全 文 ：干地黄在金匮肾气丸中抗衰老实验研究
管家齐 ,刘军莲 ,王传金　(南京中医药大学基础医学院 ,江苏 南京　210029)
摘要:目的　探讨干地黄在金匮肾气丸中延缓衰老作用机理。方法　采用 D-半乳糖背部皮下注射造成昆明种小鼠亚
急性衰老模型 ,用干地黄 、金匮肾气丸 、金匮肾气丸去干地黄等水煎剂灌胃给药 ,对照组及模型组给以等量的蒸馏水。以
小鼠学习记忆功能 、巨噬细胞吞噬指数及吞噬百分率等作为指标 , 观察干地黄等用药组及模型组和对照组的实验结果。
结果　用药组均有抗衰老作用且金匮肾气丸抗衰老作用优于干地黄和金匮肾气丸去干地黄。结论　干地黄是作为整体
发挥抗衰老作用的金匮肾气丸中不可缺少的主药。
关键词:干地黄;金匮肾气丸;抗衰老;巨噬细胞
中图号:R285.5　　　文献标识码:A　　　文章编号:1000-5005(2002)03-0169-02
　　金匮肾气丸是《金匮要略》方[ 1] ,为历代医家
用于温补肾阳 、延缓衰老的代表方。其抗衰老的
实验研究已有很多报道[ 2 ～ 3] ,干地黄同样具有延
缓衰老的功效 ,相关实验研究也有不少报道[ 4] 。
本实验以学习记忆和巨噬细胞吞噬功能作为观察
指标 ,对干地黄在金匮肾气丸中延缓衰老作用的
机理作进一步探讨。
1　实验材料
1.1　实验动物
昆明种小鼠 60只 ,重 20 ～ 25 g ,雌雄各半 ,本
校实验动物中心提供(苏动质 98005号)。
1.2　试剂与药物制备
D-半乳糖由广州医药工业研究所提供;干
地黄 、山药 、山茱萸 、泽泻 、茯苓 、牡丹皮 、桂枝 、附
子等由本校国医堂门诊部提供 ,经鉴定符合《中华
人民共和国药典》规定。
金匮肾气丸制剂制备:按《金匮要略》取干地
黄24 g ,山药 12 g ,山茱萸 12 g ,泽泻 9 g ,茯苓 9 g ,
牡丹皮 9 g ,桂枝 3 g ,附子 3 g ,置于玻璃烧杯内 ,
加入 5倍蒸馏水浸泡 2 h ,文火煮沸 30 min ,过滤 ,
药渣再加 3倍量水继续煎煮 ,煮沸 20min后过滤 ,
合并两次滤液 ,水浴浓缩至 81 mL ,制成浓度为 1
g/mL 的金匮肾气丸水煎剂;同样的方法 ,取山药
12 g ,山茱萸12 g ,泽泻 9 g ,茯苓 9 g ,牡丹皮 9 g ,
桂枝 3 g ,附子 3 g ,制备金匮肾气丸原方去干地黄
水煎剂 57 mL;以及取干地黄 24 g ,制备干地黄水
煎剂 24 mL。以上试剂 4℃冰箱保存备用。
鸡红细胞制备:根据文献[ 5] ,按无菌操作 ,自
鸡翼下静脉取血 ,立即放入装有为取血量 5倍的
阿氏液三角烧瓶中 ,置 0 ～ 4℃冰箱内保存备用。
使用前 ,以无菌生理盐水离心洗涤 3次 ,再用生理
盐水配成 5%细胞悬液。
2　方法与结果
2.1　对衰老小鼠记忆的影响
昆明种小鼠60只 ,随机分成 5组 ,第 1 ～ 5组
分别为正常对照组 、模型组 、干地黄组 、金匮肾气
丸去干地黄组 、金匮肾气丸组。第 3 、4 、5组小鼠
每天灌胃给药(0.02 mL/g 体重),第 1 、2组同时给
予等量蒸馏水。灌胃的同 1天第 2 ～ 5组小鼠背
部皮下注射D-半乳糖(100mg/kg·d)[ 6-7] 。连续
给药 6周 ,第 39天上午开始训练。测定时将小鼠
放入明箱 ,记录自放入明箱到钻洞进入暗箱的潜
伏期 ,以及 5 min内进入暗箱的错误次数。5 min
内未钻洞者 ,潜伏期按 300 s计算。结果见表 1。
收稿日期:2002-01-13;修稿日期:2002-02-12
作者简介:管家齐(1973-),男 ,安徽定远人 ,南京中医药大学 1999级硕士研究生。
—169—南京中医药大学学报(自然科学版)2002年 5 月第 18卷第 3 期JOURNAL OF NANJING TCMUNIVERSITY (NATURALSCIENCE)Vol.18 No.3 May.2002
DOI :10.14148/j.issn.1672-0482.2002.03.015
表 1　干地黄等水煎剂对衰老小鼠记忆的影响( x±s)
组别 n 灌胃给药量/mL·(g体重)-1
潜伏期
/ s
5 min内错误次数
