全 文 ：梯度洗脱反相高效液相色谱法测定
粉萆薢与绵萆薢中薯蓣皂苷含量
刘丛彬，王举涛，刘劲松，陈光亮
（安徽中医药大学药学院　现代中药安徽省重点实验室，安徽 合肥　２３００３１）
［摘要］目的　建立粉萆薢和绵萆薢中薯蓣皂苷含量的高效液相色谱测定方法。方法　色谱柱：Ｇｅｍｉｎｉ　Ｃ１８
（２５０ｍｍ×４．６０ｍｍ，５μｍ）；流动相：乙腈－０．１％磷酸水溶液，梯度洗脱；检测波长：２０３ｎｍ；流速：０．８ｍｌ／ｍｉｎ；柱
温：３０℃。结果　薯蓣皂苷与其他成分分离良好，色谱峰面积与浓度呈良好的线性关系，线性范围为７．８～
１５６．０μｇ／ｍｌ（ｒ＝０．９９９　４），平均回收率分别为９７．９９％、９７．８２％。结论　梯度洗脱反相高效液相色谱法准
确、简便、重现性好，可用于萆薢类药材的质量评价。
［关键词］萆薢；薯蓣皂苷；反相高效液相色谱法；梯度洗脱
［中图分类号］Ｒ９２７．２　［文献标志码］Ａ　［ＤＯＩ］１０．３９６９／ｊ．ｉｓｓｎ．１０００－２２１９．２０１３．０６．０２９
　　萆薢为薯蓣科植物粉背薯蓣（Ｄｉｏｓｃｏｒｅａ　ｈｙｐｏ－
ｇｌａｕｃａ　Ｐａｌｉｂｉｎ）、绵萆薢（Ｄｉｏｓｃｏｒｅａ　ｓｐｏｎｇｉｏｓａ　Ｊ．
Ｑ．Ｘｉ，Ｍ．Ｍｉｚｕｎｏ　ｅｔ　Ｗ．Ｌ．Ｚｈａｏ）、福州薯蓣（Ｄｉ－
ｏｓｃｏｒｅａ　ｆｕｔｓｃｈａｕｅｎｓｉｓ　Ｕｌｉｎｅ　ｅｘ　Ｒ．Ｋｕｎｔｈ）的块
茎［１－２］。萆薢具有利湿去浊、祛风除痹之功效，临床
多用于膏淋、白浊、白带过多、风湿痹痛、关节不利、
腰膝疼痛等［２］。萆薢药材的主要化学成分为皂苷和
甾体皂苷类化合物，其中薯蓣皂苷的含量较高，并且
薯蓣皂苷为其治疗多种疾病的活性成分［３］。对萆薢
药材的研究均集中在国内，而且多集中在药材基源、
化学成分的提取分离和临床应用等，而对此类药材
的质量研究，其目标成分多为薯蓣皂苷元［４－６］，对薯
蓣皂苷的研究［７－１０］，特别是粉萆薢和绵萆薢质量控
制的对比研究较少。对萆薢药材质量的系统研究及
药材间的对比研究更能有效区分其质量差异。本次
研究在原有粉萆薢、绵萆薢药材质量标准［１］的基础
上，进行系统的质量控制研究并以其活性成分薯蓣
皂苷作为质量评价依据，建立萆薢类药材皂苷类成
分的含量测定法，以期对萆薢类药材的质量进行控
制，对质量控制方法进行评价说明，完善并提高药材
的质量标准。
１　试药与仪器
１．１　试药　薯蓣皂苷对照品：中国药品生物制品检
定所，批号１１１７０７－２００５０１；粉萆薢３批，分别产自
安徽亳州、广西玉林和浙江龙泉，绵萆薢３批，分别
产自广西南宁、浙江丽水和湖南衡山，以上药材均经
基金项目：国家自然科学基金项目（８１０７３１１２）；安徽中医学
院自然科学基金项目（２０１２ｚｒ０２１）
作者简介：刘丛彬（１９７５－），男，讲师
通信作者：陈光亮，ｃｈｇｕａｎｇｌ＠１６３ｃｏｍ
安徽中医药大学药学院彭华胜教授鉴定。乙腈为色
谱纯，磷酸、正丁醇、氨水、９５％乙醇均为分析纯。
１．２　仪器　Ｗａｔｅｒｓ　１５２５－２４８９型高效液相色谱仪：
美国沃特世公司；ＫＱ２２００型超声波清洗器：江苏省
