全 文 ：北方药学 2 0 1 4年第 1 1卷第 10期
· 药品质量及检验 ·
对三味茨蔡散中茨蔡 、 冬葵果质量标准的摸索研究
乌尼尔其其格 1刘百龙 如 .内蒙古锡林郭勒盟镶黄旗食品药品监督管理局 镶黄旗 021 3502 .内蒙古锡林郭勒盟镶黄
旗蒙医医院 镶黄旗 021 5 30 )
摘要 采用《中华人民共和国药典》 (2 01 0版 )一部三味获暴散现行标准进行摸索研究 , 对主要成分获暴及冬葵果进行含量测定 。 结
果表明 , 获暴中皂苍类 、 黄酮类成分 的测得含量太低 ( 0 034 % ) ,该 方法简便易行 , 重现性 、稳定性均较好 , 少于万分之一 , 所 以 不能
作为本品种的定量方 法。 冬葵果中阿魏酸的定量指标无专属性 。
关键词 :三味获暴散 高效液相色谱法
中图分类号 :R 2 8 6 . 0 文献标识码 入 文章编号 :1 6 7 2 一 83 5 1 ( 2 0 14 ) 10 一 0 0 0 1 一 03
D is P e r s e s t h e P u n c tu r e V i n
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s t a n d a己 t o e o n d u e t t h e fu m b le er s e a cr h , t h e m i e or d i s t i n e t io n , th e p h y s i e s a n d e h e m i s t叮 d i s t i n e t i o n e a卿 o n th e s p e e iif e i ty i n s p e e t i o n ;
H a s e a m
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K e y w o r d s : Th re e t a s t e p u n e t u r e v i n e s d i s p e r s e T h in la y e r e h or m a t o g ar p h y H i g h ly e fe
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u id p h a s e e h r o m a t o g ar p h y
三味茨蔡散是由茨蔡为主药 冬葵果 、方海为辅药组成的蒙药 用乙醇补足减失重量 摇匀 滤过 精密量取续滤液 10 ml 蒸干 加
复方制剂 清湿热 利尿 主治湿热下注 、小便热痛 。 为了保证药品 水 10 m l、 盐酸 lml 加热回流 h2 取出 冷至室温 边摇边滴加 40 %
的内在质量 确保其临床的有效性 本实验研究对处方中茨蔡的 氢氧化钠溶液至溶液颜色由橙黄色变为橙红 用三氯甲烷振摇提
皂普类 、黄酮类 冬葵果中的阿魏酸进行了含量测定的实验研究。 取 2 次 海次 30 ml 台并三氯甲烷液 蒸干 残渣加甲醇溶解 转移
1 含 量 至 10 ml 量瓶中 并稀释至刻度 摇匀 作为供试品溶液①。
1
.
1仪器与试剂试药
1
.
1
.
1 仪器 : 高效液相色谱仪为岛津 L C 一 2 0 10 A H T 、 L C 一 10 AT V P
泵 卫L S D一LT l l检 i则器 fA ll t e e h E L S D2 000 检 i则器 万P D一m 2 0 A 检
测器 万C L一 2 0A V P 色谱工作站 岛津 10 A 、 L C 一 10 AT V P 泵 万P D -
1 0A V P 检测器 万L L 一10 A AF 自动进样器 。 S a ort ir u S M E S 型电子
天平 泌 et tle r A E 一 1 00 电子分析天平 J D Zo 一 型电子天平 冰S
5 1 5 0A 超声清洗仪 。
1
.
1 2 试剂与试药 :薯籁皂普元 ( 批号 朽39 一 2 0 0 1 ) 、 接契皂普元
(批号 沮 0 7 4 4一 2 00 5 09 ) 、 榭皮素 (批号 注00 08一2 0 04 0 6 ) 、 lLJ 奈素
(批号 :1 1 08 6 1一 2 00 6 06 ) 、 异鼠李素 (批号 :1 1 0 8 6 0 一 2 00 4 0 6 ) 、 阿魏
酸 (批号 D7 7 3一 9 91 0) 对照品 户国药品生物制品检定所提供 。
三味茨蔡散 ; 乌兰浩特中蒙制药有限公司生产 ( 批号 :
2 00 5 1 1 0
、
2 0 05 1 14
、
2 00 5 1 16 )
。
甲醇 、 乙睛为色谱纯 其他均为分析纯试剂 水为离子交换
高纯水 。
1 2 色谱条件
1 2
.
1 色谱柱 参照《中国药典》201 0 年版一部 “ 知母 , ’药材项下含
量测定方法 色谱柱填充剂为十八烷基硅烷键合硅胶 本实验研
究采用 ( A l lt e e h c l。 2 5 om m x 4 6 m m s林m 色谱柱 、 K or m a s i l C l。
2 5 o m m x 4 6m m s林m 色谱柱 ) 。
1 2 2 流动相的选择 参照《中国药典》2 0 1 0 年版一部 “ 知母 ” 药材
项下含量测定方法 ,以甲醇一水 ( 9 :5 5) 为流动相 进行条件摸索 ,
结果供试品色谱中的薯籁皂普元 、 接契皂普元分离效果好 理论
板数较高 并具适宜保留时间 并且阴性无干扰 放作为检测流
动相 。
1 2 3 柱温 采用 30 ℃柱温 可减小流动相粘度 降低柱压并改善
分离效果 。
1 3 茨蔡中薯籁皂普元 、 接契皂普元的测定
1 3
.
