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HPLC测定不同采收期唇香草中 5 种化学成分的动态变化*
周晓英1 丁文欢2 张雪佳3 田树革2#
(1 新疆医科大学药学院 乌鲁木齐 830054;2 新疆医科大学中心实验室;
周晓英，女，教授
# 通信作者:田树革，男，教授，硕士生导师，研究方向:中药资源化学与质量标准，E-mail:tianshuge@ hotmail． com
* 新疆维吾自治区科技支撑计划项目(No． 201233134)
3 新疆医科大学中医学院)
摘要:目的 测定不同采收期唇香草中 5 种化学成分的动态变化，初步确定唇香草的最佳采收期。
方法 采用 20%二甲基亚砜甲醇溶液提取唇香草，利用高效液相色谱法，以 0． 3% 甲酸甲醇
－ 0． 3%甲酸水为流动相进行梯度洗脱，以 290 nm为检测波长，同时测定不同生长期唇香草中咖啡
酸、迷迭香酸、地奥司明、蒙花苷以及胡薄荷酮 5 种化学成分的含量。结果 在上述色谱条件下，5
个化学成分的线性关系、分离度、重复性以及回收率等均符合要求，不同采收期的唇香草中均是蒙
花苷和地奥司明的含量较高，胡薄荷酮的含量居中，咖啡酸和迷迭香酸含量较低;5 种化学成分在
唇香草不同采收时期的含量存在差异，但在开花前期和开花期 5 种化学成分的含量均较高。
结论 可初步确定唇香草的最佳采收期为开花期，其化学成分的动态变化规律可为唇香草的规范
化种值(GAP)生产提供基础数据。
关键词:唇香草;高效液相色谱法;动态变化
中图分类号:Ｒ284． 1 doi:10． 3969 / j． issn． 1006-2157． 2015． 02． 013
Ｒesearch on dynamic changes of five chemical components of Ziziphora
clinopodioides Lam． at different growth stages using HPLC*
ZHOU Xiao-ying1，DING Wen-huan2，ZHANG Xue-jia3，TIAN Shu-ge2#
(1 Pharmacy School，Xinjiang Medical University，Urumqi 830054;2 Central Laboratory，Xinjiang
Medical Unirersity;3 School of TCM，Xinjiang Medical University)
Abstract:Objective To measure the dynamic changes of five chemical components of Ziziphora
clinopodioides Lam． at different growth stages， and to determine the optimal harvesting time．
Methods The Ziziphora clinopodioides Lam． was extracted from 20 % dimethyl sulfoxide-methanol
solution． The method of High Performance Liquid Chromatography (HPLC)was used，with the 0． 3%
mobile phase of formic acid-methanol － 0． 3% formic acid on a gradient elution，to detect the Caffeic
acid，Ｒosemary acid， Diosmin， Linarin and Pulegone in different growth periods of Ziziphora
clinopodioides Lam． at 290 nm wave length at the same time． Ｒesults With these chromatographic
parameters，the linear relationship，degree of separation，precision，stability，repeatability and recovery
rate of the five components were all qualified． The contents of Linarin and Diosmin were the highest，with