昆山市超声仪器有限公司；ＨＨ－Ｓ恒温水浴锅：江苏
国胜实验仪器厂。
２　方法与结果
２．１　色谱条件与系统适用性试验　色谱柱：Ｇｅｍｉ－
ｎｉ　Ｃ１８色谱柱（２５０ｍｍ×４．６０ｍｍ，５μｍ）；流动相：
有机相为乙腈，水相为０．１％磷酸；洗脱条件：有机
相－水相梯度洗脱（０～５ｍｉｎ，１０％→５０％；５～１０
ｍｉｎ，５０％→５５％；１０～１５ｍｉｎ，５５％→５７％；１５～３０
ｍｉｎ，５７％→６０％；３０～４０ｍｉｎ，６０％→７０％）；流速
０．８ｍｌ／ｍｉｎ；柱温：３０℃；进样量：１０μｌ；检测波长：
２０３ｎｍ。
２．２　对照品溶液的制备　精密称取薯蓣皂苷对照
品１９．５０ｍｇ置于２５ｍｌ容量瓶中，加甲醇溶解并稀
释至刻度，摇匀，再精密量取１．０ｍｌ，置１０ｍｌ容量
瓶中，加甲醇稀释至刻度，摇匀，作为对照品溶液。
２．３　供试品溶液的制备　取粉萆薢样品粗粉２ｇ
（绵萆薢５ｇ），精密称定，置１００ｍｌ锥形瓶中，加入
水饱和正丁醇５０ｍｌ，浸泡２４ｈ，超声提取３０ｍｉｎ，
过滤，蒸干，残渣用甲醇定量转移至２５ｍｌ容量瓶
中，并定容至刻度，摇匀，吸取少量，用０．４５μｍ微
孔滤膜滤过，取续滤液作为供试品溶液。
精密量取上述对照品溶液、供试品溶液各１０μｌ
注入高效液相色谱仪，读取色谱图。根据上述色谱
条件，所得主成分峰保留时间约为２２．５ｍｉｎ，与相
邻峰的分离度达到要求，适合萆薢药材中薯蓣皂苷
的含量测定。见图１。
１８
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安徽中医学院学报 第３２卷 第６期２０１３年１２月ＪＯＵＲＮＡＬ　ＯＦ　ＡＮＨＵＩ　ＴＣＭ　ＣＯＬＬＥＧＥ　Ｖｏｌ．３２ Ｎｏ．６ Ｄｅｃ．２０１３
图１　薯蓣皂苷对照品（Ａ）、粉萆薢供试品（Ｂ）、绵萆薢供试品（Ｃ）高效液相色谱图（１．薯蓣皂苷；２．粉萆薢；３．绵萆薢）
２．４　线性范围考察　精密吸取对照品溶液（浓度为
０．７８０ｍｇ／ｍｌ）０．１、０．４、０．８、１．２、１．６、２．０ｍｌ于１０
ｍｌ容量瓶中，加甲醇稀释至刻度，摇匀，得７．８、
３１．２、６２．４、９３．６、１２４．８、１５６．０μｇ／ｍｌ的溶液，精密
吸取２０μｌ注入高效液相色谱仪，记录薯蓣皂苷色
谱峰面积。以峰面积ｙ为纵坐标，薯蓣皂苷浓度
ｘ为横坐标绘制标准曲线，进行直线回归，得回归方
程：ｙ＝１６　６１１ｘ－１３　４７９（ｎ＝６），ｒ＝０．９９９　４，表明
薯蓣皂苷浓度在７．８～１５６．０μｇ／ｍｌ之间与峰面积
呈良好的线性关系。
２．５　精密度试验　取“２．４”项下浓度为９３．６μｇ／ｍｌ
的对照品溶液，重复进样６次，记录薯蓣皂苷色谱峰
面积，计算得ＲＳＤ＝０．５７％（ｎ＝６）。结果表明本方
法的精密度良好。
２．６　重复性试验　取同一批次的粉萆薢和绵萆薢，
按“２．３”项下方法制备供试品溶液，制备６份，测定
含量。计算得粉萆薢和绵萆薢中薯蓣皂苷平均含量
分别为１．９７％、０．５２％，ＲＳＤ分别为２．０４％、２．８９％
（ｎ＝６）。结果表明该方法重复性良好。
