全 文 ：Central South Pharmacy. February 2016, Vol. 14 No.2　中南药学 2016 年 2 月 第 14 卷 第 2 期
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法半夏配方颗粒的高效液相色谱指纹图谱研究
薛乾鑫1，2，王晖1*，武拉斌2，王莹2（1. 广东药学院，广州　510006；2. 康美（北京）药物研究院有限公司，北京　
102609）
摘要：目的　建立法半夏配方颗粒的 HPLC指纹图谱，为其质量控制和评价提供可靠的科学依据。方
法　采用 Agilents Eclipse XDB-C18柱（4.6 mm×250 mm，5 μm）色谱柱，流动相：0.1%乙酸（A）-
甲醇（B）梯度洗脱，程序梯度为 0～ 5 min，99.9%A；5～ 10 min，99.9%～ 97%A；10～ 20 min，
97%～ 95%A；20～ 30 min，95%～ 90%A；30～ 80 min，90%～ 40%A。检测波长 254 nm，流速 1.0
mL·min－ 1，柱温 30℃。结果　得到了稳定性、重复性、分离度均较高的法半夏配方颗粒的 HPLC指
纹图谱，确定了 21个共有峰，各法半夏配方颗粒样品指纹图谱与对照指纹图谱相似度均在 0.9以上，
该方法可定性鉴别法半夏配方颗粒。结论　法半夏配方颗粒指纹图谱的建立，能够高效地评价其质量。
关键词：法半夏配方颗粒；高效液相色谱法；指纹图谱；相似度
中图分类号：R284　　　　文献标识码：A　　　　文章编号：1672-2981(2016)02-0170-05
doi:10.7539/j.issn.1672-2981.2016.02.015
HPLC fingerprint analysis of Pinelliae Rhizoma praeparatum formula granules
XUE Qian-xin1, 2, WANG Hui1*, WU La-bin2, WANG Ying2 (1.Guangdong Pharmaceutical University,
Guangzhou 510006; 2. Kangmei Pharmaceutical Research Institute Co, Ltd., Beijing 102609)
Abstract: Objective To establish an HPLC fingerprint method for Pinelliae Rhizoma praeparatum formula
granules and provide a reference for quality control and evaluation of Pinelliae Rhizoma praeparatum formula
granules. Methods The chromatographic fingerprints were obtained by Agilents Eclipse XDB-C18 column (4.6
mm×250 mm, 5 μm) with the gradient elution and the solvent system composed of 0.1% acetic acid solution
(A)-methanol (B): 0－ 5 min, 99.9%A; 5－ 10 min, 99.9%－ 97%A; 10－ 20 min, 97%－ 95%A; 20－ 30
min, 95%－ 90%A, and 30－ 80 min, 90%－ 40%A. The detective wavelength was 254 nm; the flow rate and
the column temperature were 1.0 mL·min－ 1 and 30℃ . Results A fingerprint for Pinelliae Rhizoma praepa-
ratum formula was established with high stability, respeatability and resolution. We selected 21 co-possessing
peaks as the fingerprint peaks of Pinelliae Rhizoma praeparatum formula granules and they all showed good
similarities with correlation coefficients higher than 0.9 in fingerprints between different samples of Pinelliae
Rhizoma praeparatum formula granules. Conclusion The HPLC fingerprint of Pinelliae Rhizoma praeparatum
formula can effectively evaluate the quality of Pinelliae Rhizoma praeparatum formula granules.