Pulegone second to it while the Caffeic acid and Ｒosemary acid’s contents were lower at different growth
periods． And these five chemical components in Ziziphora clinopodioides Lam． varied at different growth
periods． But all of them were higher in pre-flowering period and flowering period． Conclusion According
to the data，we can determine the flowering period was the optimal harvesting time for Ziziphora
clinopodioides Lam． initially． The pattern of dynamic changes of the chemical components of Ziziphora
031
北京中医药大学学报
Journal of Beijing University of Traditional Chinese Medicine
第 38 卷第 2 期 2015 年 2 月
Vol． 38 No． 2 Feb． 2015
clinopodioides Lam． could provide the basic data for the Good Agriculture Practice (GAP)of Ziziphora
clinopodioides Lam．
Key words:Ziziphora clinopodioides Lam．;HPLC;dynamic changes
唇香草(Ziziphora clinopodioides Lam．)为唇形科
新塔花属植物唇香草的干燥地上部分，主要分布于
新疆的阿勒泰山、天山、准噶尔西部山地、帕米尔高
原的山地草原及砾石质坡地［1］。唇香草是一味维
吾尔医常用药，味辛，性寒，具有疏散风热、清利头
目、宁心安神、利水清热、壮骨强身、清胃消食等功效
主要用于治疗心脏病、高血压、气短多汗、心悸失眠、
水肿、咳嗽、气管炎、肺脓肿等疾病［2］。
近年来，国内外对唇香草不同提取部位的生物
活性进行研究，结果表明其具有抑菌、抗氧化、舒张
血管、提高免疫力等生物活性［3 － 7］。对其化学成分
的研究，主要采用可见分光光度法测定唇香草中的
总成分，利用高效液相色谱法测定了唇香草中黄酮
类以及有机酸类成分并建立了唇香草的指纹图谱以
及唇香草的质量标准［8 － 13］。对其化学成分的动态
变化未见报道，而不同生长周期植物中化学成分的
种类及含量均有差异，药材的采收期直接影响药材
的质量及品质。本次试验对唇香草中咖啡酸、迷迭
香酸、地奥司明、蒙花苷以及胡薄荷酮等 5 种活性成
分的含量进行测定，根据其变化规律初步确定唇香
草的最佳采收期，为唇香草的规范化种植(GAP)生
产提供依据。
1 仪器与试药
XS-105 型万分之一电子天平及 METTLEＲ-
MS105DU型十万分之一电子天平(瑞士梅特勒 －托
利多公司)，KQ5200DE 型数控超声清洗器(昆山市
超声仪器有限公司)，岛津(SSL08B01)液相色谱仪。
唇香草采收于新疆乌鲁木齐市托里乡，时间自
2013 年 5 月 3 日—8 月 31 日，每半月采收 1 次。由
新疆自治区中医院主任药师李永和鉴定;咖啡酸、迷
迭香酸、地奥司明、蒙花苷以及胡薄荷酮 5 种对照品
均购自中国药品生物制品鉴定所;试验中所用试剂
除流动相为色谱纯外，其余均为分析纯。
2 方法与结果
2． 1 色谱条件
色谱柱:WondaSil-C18 (250 mm × 4． 6 mm，5
μm);流动相:0． 3% 甲酸甲醇(A)－ 0． 3%甲酸水
(B);流速:1 mL /min，进样量:10 μL，柱温:30 ℃。
梯度程序为 0→5 min，75%→70% B，5→16 min，
70%→64 % B，16→25 min，64%→52% B，25→40
min，52%→44% B，40→45 min，44%→30% B，45→
65 min，30%→0% B。在以上色谱条件下，各目标
成分的分离度、拖尾因子以及理论塔板数各因子结
果均较好，色谱图见图 1。
A 对照品;B 样品;1 咖啡酸;2 迷迭香酸;3 地奥司明;4 蒙花苷;5 胡薄荷酮。
A:reference standard;B:sample;1 Caffeic acid;2 Ｒosemary acid;3 Diosmin;4 Linarin;5 Pulegone．