２．７　稳定性试验　精密吸取“２．６”项下的粉萆薢与
绵萆薢供试品溶液２０μｌ，分别于制备后０、４、８、１２、
１６、２４ｈ进样，测定薯蓣皂苷的色谱峰面积，计算得
ＲＳＤ分别为１．０５％、１．６２％（ｎ＝６）。结果表明供试
品溶液在２４ｈ内稳定性良好。
２．８　加样回收率试验　精密称取已测知含量的粉
萆薢药材粉末（薯蓣皂苷含量分别为１．９７％）５份，
每份约０．１ｇ，置于５ｍｌ容量瓶中，分别精密加入薯
蓣皂苷对照品溶液（０．７８ｍｇ／ｍｌ）２．０ｍｌ，按“２．３”
项下方法处理得供试液。分别精密吸取上述供试品
溶液２０μｌ，注入高效液相色谱仪，测定各色谱峰的
峰面积，计算薯蓣皂苷的回收率。精密称取已测知
含量的绵萆薢药材粉末（薯蓣皂苷含量分别为
０．５２％）５份，每份约０．２５ｇ，同法试验，见表１、表
２。结果表明本法准确性较好。
２．９　 样品含量测定　按“２．３”项下方法对粉萆薢
和绵萆薢两种药材各个批次（不同产地）样品进行处
理，每种药材平行制备３份溶液，注入高效液相色谱
仪，记录薯蓣皂苷色谱峰面积，以外标法计算薯蓣皂
苷的含量。结果安徽亳州、广西玉林、浙江龙泉产粉
萆薢中薯蓣皂苷含量分别为 １．１２％、１．９７％、
１．５５％，广西南宁、浙江丽水、湖南衡山产绵萆薢中
薯蓣皂苷含量分别为０．５２％、０．２９％、０．１６％。
表１　粉萆薢中薯蓣皂苷加样回收率试验结果
编号
样品量／
ｍｇ
样品
含量／ｍｇ
加入量／
ｍｇ
测得量／
ｍｇ
回收率／
％
平均
回收率／％
ＲＳＤ／
％
１　 １０４．２０　２．０５　 １．５６　 ３．６０　 ９９．１９
２　 １０５．５０　２．０８　 １．５６　 ３．６２　 ９８．８２
３　 １０２．８０　２．０２　 １．５６　 ３．５６　 ９８．３９　 ９７．９９　 １．２５
４　 ９８０．００　１．９３　 １．５６　 ３．４５　 ９７．４０
５　 １０６．６０　２．１０　 １．５６　 ３．６０　 ９６．１５
表２　绵萆薢中薯蓣皂苷加样回收率试验结果
编号
样品量／
ｍｇ
样品
含量／ｍｇ
加入量／
ｍｇ
测得量／
ｍｇ
回收率／
％
平均
回收率／％
ＲＳＤ／
％
１　 ２５２．００　１．３１　 １．５６　 ２．８５　 ９８．７２
２　 ２５３．８０　１．３２　 １．５６　 ２．８５　 ９８．０８
３　 ２５０．４０　１．３０　 １．５６　 ２．８０　 ９６．１５　 ９７．８２　 １．３６
４　 ２５０．１０　１．３０　 １．５６　 ２．８５　 ９９．３６
５　 ２４７．８０　１．２９　 １．５６　 ２．８０　 ９６．８０
３　讨论
３．１　提取条件的选择　由于粉萆薢和绵萆薢均属
根茎类中药材，药材饮片质地较为致密，所以在提取
操作前应充分浸泡，经考察，选择浸泡２４ｈ后再进
行提取，能够保证提取基本完全。
在提取方法上，考察了超声提取法、冷浸提取
法、回流提取法等，经比较，采用水饱和正丁醇直接
超声提取，提取量高，操作简便，时间较短，且色谱基
线较平稳，杂质干扰小。在提取溶剂上，考虑到目标
成分薯蓣皂苷的溶解性，考察了９５％乙醇和水饱和
正丁醇两种提取溶剂，经比较得出，虽然乙醇提取液