Key words: Pinelliae Rhizoma praeparatum formula granule; HPLC; fingerprint; similarity
作者简介：薛乾鑫，女，在读硕士研究生，主要从事中药学研究，Tel：13631435674，E-mail：13631435674@163.com　*通讯作者：王晖，
男，硕士，教授，主要从事外用中药药理学研究，Tel：（020）39352880，E-mail：gdwanghui2006@126.com
　　半夏为天南星科植物半夏 Pinellia ternate（Thnub）
Breit.的干燥根茎，药用历史悠久，由于生用毒性大，
一般用其炮制品。法半夏是中国药典 2010年版一部中
收载的炮制品种之一，是以甘草和石灰为辅料炮制而
成的常用中药，具有燥湿化痰之功效，用于痰多咳喘、
痰饮眩悸、风痰眩晕、痰厥头痛等症状 [1]。法半夏配
方颗粒是供临床配方应用的新型饮片，由法半夏饮片
（符合炮制规范）经提取、浓缩、干燥、制粒等工序
而制成。中药配方颗粒突破了传统中药饮片的服用模
式，并且具有质量可控、易储存、疗效高、携带方便
等优点 [2]。中药配方颗粒也将逐渐成为中药材改革的
趋势，因此建立可行的质量标准尤为重要。
　　目前，国内对于半夏及其炮制品的质量控制及指
纹图谱的研究较多 [3-5]，采用较多的是 HPLC法 [6]、
中药定量指纹图谱与中药标准制剂
中南药学 2016 年 2 月 第 14 卷 第 2 期　Central South Pharmacy. February 2016, Vol. 14 No.2
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UPLC法 [7]，也有人采用柱前衍生 RP-HPLC法 [8]、薄
层扫描法 [9]等对半夏及其炮制品进行鉴别，但是有关
法半夏配方颗粒指纹图谱的研究尚未见报道。本文采
用高效液相法对法半夏配方颗粒进行分析研究，确立
法半夏配方颗粒的对照指纹图谱，并将其与半夏对照
药材、甘草对照药材进行比对，初步确定主要色谱峰
的归属。不仅为中药配方颗粒真伪鉴别和质量优劣评
价提供科学的方法，而且为法半夏配方颗粒生产过程
中质量控制提供可靠的依据。
1　材料
1.1　仪器
　　Agilent 1100型高效液相色谱仪，Agilent Chem Sta-
tion数据处理软件系统（美国安捷伦公司）；G1315D
型 DAD检测器，G1311C型四元梯度泵，KQ-500DE
型数控超声波清洗器（昆山市超声波仪器有限公司）；
Mettler Toledo XP6电子天平（瑞士梅特勒 -托利多公
司，精密度：0.01 mg）；Mettler Toledo AL204电子天平（瑞
士梅特勒 -托利多公司，精度：0.001 g）。
1.2　试药
　　鸟苷（批号：111977-201501）、尿苷（批号：
887-200202）、肌苷（批号：140669-201305）、腺苷（批号：
110879-200202）、甘草苷（批号：111610-201106）（中
国食品药品检定研究院，供含量测定用）；法半夏配
方颗粒 [批号分别为：14070301、14080301、14090303、
14100901、14110303、14120301、15010703、15020301、
15030303、15040302，康美（北京）药物研究院有限公司 ]；
甲醇（色谱纯，Fisher），液相用水为超纯水，其余试
剂均为分析纯。
2　方法与结果
2.1　色谱条件
　　色谱柱：Agilents Eclipse XDB-C18柱（4.6 mm×250
mm，5 μm），检测波长：254 nm，流速：1.0 mL·min－ 1，
柱温：30℃，进样体积：20 μL，流动相：0.1%乙酸（A）-
甲醇（B），按表 1进行梯度洗脱。
表 1　流动相洗脱条件
Tab 1　Mobile phase elution
时间
（time）/min
流动相 A
（mobile phase A）/%
流动相 B
（mobile phase B）/%
0～ 5 99.9 0.1
5～ 10 99.9～ 97 0.1～ 3
10～ 20 97～ 95 3～ 5
20～ 30 95～ 90 5～ 10
30～ 80 90～ 40 10～ 60
2.2　对照品溶液的制备
　　精密称取鸟苷、尿苷、肌苷、腺苷、甘草苷各 2
mg置于 10 mL 量瓶中，加水定容，摇匀，0.45 μm微
孔滤膜过滤，即得。
2.3　阴性样品溶液的制备
　　精密称取麦芽糊精约 0.105 g，甲基淀粉钠约 0.021
g置于具塞锥形瓶，向其中加入 10 mL水，称重，超
声 30 min，取出，放冷，用水补足减失的重量，摇匀，
滤过，取续滤液过 0.45 μm 滤膜，即得。
2.4　供试品溶液的制备
　　精密称取 10批法半夏配方颗粒，每批次称取约 1.0
g，称重，向其中加入 10 mL水，超声 30 min，取出，
放冷，用水补足减失的重量，摇匀，滤过，取续滤液
过 0.45 μm 滤膜，即得。
2.5　方法学考察
2.5.1　重复性试验　精密称取同一批号样品（批号：
14121102），按照“2.4”项下方法分别制备 6份供试
品溶液，进行检测，记录色谱图，以 9号峰鸟苷为参
照峰，对 1～ 21号共有指纹峰的相对保留时间及相对
峰面积进行统计，RSD均＜ 3%，通过相似度评价软
件计算各色谱指纹图谱的相似度，其结果均＞ 0.99，
表明本方法重复性较好。
2.5.2　精密度试验　精密称取同一批样品（批号：
14121102），按照“2.4”项下方法制备供试品溶液，
连续进样检测 5 次，并记录色谱峰，以 9号峰鸟苷为
参照峰，对 1～ 21号共有指纹峰的相对保留时间及相
对峰面积进行统计，RSD均＜ 3%，通过相似度评价