图 1 对照品以及样品的 HPLC图
Fig． 1 HPLC chromatograms of reference standard and samples
2． 2 对照品溶液的制备
精密称取咖啡酸、迷迭香酸以及胡薄荷酮对照
品适量，加甲醇溶解，精密称取地奥司明、蒙花苷适
量加 DMSO 溶液溶解。各吸取适量对照品溶液制
成含咖啡酸 0． 016 g /L、迷迭香酸 0． 116 g /L、地奥司
明 0． 347 g /L、蒙花苷 0． 435 g /L、胡薄荷酮0． 175 g /L
的混合对照品溶液。
2． 3 供试品溶液的制备
各取样品 1 g，精密称定，置 100 mL具塞锥形瓶
中，加入 25 mL 20 %二甲基亚砜(DMSO)甲醇溶
131第 2 期 周晓英等 HPLC测定不同采收期唇香草中 5 种化学成分的动态变化
液，称定重量，超声 30 min，放冷，用 20 % DMSO 甲
醇溶液补足减失重量，过 0． 45 μm微孔滤膜，即得。
2． 4 线性关系的考察
取混合对照品溶液，按“2． 1”项下色谱条件测
定，分别进样 2、6、10、14、20 μL，以各对照品的进样
量为横坐标，峰面积为纵坐标，制作标准曲线，结果
见表 1。
表 1 唇香草中 5 种化学成分的回归方程、相关系数以及线性范围
Table 1 The regression equations，correlation coefficients and linearity ranges of five chemical
components in Ziziphora clinopodioides Lam．
成分
Ingredients
回归方程
Ｒegression equations
相关系数
Correlation coefficients
线性范围
Linearity ranges(μg)
咖啡酸 Caffeic acid Y = 4 635 351． 41 X － 5 685． 40 0． 999 9 0． 032 ～ 0． 320
迷迭香酸 Ｒosemary acid Y = 2 419 391． 92 X － 31 830． 87 0． 999 1 0． 231 ～ 2． 310
地奥司明 Diosmin Y = 979 218． 43 X － 41 689． 20 0． 999 3 0． 695 ～ 6． 950
蒙花苷 Linarin Y = 1 428 369． 50 X － 11 8061． 27 0． 999 5 0． 870 ～ 8． 700
胡薄荷酮 Pulegone Y = 362 539． 09 X + 2 412． 07 0． 999 6 0． 350 ～ 3． 500
2． 5 精密度试验
取对照品溶液按“2． 1”项下色谱条件，进样 10
μL，重复进样 6 次，以咖啡酸、迷迭香酸、地奥司明、
蒙花苷以及胡薄荷酮的峰面积分别计算 ＲSD，值分
别是 1． 14%、1． 05%、0． 79%、0． 94%、2． 72%，表明
仪器在此方法下精密度良好。
2． 6 重复性试验
按“2． 3”项下方法制备同一样品 6 份，分别按
“2． 1”项下色谱条件测定，计算咖啡酸、迷迭香酸、
地奥司明、蒙花苷以及胡薄荷酮的含量以及 ＲSD。
ＲSD 值分别是 0． 11%、2． 95%、2． 89%、2． 11%、
0. 70%，表明该方法重复性良好。
2． 7 稳定性试验
在常温下，取同一供试品溶液，按“2． 1”项下色
谱条件分别在 0、2、4、8、12、24 h 测定。计算咖啡
酸、迷迭香酸、地奥司明、蒙花苷以及胡薄荷酮的含
量以及 ＲSD。其 ＲSD 值分别为 1． 29%、2． 25%、
0. 45%、2． 22%、2． 51%。表明在常温下，供试品溶
液在 24 h内保持稳定。
2． 8 加样回收率试验
精密称取6份7月16日采收的唇香草粉末0． 5 g，
分别加入已知含量的咖啡酸、迷迭香酸、地奥司明、蒙
花苷以及胡薄荷酮的混合对照品溶液适量。按“2． 3”
项下方法制备供试品溶液，按“2． 1”项下方法测定，计
算 5种待测物质的平均加样回收率，分别是 101． 04%、
99． 85%、101． 98%、103． 54%、102. 58% 和 98． 85%。
ＲSD分别是 0． 37%、0． 25%、0． 38%、0． 21%和 2． 49%，
表明该测定方法的准确性较好。
表 2 不同采收期唇香草中 5 种化学成分的动态变化
Table 2 Dynamic changes of five components of Ziziphora clinopodioides Lam． at different growth stages