中薯蓣皂苷的含量较高，提取完全，但后期分离较
难，分离过程薯蓣皂苷损失较大，所以采用水饱和正
丁醇直接超声提取较为适宜。在提取次数上，以水
饱和正丁醇浸泡２４ｈ后超声提取，２次提取的提取
液中皂苷含量与１次提取无明显差别。综上，选定
本研究的提取条件。
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３．２　色谱条件的选择　薯蓣属植物中所含甾体皂
苷类成分种类繁多，结构相似，且处于末端吸收，分
离难度较大。本实验一开始采用等度洗脱，色谱峰
分离度达不到要求，且出峰时间太长，因此选择梯度
洗脱，结果表明乙腈－０．１％磷酸洗脱体系分离良好，
峰形佳，且乙腈在末端吸收较小，对测定干扰小。
３．３　粉萆薢和绵萆薢中薯蓣皂苷含量的比较　从
测定结果看出，两种植物虽为同一属，但饮片外观差
异较大，而且薯蓣皂苷的含量不同，总体来说粉萆薢
中薯蓣皂苷含量相对绵萆薢较高。两种药材的正丁
醇提取部位中共有成分峰较多，表明二者都共有多
种皂苷类成分，其详细的指纹图谱对比还有待深入
研究。
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（收稿日期：２０１３－０７－１４）
Ｇｒａｄｉｅｎｔ　Ｅｌｕｔｉｏｎ　Ｒｅｖｅｒｓｅｄ－ｐｈａｓｅ　Ｈｉｇｈ－ｐｅｒｆｏｒｍａｎｃｅ　Ｌｉｑｕｉｄ　Ｃｈｒｏｍａｔｏｇｒａｐｈｙ　ｆｏｒ
Ｄｅｔｅｒｍｉｎａｔｉｏｎ　ｏｆ　Ｄｉｏｓｃｉｎ　ｉｎ　Ｄｉｏｓｃｏｒｅａ　ｈｙｐｏｇｌａｕｃａ　Ｐａｌｉｂｉｎ．ａｎｄ　Ｄｉｏｓｃｏｒｅａｓｅｐ
ｔｅｍｌｏｂａＴｈｕｎｂ．
ＬＩＵ　Ｃｏｎｇ－ｂｉｎ，ＷＡＮＧ　Ｊｕ－ｔａｏ，ＬＩＵ　Ｊｉｎ－ｓｏｎｇ，ＣＨＥＮ　Ｇｕａｎｇ－ｌｉａｎｇ
（Ｓｃｈｏｏｌ　ｏｆ　Ｐｈａｒｍａｃｙ，Ａｎｈｕｉ　Ｕｎｉｖｅｒｓｉｔｙ　ｏｆ　Ｃｈｉｎｅｓｅ　Ｍｅｄｉｃｉｎｅ　＆Ａｎｈｕｉ　Ｋｅｙ　Ｌａｂｏｒａｔｏｒｙ　ｏｆ　Ｍｏｄｅｒｎ　Ｃｈｉ－
ｎｅｓｅ　Ｍａｔｅｒｉａ　Ｍｅｄｉｃａ，Ａｎｈｕｉ　Ｈｅｆｅｉ　２３００３１，Ｃｈｉｎａ）
［Ａｂｓｔｒａｃｔ］Ｏｂｊｅｃｔｉｖｅ　Ｔｏ　ｅｓｔａｂｌｉｓｈ　ａ　ｍｅｔｈｏｄ　ｆｏｒ　ｄｅｔｅｒｍｉｎｉｎｇ　ｄｉｏｓｃｉｎ　ｉｎ　Ｄｉｏｓｃｏｒｅａ　ｈｙｐｏｇｌａｕｃａ　Ｐａｌｉｂｉｎ．ａｎｄ
ＤｉｏｓｃｏｒｅａｓｅｐｔｅｍｌｏｂａＴｈｕｎｂ．ｂｙ　ｇｒａｄｉｅｎｔ　ｅｌｕｔｉｏｎ　ｒｅｖｅｒｓｅｄ－ｐｈａｓｅ　ｈｉｇｈ－ｐｅｒｆｏｒｍａｎｃｅ　ｌｉｑｕｉｄ　ｃｈｒｏｍａｔｏｇｒａｐｈｙ
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２０３ｎｍ，ａ　ｆｌｏｗ　ｒａｔｅ　ｏｆ　０．８ｍｌ／ｍｉｎ，ａｎｄ　ａ　ｃｏｌｕｍｎ　ｔｅｍｐｅｒａｔｕｒｅ　ｏｆ　３０℃．Ｒｅｓｕｌｔｓ　Ｄｉｏｓｃｉｎ　ｗａｓ　ｗｅｌ　ｓｅｐａｒａ－
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