全 文 ：杜仲叶有效成分提取工艺的研究
钱　骅　赵伯涛　张卫明
摘要　用纸层析———紫外分光光度法测定绿原酸含量 , 用正交试验处理数据。结果表明:杜仲叶
采用70 %乙醇 、pH2.5 于90 ℃下以 1:12 、1:10、1:8的料液比浸提 3 次 ,每次0.5 h , 绿原酸的浸出量
最高。
关键词　杜仲叶;绿原酸;浸提
杜仲(Eucommia ulmoides)是我国特有经济树种 。杜仲皮是传统中药 ,具有补肝肾 、强筋骨 、
安胎 、益寿和降血压的作用[ 1] 。现代研究表明 ,杜仲叶和杜仲皮具有基本相似的化学成分和药
理作用[ 2] ,可以杜仲叶代替杜仲皮入药和做保健品。同时还发现杜仲叶提取物可作用人体骨
骼和肌肉中蛋白质胶原的合成和分解 ,具有促进代谢 ,预防骨质疏松的功能 。用杜仲叶制成的
这种保健品已成为美国宇航员进入太空的必备食品[ 3] 。研究发现杜仲叶含有较高的绿原
酸[ 4] ,为主要药效成分之一 ,具有利胆 、降压 、升白 、抗菌作用。同时绿原酸具有抗氧化活性 ,是
有前途的食品抗氧化剂。我国有十分丰富的杜仲资源 ,为开发利用这一宝贵资源 ,我们以绿原
酸提取率为指标研究了不同条件下对杜仲叶有效成分提取的影响。现将结果整理如下。
1 材料及仪器
材料:于 97年 10月采自南京野生植物综合利用研究所院内生长期为 10年的杜仲林。
试剂:绿原酸标准品由中国药品生物制品检定所提供 ,各种试剂为分析纯。
仪器:岛津 UV-250紫外 、可见分光光度计 、三用紫外分析仪。
2 方法与结果
2.1 绿原酸的测定
2.1.1 最大吸收峰的确定　精密称取绿原酸标准品 0.2 mg ,用 50 %甲醇液溶解 ,定容于 10 ml
的容量瓶中 ,摇匀 ,吸取上述标准溶液 1 ml ,用 50 %甲醇液稀释至 10 ml(此为母液),吸收母液
各 1 ml ,再用 50 %甲醇稀释至 10 ml ,并以50 %甲醇为空白 ,采用紫外 、可见分光光度计于 200
～ 400 nm 波长范围扫描 。结果该标准液在 326 nm 处均有最大吸收峰 ,故选 326 nm 为测定波
长。
2.1.2 标准曲线制作　分别精密吸取 0.112 mg/ml绿原酸标准液 0.23 、0.46 、0.92 、1.38 、1.84
和2.30 ml ,用 50 %甲醇稀释至 10 ml ,按上述方法测其吸光度 ,回归方程为 C=-0.7844+18.
3361A　r=0.999G。
32 杜仲叶有效成分提取工艺的研究　　　　　　　　　　　　　　　　　
作者单位:南京野生植物综合利用研究所　南京　210042
2.1.3　绿原酸提取率计算　称取10 g 杜仲叶 ,粉碎后用溶剂浸提数次后过滤 ,合并滤液 ,减压
浓缩至一定体积(绿原酸提取液)上 D101柱 ,水洗 , 15 %乙醇洗至绿原酸全部洗出 。合并水和
15 %乙醇洗脱液 ,浓缩后真空干燥(绿原酸粗品),称重(经预处理后可以除去大部分干扰杂
质)。精密称取适量绿原酸粗品用 50 %甲醇溶解 ,过滤定容至 10 ml。用微量进样器准确吸取
上述溶液 ,在助干条件下 ,按细条状点于距新华 1号层析纸 1.5 cm 处 ,同时点绿原酸标准品
液 ,以正丁醇:冰醋酸:水(4:1:5)混合后的上层液作展开剂 ,饱和后上行展开 ,展距 13 cm 时取
出 ,凉干 ,在紫外光下观察画出与标准品具有相同的 Rf和颜色的荧光带 ,剪下 ,置带塞试管中 ,
精密加入 50 %甲醇液 10 ml ,反复振摇提取 24 hr ,同时做空白 ,在 324 nm处测吸光度A 。代入
下式计算 。
杜仲绿原酸粗品中绿原酸百分含量=(18.3361A-0.7844)×稀释倍数×10 ml称取样品毫克数×1000 ×100 %
绿原酸提取率=绿原酸粗品重(g)×绿原酸粗品中绿原酸百分含量
10 g
×100 %
2.2　回收率试验
精密量取杜仲绿原酸提取液若干ml ,分成两份 ,其中一份加入1.12 mg/ml绿原酸 1 ml(相
当于绿原酸1 120 mg)按照 2.1.3项预处理 ,点样 ,测定 ,并计算回收率 ,结果见表 1。
表 1　回收率试验结果
测定次数 加入量(μg)
回收量
(μg)
回收率
(%)
平均值
(%)
CN
(%)
1 1 120 1 136 101.4
2 1 120 1 100 98.2 98.4 2.14
3 1 120 1 084 96.8