1 供试品溶液的制备
1 3
.
1
.
1取本品 1 9 , 精密称定 , 置具塞锥形瓶中 , 精密加入乙醇
20 ml 称定重量 浸泡过夜 超声处理 40 m in 放冷 再称定重量 ,
1 3 12 取本品 1 9 精密称定 加 Zm o比 盐酸 10 ml 惠热套上加热水
解 4 h 放冷滤过 滤渣用水洗 5m l和 1%0 的碳酸钠溶液 Zml 洗涤 ,
再用水洗至中性 在 80 ℃一 10 0℃烘干 置索氏提取器中加石油醚
( 3 0℃ 一60 ℃ )回流 h2 ,回收石油醚 残渣加甲醇适量使溶解 并转
移至 sml 量瓶中 加甲醇稀释至刻度 摇匀 作为供试品溶液雪。
1 3 2 对照品溶液的制备 :精密称取薯籁皂普元 、 接契皂普元对
照品适量 分别加甲醇制成每 l ml 各含 0 . 3m g 的溶液 ,即得 。
1 3 3 阴性供试品溶液的制备 :取缺茨蔡的阴性对照 ,同供试品
溶液① 、 ②的制备法制成阴性供试品溶液① 、 ②。
1 3 4 测定 参照《中国药典》2 0 1 0 年版一部 “ 知母 ” 药材含量测定
项下的方法 ,以甲醇 :水 ( 9:5 5) 为流动相 蒸发光散射检测器检
测 结果供试品溶液① 、 ②的色谱图中 在与薯籁皂普元 、 接契皂
普元对照品对应的保留时间处均未出现色谱峰 , 阴性对照也未
出现色谱峰 。 故薯籁皂普元 、 接契皂普元不可作为定量指标 。
H PL C 色谱图见图 1 、 图 2 、 图 3 、 图 4 、 图 5 、 图 6 。
图 1 三味莲蔡散菠葵皂昔对照品色谱图
图 2 三味莲蔡散薯籁皂昔对照品色谱图
北方药学 204 1 年第 1 1 卷第 1 0 期
图 8三味莲蔡散解皮素 、 异鼠李素对照品色谱图
俪
图4 三味莲蔡散供试品溶液①色谱图 图 9三味莲蔡散山票素对照品色谱图
图 5三味莲蔡散阴性对照 (缺莲蔡 )溶液②色谱图 图 1 0 三味莲蔡散阴性对照 (缺莲蔡 )溶液色谱图
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图 6 三味莲蔡散供试品溶液②色谱图
1 4茨蔡中总黄酮的测定
1 4
.
1供试品溶液的制备 取本品约 7 9精密称定 置索氏提取器
中 加氯仿回流 h2 弃取氯仿液 药渣挥干 加甲醇回流 h4 提取
液蒸干 残渣加甲醇 : 25 %盐酸溶液 (: 4 1) 混合液 25 lm 加热回流
3 0 m in 放冷 转移至 5 0 lm量瓶中 并加甲醇至刻度 。摇匀 ,即得 。
1 4 2 对照品溶液的制备 精密称取经五氧化二磷干燥过夜的榭
皮素 、 山奈素 、 异鼠李素对照品适量 加甲醇分别制成每 l ml 含
3 0林g · 3 0林g 、 2 0 林g 的溶液 即得 。
1 4 3 阴性对照溶液的制备 :取缺茨蔡的阴性对照 ,同供试品溶
液的制备法制成阴性对照溶液 。
1 4 4 测定 参照《中国药典 》银杏叶药材含量测定的方法 ,以甲醇:
住4 %磷酸溶液 ( 58 :42 )为流动相 柱温 25 ℃ 脸测波长 3 60n m 碑吉
果供试品色谱峰分离效果较好 稳定性较好 且阴性对照无干扰 。
但茨蔡果实中黄酮类成分含量少 规业得值太低 放不可作为定量
指标 。 H P L C 色谱图见图 7 、 图 8 、 图 9 、 图 10 、 图 1 1 。
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图 7 三味莲蔡散解皮素对照品色谱图
图 1 三味莲蔡散供试品溶液色谱图
1 5 冬葵果中阿魏酸的含量测定
1 5
.
1 供试品溶液的制备
1 5 L I 取本品 4 9 精密称定 置圆底烧瓶中 精密加入 50 m l沮 m o比
盐酸溶液 称定重量 回流提取 4 0 m in 二令却 称定重量 加 a l m o比
盐酸溶液补足减失的重量 滤过 取 25 ml 续滤液 置分液漏斗中 ,
用乙醚萃取 ( 20 ml x4 ) 台并乙醚提取液 蒸干 残渣用甲醇溶解并
定容至 10 ml 棕色量瓶中 。 摇匀 作为供试品溶液①。
1 5
.
