全 文 ：168　高效液相色谱法测定草乌叶中新乌头碱、乌头碱和次乌头碱
辛　杨 1　王淑敏 1*　刘志强 2
( 1. 长春中医药大学　吉林 长春　 130117; 2. 中国科学院长春应用化学研究所 新药研究室　吉林 长春　 130022)
摘　要　目的　建立以高效液相色谱法同时测定蒙药草乌叶中新乌头碱、乌头碱、次乌头碱的方法。 方法
Ex tend-C18柱 ( 250 mm× 4. 6 mm, 5μm ) ,流动相为甲醇 -0. 3 mol /L三乙胺 ( 65∶ 35) ,体积流量为 0. 8 m L /min,检测
波长为 235 nm,柱温为 35℃。结果　经过方法学考察 ,本测定方法具有一定的专属性、准确性、重现性和可行性 ,新
乌头碱、乌头碱、次乌头碱分别在 1～ 5、 0. 35～ 1. 75、 0. 5～ 2. 5μg呈良好的线性关系 ,平均加样回收率分别为
98. 43% 、 98. 98% 、 98. 82% , RSD分别为 1. 38% 、 0. 89% 、 1. 03%。 结论　本方法简便、准确、分离效果好、线性范围
宽、灵敏度高 ,可用于本品的质量控制。
关键词　高效液相色谱法　草乌叶　新乌头碱　乌头碱　次乌头碱
Determination of mesaconitine, aconiline, and hypaconitine in leaves
of Aconitum kusnezoffii by HPLC
X IN Yang
1　WANG Shu-min1　 LIU Zhi-qiang2
( 1. Changchun Univ er sity o f Tr aditiona l Chinese Medicine, Changchun 130117, China; 2. Labo ra to ry o f New Drug
Resea rch, Changchun Institute of Applied Ch emistr y, Chinese Academy of Sciences, Changchun 130022, China )
Abstract: Objective　 To establish an HPLC method fo r simul taneous content determination of
mesaconi tine, aconi tine, and hypaconitine in leaves of Aconitum kusnezof f ii . Methods　 Ex tend-C18 ( 250
mm× 4. 6 mm , 5μm) was used as chromatog raphic column, methano l-0. 3 mol /L t riethylamine ( 65∶ 35)
as mobile phase. The detection waveleng th was set at 235 nm, the flow ra te a t 0. 8 mL /min and the
column temperature at 35℃ . Results　 The linea r range of mesaconi tine, aconi tine, and hypaconi tine w ere
1～ 5, 0. 35～ 1. 75, and 0. 5～ 2. 5μg , respectiv ely. The average recycle rates o f the added sample w ere
98. 43% , 98. 98% , and 98. 82% , respectiv ely , RSD were 1. 38% , 0. 89% , and 1. 03% , respectiv ely.
Conclusion　 The established method is convenient and accurate w ith sati sfactory separation ef fect , wide
linea r range, and high sensi tiv ity, and can be available fo r the quali ty control of leav es o f A. kusnezof f ii .
Key words: HPLC, leaves of Aconitum kusnezof f ii Reichb. , mesaconitine, aconi tine, hypaconitine
　　蒙药草乌叶为毛茛科乌头属植物北乌头
Aconitum kusnezof f ii Reichb.的干燥叶 ,具有清热
解毒的作用 ,为蒙医常用药 ,记载于《无误蒙药鉴》、
《晶珠本草》等历代医学著作 ,并收载于 1977、 1985、
1990、 2000、 2005年版《中国药典》 [1 ]以及《内蒙古药
材标准》 [2 ]和《中国医学百科全书 (蒙医学 )》等。草乌
叶一般于夏季叶茂盛、花未开时采集 ,除去杂质及时
干燥 ,有消炎、清热、解毒、止痛作用 ;蒙医临床上用
于治疗热病 ,如发热、泄泻、腹痛、头痛、牙痛、淋巴腺
肿大、流行性感冒等。 草乌叶主要活性成分为生物
碱 ,除此之外还含肌醇和鞣质。于等 [ 3 ]从草乌叶乙醇
提取物中分离到 5个化合物。 本实验利用高效液相
色谱技术测定了草乌叶中的生物碱 ,为该药材的开
发利用提供科学依据。
1　仪器与试药
1. 1　仪器
Waters 2695高效液相色谱仪 ,包括二级管阵
列检测器、进样器、柱温箱。
1. 2　试药与药材
乌头碱对照品 (批号: 0720-200410)、新乌头碱