软件计算各色谱指纹图谱的相似度，其结果均＞ 0.99，
表明仪器精密度良好、稳定。
2.5.3　稳定性试验　精密称取同一批样品（批号：
14121102），按照“2.4”项下方法制备供试品溶液，
分别在制备样品后 0、4、8、12、24 h 进样，进行检测，
并记录色谱峰，以 9号峰鸟苷为参照峰，对 1～ 21号
共有指纹峰的相对保留时间及相对峰面积进行统计，
RSD均＜ 3%，通过相似度评价软件计算各色谱指纹图
谱的相似度，其结果均＞ 0.99，表明供试品溶液在 24 h
内稳定。
2.5.4　专属性试验　精密吸取“2.3”项下阴性样品溶
液20 μL，注入色谱仪，按照上述色谱条件，记录色谱峰，
阴性样品溶液对法半夏配方颗粒指纹图谱共有峰检出
无干扰（见图 1）。
图 1　阴性样品溶液图谱
Fig 1　HPLC of negative sample
2.6　指纹图谱的建立
2.6.1　指纹图谱的获得　取“2.2”项下对照品溶液及
“2.4”项下供试品溶液在“2.1”项色谱条件下进样，
得到 10个批号法半夏配方颗粒 HPLC指纹图谱，结果
见图 2。
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图 2　10个批号法半夏配方颗粒 HPLC指纹图谱
Fig 2　HPLC fingerprint of 10 batches of Pinelliae Rhizoma
praeparatum formula granules
2.6.2　共有峰和参照峰的确认　分析 10批样品的测
定结果，选择稳定性好、吸收性强、特征明显的色谱
峰为共有峰共 21个（见图 3）。共有峰占总峰面积的
85%以上，符合共有峰的要求。由样品指纹图谱可见
9号峰峰形对称，峰面积较大，与左右峰都能达到极
限分离，故选择该峰为参照峰，其他共有峰的相对峰
面积和相对保留时间见表 2～ 3。经与对照品对照，9
号峰为鸟苷。
2.6.3　指纹图谱中特征峰的归属分析　因为法半夏配
方颗粒是经提取、浓缩、干燥、制粒等工序制成的，
而法半夏饮片（符合炮制规范）是半夏药材以甘草和
石灰为辅料炮制而成的，所以法半夏既有半夏的成分，
同时也含有甘草的成分。取半夏对照药材、甘草对照
药材，按照“2.4”项下方法制备各个对照药材供试品
溶液；同时取尿苷、肌苷、鸟苷、腺苷、甘草苷对照
品加水溶解配成相应的对照品溶液，依照上述方法进
行测定，通过比较，峰 7、8、9、10、21均有较好的
归属性，其中峰 7-尿苷、峰 8-肌苷、峰 9-鸟苷、峰
10-腺苷为半夏特征性成分，峰 21-甘草苷为甘草特征
性成分（见图 3～ 5）。
图 5　混合对照品图谱及其紫外光谱图
Fig 5　Mixed reference substance and its ultraviolet spectrogram
7.尿苷（urdine）；8.肌苷（inosine）；9.鸟苷（guanosine）；10.腺
苷（adenosine）；21.甘草苷（licorice glycosides）
图 4　法半夏配方颗粒指纹图谱的特征峰归属性
Fig 4　Belonging fingerprint of characteristic peak of Pinelliae Rhizoma
praeparatum formula granules
A.半夏对照药材（Pinelliae Rhizoma praeparatum control material）；
B.甘草对照药材（licorice control material）；C.法半夏配方颗粒
（Pinelliae Rhizoma praeparatum formula granule）；D. 混合对照品
（mixed reference substance）；7.尿苷（urdine）；8.肌苷（inosine）；
9.鸟苷（guanosine）；10.腺苷（adenosine）；21.甘草苷（licorice
glycosides）
2.6.5　指纹图谱共有模式的确立　采用中药色谱指纹
图谱相似度评价系统软件（2012A版）对 10批法半夏
配方颗粒进行模式识别，获得法半夏指纹图谱共有模
式，见图 6。
图 6　法半夏配方颗粒共有模式指纹图谱
Fig 6　Fingerprint patterns of Pinelliae Rhizoma praeparatum
formula granules
3　讨论
　　本实验分别考察法半夏配方颗粒的提取溶剂、流
动相系统、色谱柱及检测波长。提取溶剂主要是对
水、甲醇、50%甲醇进行研究，结果提取溶剂以甲醇
及 50%甲醇所制备的供试品溶液峰响应值低、分离度
图 3　法半夏配方颗粒对照指纹图谱
Fig 3　Control fingerprint of Pinelliae Rhizoma praeparatum formula
granules
7. 尿苷（urdine）；8. 肌苷（adenosine）；9. 鸟苷（guanosine）；
10.腺苷（adenosine）；21.甘草苷（licorice glycosides）
2.6.4　指纹图谱的相似度评价　采用中药色谱指纹图
谱相似度评价系统软件（2012A版）对 10批法半夏配
方颗粒分别进行相似度评价，计算各色谱图的整体相
似度。S1～ S10相似度分别为 0.969、0.954、0.953、
0.974、0.975、0.997、0.995、0.996、0.992、0.996。
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表 2　10批法半夏配方颗粒共有峰的相对峰面积
Tab 2　Relative peak area of the 10 batches of Pinelliae Rhizoma praeparatum formula granules
No.