1 2 取本品 4 9 精密称定 精密加入甲醇 50 ml 称定重量 ,回
流提取 40 m in 二令却 称定重量 用甲醇补足减失的重量 滤过 ,
蒸干 残渣用甲醇溶解并定容至 10 ml 棕色量瓶中 。 摇匀 炸为
供试品溶液② 。
1 5 2 对照品溶液的制备 精密称取阿魏酸对照品 10 m g 置 5 0ml
棕色量瓶中 加 70 % 甲醇使溶解并稀释至刻度 摇匀 精密量取
3ml 置 5 0ml 棕色量瓶中 加 70 % 甲醇至刻度 摇匀 即得 。
1 5 3 阴性对照溶液的制备 取缺冬葵果的阴性对照 ,同供试品
溶液① 、 ②的制备法制成阴性对照溶液① 、 ② 。
1 5 4 测定 参照 《中国药典 》当归药材含量测定的方法 ,以乙睛 :
住08 5%磷酸溶液 ( 17 : 83 )为流动相 柱温 35 ℃ 脸测波长 3 16n m ,
结果阴性供试品溶液有干扰 。 故无法以阿魏酸作为含量测定指
标建立冬葵果的含量测定方法 。 H P L C 色谱图见图 12 、 图 1 3 、 图
14
、图 1 5 、 图 1 6 、 图 1 7 。
2 讨 论
2
.
1 茨蔡 : 目前茨蔡中皂普类成分的含量测定方法报道不少 通
北方药学 2 01 4年第 1 1卷第 1 0期
图 12 三味莲蔡散阿魏酸对照品色谱图
一卜、 少 , O , - - - - - - 一~ - - - - 一了 - - - 一 ’ - - - - - - - 一
_ 落 - -
七一 l` }图 1 3 三味莲蔡散冬葵果药材色谱图
只能测定总皂普元的相对含量 。 茨蔡中是否含有薯籁皂普元尚
存异议 。 本实验采用 H PL C 一E L SD 检测法测的结果在薯籁皂普
元 、接契皂普元对照品保留时间处 供试品未出现色谱峰 。 故未
能建立皂普类的含量测定方法 。
有文献报道采用 H P L C法测定茨蔡茎叶的榭皮素 、 山奈素 、
异鼠李素等成分 。 本实验参照该方法对三味茨蔡散中的黄酮类
成分含量进行测定 结果该方法简便易行 重现性 、 稳定性均较
好 但测得含量太低 (住0 34 % ) 少于万分之一 所以不能作为本
品种的定量方法 。
2 2 冬葵果 文献记载冬葵果中含有阿魏酸 本实验采用甲醇提取
和 0 . l m ol 几盐酸溶液提取后 再用乙醚萃取两种提取方法进行比
较研究 结果表明 采用后者回流提取效果最好 经乙醚萃取后
其他成分少 孩方法简便 、准确 汾离效果好 。 但两种方法对阴
性供试溶液均有干扰 。 通过对冬葵果 、 方海 、茨蔡三味药材的测
定 结果方海供试品液无干扰 而冬葵果 、 茨蔡两味药材均在阿
魏酸对照品保留时间处出现色谱峰 (见图 1 3 、图 1 8 、图 19) 。阴性
供试液中峰面积值超过 巧% 放阿魏酸作为定量指标无专属性 。
综合上述因素未能建立含量测定方法 。
图 14 三味莲蔡散阴性对照 (缺冬葵果 )溶液①色谱图
3 , 6 n m
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图 1 8 三味莲蔡散方海药材色谱图
图 1 5 三味莲蔡散供试品溶液①色谱图
图 1 6 三味莲蔡散阴性对照 (缺冬葵果 )溶液②色谱图汗一 爪
图 1 7 三味莲蔡散供试品溶液②色谱图
常认为构成茨蔡全草与果实药效的主要有效成分为昌体皂普 ,
其皂普元有海柯皂普元 ( h ce og cn in) 、 替告皂普元 ( iT g og en in) 、 薯
籁皂普元 ( d io s g e n in ) 、 吉托皂普元 ( g i t o g o n i n )等 。 虽然茨蔡全草
和果实中不同普元种类近来时有新的发现和结构鉴定 , 但是微
量 操作复杂 滩以直接定量作为生药质量的参考指标。 由于昌
体皂普元紫外吸收较弱且主要存在于低波区 , 给 H P L C 定量检
测带来了一定的困难 , 生药有效成分的定量分析多采用薄层扫
描方法或比色法 。 前者对某些结构相似的皂普元标准品的分离
效果不佳 滩以做到对单一组分的准确定性 、 定量测定 后者也
图 1 9 三味莲蔡散莲蔡药材色谱图
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