对照品 (批号: 0799-200404)、次乌头碱对照品 (批
号: 0799-9403)购自中国药品生物制品检定所 ,甲
醇为色谱纯 ,水为超纯水 ,其他试剂为分析纯。草乌
叶采于通辽市罕山地区 ,经王淑敏教授鉴定为毛茛
170 国外医药·植物药分册　　 2008年第 23卷第 4期
作者简介:辛　杨 ,女 , 2006级硕士研究生 ,研究方向为中药质量控制及标准化研究。
　* 通讯作者　王淑敏 ,女 ,教授 ,硕士研究生导师。 　 Tel: ( 0431) 86172206, E-mai l: minshuw@ sina. com. cn
科乌头属植物北乌头 A. kusnezof f i i Reichb. 的叶。
2　方法与结果
2. 1　对照品溶液的制备
准确称取新乌头碱 5 mg、乌头碱 1. 75 mg、次乌
头碱 2. 5 mg ,置于 10 m L量瓶中 ,加甲醇溶液溶解
并稀释至刻度 ,摇匀 ,即得。
2. 2　供试品溶液的制备
精密称定草乌叶 1 g ,置具塞锥形瓶中 ,用 2%氨
水湿润 20 min,精密加乙醚 25 mL,密塞 ,摇匀 ,称定
质量 ,超声处理 30 min,取出 ,放冷 ,再称定质量 ,用
乙醚补足减失的质量 ,摇匀 ,滤过 ,取续滤液作为供
试品溶液。
2. 3　色谱条件
色谱柱: Ex tend-C18 ( 250 mm× 4. 6 mm, 5
μm) ;流动相: 甲醇-0. 3 mol /L三乙胺 ( 65∶ 35) ;体
积流量: 0. 8 mL /min; 检测波长: 235 nm; 柱温:
35℃。
2. 4　线性关系考察
精密吸取对照品溶液 2、 4、 6、 8、 10μL,分别注入
液相色谱仪 ,以峰面积为纵坐标 ,进样量 (μL)为横
坐标 ,绘制标准曲线 ,求得回归方程分别为: 新乌头
碱 Y= 1 028. 3 X - 12. 59, r= 0. 999 21;乌头碱 Y=
1 253. 6X + 9. 32, r = 0. 999 18;次乌头碱 Y =
1 178. 8X - 0. 52, r= 0. 999 16。结果表明新乌头碱、
乌头碱和次乌头碱分别在 1～ 5、 0. 35～ 1. 75、 0. 5～
2. 5μg呈良好的线性关系。
2. 5　精密度试验
取新乌头碱、乌头碱、次乌头碱质量浓度分别为
5、 1. 75、 2. 5μg /mL的对照品贮备液 (即将“ 2. 1”项
下溶液稀释 100倍 ) 10μL,连续进样 5次 ,测定 ,记
录 3种生物碱的峰面积积分比值 ,结果新乌头碱、乌
头碱、次乌头碱的 RSD分别为 1. 32% 、 1. 41%、
1. 29% ,表明精密度良好。
2. 6　重现性试验
取草乌叶药材 3份 ,按“ 2. 2”项下方法制备成供
试品溶液 ,并按“ 2. 3”项下色谱条件进样测定 ,结果
样品中新乌头碱、乌头碱、次乌头碱平均质量分数的
RSD分别为 1. 04% 、 0. 92%、 0. 79%。
2. 7　稳定性试验
取“ 2. 2”项下供试品溶液 ,分别于 0、 4、 8、 16、 24
h进样测定。结果新乌头碱、乌头碱、次乌头碱 RSD
分别为 1. 34% 、 1. 21% 、 1. 48% ,表明溶液在 24 h内
基本稳定。
2. 8　回收率试验
取已知新乌头碱、乌头碱、次乌头碱量的草乌叶
药材 3份 ,每份分别加入新乌头碱、乌头碱和次乌头
碱对照品适量 ,按“ 2. 2”项下方法进行制备 ,测定回
收率 ,结果见表 1。
表 1　回收率试验结果
成分 样品中的量 /μg
加入量 /
μg
测得量 /
μg
回收率 /
%
均值 /
%
RSD /
%
新乌头碱 0. 66 0. 66 1. 31 98. 48 98. 98 0. 89
0. 66 0. 66 1. 32 100. 00
0. 65 0. 65 1. 29 98. 46
乌头碱　 0. 41 0. 41 0. 82 100. 00 98. 43 1. 38
0. 42 0. 42 0. 83 97. 62
0. 43 0. 41 0. 83 97. 67
次乌头碱 0. 56 0. 56 1. 11 98. 21 98. 82 1. 03
0. 56 0. 56 1. 12 100. 00
0. 57 0. 57 1. 13 98. 25
2. 9　样品测定
　　按“ 2. 2”项下方法制备供试品溶液 ,按“ 2. 3”项
下色谱条件进样测定 ,根据 3个成分的线性回归方
程 ,对草乌叶提取液中成分的量进行计算 ,见表 2。
表 2　样品测定结果 ( n= 3)
成分 质量分数 /%
1 2 3
平均质量
分数 /% RSD /%
新乌头碱 0. 66 0. 67 0. 66 0. 66 0. 87
乌头碱 0. 43 0. 41 0. 42 0. 42 2. 43
次乌头碱 0. 56 0. 55 0. 57 0. 56 1. 80
3　讨论
采用本法测定草乌叶中的新乌头碱、乌头碱、次
乌头碱 ,方法简单、快速 ,结果准确 ,可作为该药材及
制剂的质量控制方法。
参考文献
[1 ]　中国药典 [ S] .一部 . 2005
[2 ]　中华人民共和国药品标准 [S ] .蒙药分册 . 1998.
[3 ]　于海兰 , 贾世山 . 蒙药草乌叶中一个新二萜生物碱 [ J ]. 药学
学报 , 2000, 35( 3): 232-234.
(收稿日期 2008-04-28)
本 刊 启 事
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《国外医药· 植物药分册》编辑部
171国外医药·植物药分册　　 2008年第 23卷第 4期