样品号（the sample sequence）
S1 S2 S3 S4 S5 S6 S7 S8 S9 S10
1 1.531 0.457 0.471 1.181 1.521 1.214 1.247 1.217 1.360 1.637
2 0.090 0.076 0.082 0.069 0.090 0.084 0.084 0.084 0.077 0.091
3 0.138 0.129 0.132 0.141 0.136 0.120 0.136 0.137 0.140 0.138
4 0.117 0.110 0.104 0.139 0.124 0.098 0.110 0.111 0.114 0.117
5 1.046 1.595 1.624 1.651 1.030 1.414 1.385 1.380 1.376 1.082
6 0.234 0.129 0.130 0.131 0.233 0.217 0.219 0.142 0.208 0.241
7 0.889 0.809 0.819 0.912 0.897 0.864 0.860 0.865 0.857 0.913
8 0.141 0.025 0.023 0.057 0.143 0.080 0.083 0.077 0.081 0.118
9 1.000 1.000 1.000 1.000 1.000 1.000 1.000 1.000 1.000 1.000
10 0.266 0.191 0.207 0.113 0.259 0.219 0.232 0.234 0.237 0.270
11 0.307 0.144 0.149 0.165 0.304 0.186 0.184 0.176 0.176 0.268
12 0.244 0.413 0.379 0.466 0.335 0.374 0.284 0.377 0.297 0.261
13 0.235 0.121 0.125 0.122 0.229 0.172 0.173 0.169 0.151 0.232
14 0.222 0.129 0.134 0.155 0.229 0.174 0.179 0.178 0.189 0.242
15 0.463 0.227 0.238 0.253 0.446 0.255 0.247 0.242 0.214 0.352
16 0.249 0.277 0.273 0.351 0.222 0.283 0.214 0.221 0.216 0.231
17 0.089 0.129 0.131 0.158 0.090 0.154 0.156 0.155 0.171 0.154
18 0.369 0.241 0.246 0.218 0.341 0.275 0.278 0.275 0.313 0.362
19 0.153 0.112 0.116 0.098 0.152 0.131 0.133 0.131 0.138 0.160
20 0.250 0.064 0.080 0.108 0.233 0.108 0.104 0.100 0.088 0.175
21 0.280 0.101 0.099 0.077 0.406 0.152 0.152 0.155 0.158 0.442
表 3　10批法半夏配方颗粒共有峰的相对保留时间
Tab 3　Relative retention time of the common peak of 10 batches of Pinelliae Rhizoma praeparatum formula granules
No.