采收期
Harvest time
咖啡酸
Caffeic acid
含量 Content
(mg /g)
ＲSD
(%)
迷迭香酸
Ｒosemary acid
含量 Content
(mg /g)
ＲSD
(%)
地奥司明
Diosmin
含量 Content
(mg /g)
ＲSD
(%)
蒙花苷
Linarin
含量 Content
(mg /g)
ＲSD
(%)
胡薄荷酮
Pulegone
含量 Content
(mg /g)
ＲSD
(%)
2013 － 5 － 3 0． 231 8 0． 56 12． 610 9 0． 99 2． 119 2 0． 78 17． 101 1 1． 01 3． 890 8 0． 64
2013 － 5 － 18 0． 254 3 1． 01 9． 194 0 1． 21 1． 612 5 1． 1 13． 906 5 1． 02 3． 176 3 0． 98
2013 － 6 － 2 0． 248 4 0． 28 12． 986 4 0． 32 1． 683 5 0． 15 17． 281 6 1． 23 5． 563 9 0． 45
2013 － 6 － 17 0． 319 0 0． 89 12． 924 0 0． 97 2． 391 0 1． 13 17． 422 6 0． 55 6． 327 4 0． 67
2013 － 7 － 1 0． 476 5 2． 01 10． 530 5 2． 45 2． 805 1 1． 95 18． 288 9 0． 43 5． 142 9 1． 38
2013 － 7 － 17 0． 331 4 0． 45 12． 957 3 0． 88 2． 359 1 0． 65 17． 749 4 0． 54 5． 723 6 0． 95
2013 － 8 － 1 0． 386 4 1． 23 10． 213 9 1． 33 2． 773 9 1． 08 20． 478 8 0． 89 7． 208 3 1． 11
2013 － 8 － 16 0． 397 4 1． 65 9． 619 5 1． 65 2． 713 4 1． 44 19． 308 9 1． 14 6． 828 6 1． 32
2013 － 8 － 31 0． 442 8 2． 01 11． 074 5 1． 03 2． 992 7 1． 89 22． 113 3 1． 21 6． 683 2 2． 33
2． 9 样品含量测定
分别称取 9 批不同时期采收的唇香草粉末各 3
份，每份 1 g，按“2． 3”项下方法制备供试品溶液，按
“2． 1”项下方法进行测定计算 5 种待测成分的含量
231 北京中医药大学学报 第 38 卷
及 ＲSD，结果见表 2，其中 5 月 3 日—6 月 17 日为幼
苗期，7 月 1 日开始进入开花期，8 月 31 日为开花后
期，此时大部分花已凋落。根据表 2 可看出唇香草
中咖啡酸与迷迭香酸的含量较低，地奥司明与胡薄
荷酮含量中等，蒙花苷的含量较高。其中咖啡酸、迷
迭香酸以及地奥司明的含量变化幅度不大，蒙花苷
与胡薄荷酮的含量变化幅度较大，但在开花期，5 种
成分的含量均较高，且原药材产量在开花期最高，故
初步确定唇香草的采收期为开花期。
3 讨论
生长周期直接影响唇香草中化学成分的含量，
据文献报道，咖啡酸、迷迭香酸、地奥司明、蒙花苷以
及胡薄荷酮具有抗氧化、抗菌、抗肿瘤、抗炎、抗过
敏、保肝等多方面的生物活性［14 ～ 17］。故本试验同时
测定了唇香草中 5 种成分含量的动态变化。
近年来，常以多指标成分为检测标准，对药材质
量控制进行研究［18］。本试验同时测定不同生长期唇
香草中的上述 5 种化学成分的检测标准。对样品的
提取溶剂、流动相、检测波长以及色谱柱等各方面进
行考察，结果相比甲醇提取样品，20%的 DMSO 甲醇
溶液提取样品时，地奥司明与蒙花苷的含量明显增
加，其余成分含量变化不大;以 0． 3% 甲酸甲醇
－0. 3%甲酸水为流动相进行梯度洗脱，检测波长为
290 nm时，样品的色谱峰峰型、分离度等均较理想。
考察不同色谱柱，结果表明国内外色谱柱均可使 5 种
待测成分得到良好的分离效果。方法的重复性、稳定
性较好。为唇香草的质量控制提供了基础数据。
结果表明，不同采收期唇香草中的化学成分存
在差异性。综合各生长期唇香草原植物的产量以及
其中 5 种化学成分的含量，唇香草开花期的产量及
化学成分含量均较高。故初步确定唇香草的采收期
为开花期。
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