/次
对照组 10 - 235.8±73.2＊ 0.40±0.49＊＊
模型组 11 - 94.2±23.2 2.50±1.16
干地黄组 12 0.02 174.2±68.0△△■ 1.08±0.76△△■
去干地黄组 9 0.02 175.8±59.8△△■ 1.11±0.57△△■
肾气丸组 11 0.02 233.2±52.6△△ 0.45±0.50△△
　　　　　　　注:对照组与模型组比 , ＊＊P<0.01;用药组与模型组比 , △△P<0.01;金匮肾气丸组与干地黄组 、去干地黄
　　组比 , ■P<0.05。
2.2　对衰老小鼠巨噬细胞吞噬功能的影响
连续给药 6周后 ,末次给药的同时每只小鼠
腹腔注射 5%鸡红细胞悬液 0.4 mL , 10 h后眼球
取血并用脱颈椎法处死小鼠 ,消毒腹部 ,剪开腹
膜 ,注入汉氏液 2.5 mL ,轻揉腹部 ,用镊子提起腹
膜 ,剪开一小孔 ,用长颈吸管吸取腹腔液 2 mL 置
于试管中 。混匀后 ,吸出少量滴于载玻片上(液滴
大小约为 2 cm×1.5 cm)。将滴片平放在含湿沙
的搪瓷盘中 ,置 37℃温箱内孵育 30 min 后 ,在生
理盐水中涮去浮于滴片上的鸡红细胞 ,冷风吹干 ,
甲醇固定 5 min ,姬姆萨-瑞特氏染液染色 5 ～ 10
min冲洗 ,凉干。用油镜观察并计算巨噬细胞吞
噬百分率及吞噬指数[吞噬百分率=(吞噬鸡红细
胞的巨噬细胞数÷100个巨噬细胞)×100%,吞噬
指数=100个巨噬细胞所吞噬鸡红细胞的总和 ÷
100] 。结果见表 2。
表 2　干地黄等水煎剂对小鼠巨噬细胞功能的影响( x±s)
组别 n 灌胃给药量/mL·(g体重)-1 吞噬百分率(%) 吞噬指数
对照组 10 　　　33.60±2.58＊＊ 　　　0.82±0.09＊＊
模型组 11 14.91±2.19 0.38±0.10
干地黄组 12 0.02 22.17±2.03△△■■ 0.50±0.09△△■■
去干地黄组 9 0.02 23.67±1.49△△## 0.60±0.11△△#
肾气丸组 11 0.02 27.00±1.28△△ 0.72±0.10△△
　　　　　　注:对照组与模型组比 , ＊＊P<0.01;用药组与模型组比 , △△P<0.01;干地黄组与金匮肾气丸组比 , ■■P<0.01;
　　　去干地黄组与金匮肾气丸组比 , #P<0.05, ##P<0.01。
3　讨论
从实验统计结果可以看出 ,模型组在记忆和
免疫功能方面均显著弱于正常对照组 ,说明造模
成功 。用药组均不同程度地提高衰老小鼠学习记
忆能力和免疫功能 ,表现在受训小鼠钻洞潜伏期
延长 ,钻洞的次数减少 ,以及吞噬指数和吞噬百分
率均不同程度地提高 ,其中以金匮肾气丸最显著。
干地黄的作用也十分明显 ,去之 ,金匮肾气丸的作
用减弱 ,说明经方中各药协同作用是金匮肾气丸
抗衰老作用的基础。也由此可见干地黄是金匮肾
气丸中不可缺少的主要药物。另外 ,从本实验结
果还可以推测出 ,增强脑及免疫功能可能是金匮
肾气丸和干地黄延缓衰老的机理之一。
参考文献:
[ 1] 彭怀仁.中药方剂大辞典.第 6 册[ M] .北京:人民卫生
出版社 , 1996.288.
[ 2] 黄泰康 ,施承.中药方剂现代研究大典[ M] .北京:科技
出版社 , 1996.791.
[ 3]谢金龙.金匮肾气丸的抗衰老作用[ J] .中成药.1993 ,
15(11):24.
[ 4] 张鹏霞 ,曲凤玉 , 欧芹 ,等.熟地提取液对衰老模型小鼠
NOS 、NO、SOD和 LOP的影响[ J] .中国老年学杂志 , 1999 ,
19(3):174.
[ 5] 陈奇.中药药理实验方法[ M] .北京:人民卫生出版社 ,
1994.169.
[ 6]龚国清.小鼠衰老模型研究[ J] .中国药科大学学报 ,
1991 , 22(2):101.
[ 7] 陈树元 ,金伟军 , 陈志良 ,等.D-半乳糖致大鼠亚急性
衰老模型的实验研究[ J] .南京中医药大学学报 , 1998 , 14
(6):251.
—170— 南京中医药大学学报(自然科学版)2002年 5 月第 18卷第 3 期