样品号（the sample sequence）
S1 S2 S3 S4 S5 S6 S7 S8 S9 S10
1 0.119 0.120 0.120 0.121 0.121 0.120 0.121 0.121 0.121 0.121
2 0.208 0.210 0.211 0.210 0.210 0.210 0.209 0.209 0.209 0.209
3 0.257 0.257 0.257 0.258 0.258 0.257 0.257 0.257 0.258 0.257
4 0.274 0.272 0.272 0.273 0.274 0.273 0.273 0.273 0.274 0.274
5 0.335 0.331 0.332 0.333 0.336 0.334 0.334 0.334 0.335 0.337
6 0.407 0.407 0.407 0.407 0.407 0.407 0.407 0.407 0.407 0.407
7 0.555 0.554 0.556 0.554 0.554 0.553 0.554 0.553 0.553 0.553
8 0.947 0.944 0.949 0.949 0.951 0.951 0.950 0.950 0.951 0.951
9 1.000 1.000 1.000 1.000 1.000 1.000 1.000 1.000 1.000 1.000
10 1.103 1.104 1.104 1.105 1.105 1.104 1.104 1.103 1.102 1.104
11 2.132 0.039 0.030 0.030 0.024 0.041 0.033 0.032 0.033 0.031
12 1.238 1.237 1.238 1.238 1.239 1.239 1.240 1.238 1.238 1.241
13 1.508 1.508 1.510 1.510 1.511 1.511 1.509 1.508 1.508 1.512
14 1.584 1.586 1.587 1.586 1.587 1.586 1.585 1.584 1.583 1.586
15 1.624 1.625 1.627 1.628 1.629 1.628 1.627 1.626 1.625 1.629
16 1.840 1.840 1.842 1.843 1.844 1.844 1.843 1.843 1.842 1.847
17 2.080 2.081 2.086 2.086 2.088 2.087 2.084 2.083 2.083 2.088
18 2.174 2.175 2.180 2.180 2.182 2.181 2.179 2.178 2.178 2.183
19 2.294 2.296 2.300 2.302 2.303 2.303 2.299 2.298 2.298 2.303
20 2.513 2.515 2.521 2.522 2.524 2.524 2.520 2.519 2.519 2.525
21 3.136 3.137 3.144 3.147 3.152 3.151 3.147 3.146 3.146 3.155
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低、峰少，而水提取制备的供试品其色谱峰响应值高、
分离度高、峰多，特征峰明显，故以水作为提取溶剂。
采用 DAD检测器对图谱进行全波长扫描，结果显示，
254 nm下的色谱峰信息较为丰富，故以 254 nm作为
检测波长。考察了 Agilents Eclipse XDB-C18、Waters
Symmetry C18、Ecosil HPLC C18等 3种不同型号的色
谱柱的分离效果，发现 Agilents Eclipse XDB-C18柱色
谱峰峰形尖锐，色谱峰峰信息量大，分离度好。分别
对甲醇 -水、乙腈 -水、甲醇 -0.1%乙酸、乙腈 -0.1%
乙酸 4种流动相系统展开考察，最后选取甲醇 -0.1%
乙酸作为流动相，并进行梯度洗脱，在此条件下色谱
峰峰值响应度高，色谱峰信息较为丰富。以尿苷、肌
苷、鸟苷、腺苷、甘草苷为对照峰确定了法半夏配方
颗粒的 21个共有峰，并且阴性空白对照溶液无干扰，
10批法半夏配方颗粒指纹图谱基本一致，相似度计算
结果均＞ 0.9，表明法半夏配方颗粒的指纹图谱测定方
法稳定、可靠。利用 HPLC指纹图谱可为法半夏配方
颗粒质量控制提供可靠依据。
参考文献
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（收稿日期：2015-10-22；修回日期：2015-11-23）
蒸馏法是丹皮酚提取最常用的方法，其中水蒸气蒸馏
法又分为直接水蒸气蒸馏法、加盐 -水蒸气蒸馏法、
加酸 -水蒸气蒸馏法、加盐加酸 -水蒸气蒸馏法 [7-9]。
加盐能够降低丹皮酚在水中的溶解度，加速其溶出；
牡丹皮中含有丹皮酚苷、丹皮酚新苷及丹皮酚原苷等
苷类物质，加酸可使这些丹皮酚苷类物质水解，从而
在一定程度上提高丹皮酚的提取率。相比于直接水蒸
气蒸馏法，加盐酸 -水蒸气蒸馏法虽然能在一定程度
上能提高丹皮酚的提取率，但增幅并不是特别明显；
同时在提取过程中加入的盐酸可能会对牡丹皮中其他
有效成分产生影响，因此在实际的生产过程中要考虑
到加入的盐酸对提取成分的综合影响。基于此考虑，
在本试验研究中采用直接水蒸气蒸馏法提取牡丹皮中
的丹皮酚，并对主要的影响因素进行了研究。
3.2 丹皮酚的包合
丹皮酚易挥发、水溶性差、见光易分解的性质影
响了其在制剂中的稳定性和生物利用度。诸多如六味
地黄浓缩丸、六味地黄软胶囊等传统中药制剂中的丹
皮酚不经过处理而直接加入到药物细粉中，使制剂中
的丹皮酚具有一定程度的不稳定性。对丹皮酚进行环
糊精包合技术研究及其工艺优化有利用提高制剂中丹
皮酚的稳定性和生物利用度，从而提高制剂质量水平。

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（收稿日期：2015-08-03；修回日期：2015-10-10）
(上接第 169页 )