２．７　重复性试验
取同一批白背叶药材粉末６份（批号０１１１９６），每份约
１．０ｇ，精密称定，按“２．２”项下方法制备，分别进样１０μＬ，记
录峰面积，并计算含量。大波斯菊苷的平均含量为２４．５９４
ｍｇ／ｇ，ＲＳＤ为１．４６％，表明该方法重现性良好。
２．８　加样回收率试验
精密 称 定 已 测 定 含 量 （每 １ｇ 中 含 大 波 斯 菊 苷
２４．５９４ｍｇ）的白背叶药材粉末６份，每份约０．５ｇ，精密称定，
另精密称大波斯菊苷对照品７４．５５ｍｇ置１５０ｍＬ量瓶中，加
适量甲醇超声使其溶解，并稀释至刻度，摇匀，即得对照品
储备液。分别在上述６份药材中精密加入混合对照品储备
液２５ｍＬ，按“２．２”项下方法制备，分别进样１０μＬ，记录大波
斯菊苷的峰面积，计算含量，并计算回收率。结果见表１。
表１　白背叶药材中大波斯菊苷的回收率试验结果 （ｎ＝６）
编号 样品量（ｇ） 样品中量（ｍｇ） 加入量（ｍｇ） 测得量（ｍｇ） 回收率（％） 平均值（％） ＲＳＤ（％）
１　 ０．５００３　 １２．３０５８　 １２．４２５０　 ２４．３９２８　 ９７．２８
２　 ０．５００１　 １２．２９９９　 １２．４２５０　 ２４．６６６４　 ９９．５３
３　 ０．５０４３　 １２．４０２０　 １２．４２５０　 ２４．５５５６　 ９７．８２
９７．６７　 １．９４
４　 ０．５０９５　 １２．５３１３　 １２．４２５０　 ２４．６３２０　 ９７．３９
５　 ０．５０３７　 １２．３８７０　 １２．４２５０　 ２４．１１８２　 ９４．４２
６　 ０．５０８５　 １２．５０７０　 １２．４２５０　 ２４．８７８０　 ９９．５７
２．９　样品含量测定
取６批不同批号的白背叶药材粉末，每份约１．０ｇ，精密
称定，按“２．２”项下方法制备供试品溶液，分别进样１０μＬ测
定，记录大波斯菊苷的峰面积，并计算含量。结果见表２。
表２　白背叶药材中大波斯菊苷的含量测定结果
药材批号 含量（ｍｇ／ｇ）
０１１９８７　 １．０２５
０１１９９１　 ６．５２２
０１１９９３　 ０．６６４
０１１９９５　 ０．７５５
０１１９９６　 ２４．５９４
０１１９９８　 １６．６４６
３　讨论
３．１　供试品溶液制备方法的选择
本研究优选了不同提取条件制备供试品溶液，考察了
不同提取方法（超声提取、回流提取）、提取时间（３０、６０、
９０ｍｉｎ）、提取溶剂（甲醇、乙醇和７０％甲醇水溶液）、溶剂用
量（１０、２５、５０ｍＬ）和药材粉碎度（１０、２４、５０目）对白背叶药
材中大波斯菊苷提取率的影响。结果表明白背叶药材粉末
在（２４目）１．０ｇ、加７０％甲醇２５ｍＬ、加热回流提取１．５ｈ的
条件下，大波斯菊苷提取率最高。
３．２　色谱条件的选择
曾用甲醇∶水（２４∶７６）梯度洗脱［７］，发现大波斯菊苷
色谱峰的保留时间较长，经过调整流动相及其比例，大波斯
菊苷出峰时间比较适中，且峰分离度较好，因此选择甲醇－
０．１％磷酸水溶液（４０∶６０）作流动相。
３．３　结论
本试验建立了 ＨＰＬＣ法测定白背叶药材中大波斯菊苷
含量的方法，并测定了６批不同来源白背叶药材中大波斯
菊苷的含量，结果表明：不同来源白背叶药材中的含量有一
定差异性，提示采用多指标定量方法，能更好地控制白背叶
药材质量。
参考文献：
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［Ｍ］．上海：上海科学技术出版社，１９９９：８２７．
［２］　单家林．大戟科植物的地理分布和区系特征［Ｊ］．热带农业科
学，１９９８（４）：２３１．
［３］　王志萍，冯桥，沈树虎．白背叶根提取物的体外抑菌试验［Ｊ］．
广西中医药，２０１２，３５（３）：５５．
［４］　赵进军，吕志平，王晓东，等．白背叶根在肝纤维化动物模型
中抗氧化作用的实验研究［Ｊ］．中药材，２００２，２５（３）：１８５．
［５］　郑作文，伦玉宁，赵丽丽．白背叶提取物芹菜素对裸鼠人胃癌
细胞移植瘤生长及凋亡的影响［Ｊ］．中国实验方剂学杂志，
２０１２，１８（２３）：２１４．
［６］　韦松，曲磊，郑作文．白背叶黄酮类化学成分研究［Ｊ］．中成
药，２０１２，３４（４）：６９．
［７］　朱斌，白桂昌，蒋受军，等．白背叶化学成分和含量测定研究
［Ｊ］．中国中药杂志，２００７，３２（１０）：９３２．
［８］　朱斌，蒋受军，林瑞超．ＧＣ－ＭＳ测定白背叶中的挥发油［Ｊ］．
华西药学杂志，２００８，２３（１）：３５．
［９］　黄丽贞，郑作文，唐云丽．白背叶黄酮化合物 ＱＢ３对人肿瘤
细胞增殖的抑制作用［Ｊ］．科学技术与工程，２０１１，１１（２２）：
５３９４． （责任编辑：宋勇刚）
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