4 1 120 1 087 97.1
表 2　影响绿原酸提取率的因素水平表
因子水平 A乙醇浓度%
B
温度℃
C
pH
D
时间(h 次)
1 0 50 2.5 0.5
2 40 70 7.0 1.0
3 70 90 12 1.5
　　注:共提取 3次 ,料∶液分别为 1∶12 , 1∶10 , 1∶8。
表 3　试验计划 、浸提结果及计算分析＊
试验号 A B C D 绿原酸提取率(%)
1 1 1 1 1 1.00
2 1 2 2 2 0.92
3 1 3 3 3 0.70
4 2 1 2 3 1.00
5 2 2 3 1 0.66
6 2 3 1 2 1.47
7 3 1 3 2 0.94
8 3 2 1 3 2.05
9 3 3 2 1 1.71
K1 2.62 2.94 4.52 3.37
K2 3.13 3.63 3.63 3.33
K3 4.70 3.88 2.30 3.75
Q1 0.87 0.98 1.51 1.12
Q2 1.04 1.21 1.21 1.11
Q3 1.57 1.29 0.77 1.25
R 0.70 0.31 0.74 0.14
　　＊表中 A:乙醇浓度;B:温度℃;C:pH;D:h 次。
2.3 绿原酸提取
2.3.1制定因素水平表　见表 2。
2.3.2　实验条件　根据因素水平表列出 L9(34)正交试验方案表 ,按表中条件进行提取 ,结果
见表 3。
3 小结与讨论
(1)浸提液 pH(因子C)和乙醇浓度(因子 A)对绿原酸提取率影响最大 ,两者 F0.05均呈显著
差异 。其次为温度(因子 B),最小为时间(因子 D)。(下转第 29页)
33第 18卷第1 期　　　　　　　　　　　中 国 野 生 植 物 资 源
百分含量(13.405 ,占总氨基酸 24.92 %)>绞股蓝(12.904 ,占总量 23.85 %)>喙果绞股蓝
(11.481 ,占总量32.27 %)>光叶绞股蓝(11.163 ,占总量 24.82 %)>毛果绞股蓝(7.680 ,占总
量43.89 %)。表 1测得数据反映出 17种氨基酸的组分含量水平 ,均以 Asp(天冬)Glu(谷)和
Leu(亮)最高 ,以Cys(胱)、Met(蛋)含量最低 ,His(组)的含量也偏低见表 1。
3 讨论
上述定量分析结果 ,经药工考究与药典各项有关记述内容及要求相对比 ,绞股蓝同属 6种
植物虽然 17种氨基酸组分含量各不相同 ,但作为保健饮料 、营养剂食疗以及医疗药用 ,均以绞
股蓝(A)的质量为佳 ,疗效良好。单叶绞股蓝(C)次之 ,光叶绞股蓝(E)、喙果绞股蓝(D)再次 ,
而毛果绞股蓝(B)含量偏低 ,比其它种类的氨基酸含量低 1 ～ 2倍。
致谢　本研究部分样品得到福建省微生物研究所尤仲杰 、余辉同志的协助与测定。
参 考 文 献
1 丁树利 ,朱兆仪.中草药 , 1992 , 23(12):627
2 陈晓亮等.中成药研究 , 1987 , 10:29～ 30
3 聂剑初等.生物化学简介明教程.北京:人民教育出版社 , 1981 , 4～ 8
4 [ 美] A.H.恩斯明格等著.营养素.北京:农业出版社 , 1991 , 173 ～ 130 、182 ～ 270
(上接第 33页)
(2)在试验条件下 ,K c1>Kc 2>Kc3 ,原因是绿原酸在酸性条件下较碱性条件下稳定。
(3)KA3>KA2>KA1 ,说明随着乙醇浓度提高 ,绿原酸提取率增高 。
(4)KB 3>KB2>KB 1 ,说明浸提温度提高 ,绿原酸提取率上升 ,且有一定的热稳定性。
综上分析 ,从杜仲叶提取绿原酸的最佳浸提条件为 70%乙醇 ,pH2.5浸提温度为 90℃,每
次提取时间为 0.5h ,共提取 3次 ,料液比分别为 1:12 ,1:10 ,1:8 ,经过上述方法提取后的绿原酸
的浸出率达85%以上 。
参 考 文 献
1 中草药学 , 1976 年第一版.人民卫生出版社:238～ 239
2 李家家 ,阎玉凝.杜仲皮与叶化学成分的初步研究.中药通报 , 1986 , 11(8):41 ～ 42
3 王俊丽 ,陈至铃.杜仲的研究与应用.中草药.1993 , 24(12):655 ～ 656
4 戴宝合 ,杜　仲.野生植物资源学.北京:农业出版社出版 , 1993:112 ～ 114
29第 18卷第1 期　　　　　　　　　　　中 国 野 生 植 物 资 源