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大高良姜、建砂仁、益智不同提取物对胃实寒证大鼠胃黏膜的保护作用



全 文 :2013年 第 16卷 第 4期 广西中医药大学学报
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实验研究
大高良姜、建砂仁、益智不同提取物
对胃实寒证大鼠胃黏膜的保护作用
秦华珍 1,黄燕琼 2,王晓倩 1,刘 颖 1,余腾飞 1,刘 磊 1,李文强 1
(1.广西中医药大学药学院,广西 南宁 530001;
2.广西中医药大学附属瑞康医院,广西 南宁 530011)
摘 要:[目的]观察大高良姜、建砂仁、益智三味山姜属中药对胃实寒证模型大鼠胃黏膜的保护作用,探讨此三味中药所
含挥发油与温中散寒功效的相关性。[方法]采用灌服寒凉药(石膏、知母、黄柏、龙胆草)及冰柜冷冻的方法复制胃实寒证模型;
分别予以大高良姜、建砂仁、益智三味中药的挥发油及去挥发油水提液,分高、低剂量组进行观察,阳性对照药选用附子水煎液。
光镜下观察胃黏膜的病理学改变。[结果]三味药物的挥发油高剂量组对胃实寒证模型大鼠的炎细胞浸润、腺体破坏或减少、黏
膜充血水肿均有显著的改善作用(P <0.05或 P <0.01);大高良姜挥发油低剂量组对炎细胞浸润有非常显著改善作用(P <0.01);
建砂仁挥发油低剂量组对胃黏膜充血水肿有非常显著改善作用(P <0.01);益智挥发油低剂量组对炎细胞浸润、腺体破坏或减
少有非常显著改善作用(P <0.01)。大高良姜去挥发油水提液高剂量组对炎细胞浸润和黏膜充血水肿有非常显著的改善作用
(P <0.01),低剂量组对黏膜充血水肿有显著性改善(P <0.01);建砂仁去挥发油水提液高、低剂量组对黏膜充血水肿有非常明显
的改善作用(P <0.01);益智去挥发油水提液高、低剂量组对胃黏膜各种损伤均无明显改善作用。[结论]大高良姜、建砂仁、益
智挥发油对胃实寒证大鼠胃黏膜有良好的改善作用,提示此三味药的主要活性成分挥发油与其温中散寒功效有密切的相关性;
大高良姜、建砂仁去挥发油水提液也对胃黏膜充血水肿有一定的改善作用,说明这二味药还含有其他保护胃黏膜的活性成分。
关键词:大高良姜;建砂仁;益智;挥发油;胃实寒证;胃黏膜
中图分类号:R285.5 文献标识码:A 文章编号:2095-4441(2013)04-0001-05
The Protective Function of Different Extracts from A. galanga , A. japonica,
A. oxyphylla on Gastric Mucosa of Stomach Excessive Cold Syndrome Rats
QIN Hua-zhen1,HUANG Yan-qiong2,WANG Xiao-qian1,LIU Ying1,YU Teng-fei1,LIU Lei1,LI Wen-qiang1
(1. Pharmacy college,Guangxi University of Chinese Medicine,Nanning 530001,Guangxi;
2. Ruikang Hospital Affiliated to Guangxi University of Chinese Medicine,Nanning 530001,Guangxi)
Abstract:[Objective]To observe the protective effect about the three Alpinia L Chinese medicinal of A. galanga,A. japonica,
A. oxyphylla on gastric mucosa of stomach excessive cold syndrome rats and discuss the correlation between the volatile oil in the
three Alpinia L Chinese medicinal and its function of warming middle energizer and dispersing cold. [Methods]The stomach
excessive cold syndrome rats were made through the method of drenching cold-cool nature Chinese medicinal and freezers frozen. The
volatile oil and the water extract with volatile oil removed of the three Chinese medicinal were given respectively. They were observed
under the high and low dosage. The aconite decoction was selected as the positive control drug. The pathological changes of gastric
mucosa were observed under optical microscope. [Results]The high dose groups of volatile oil of the three Chinese medicinal had
significant improvement for inflammatory cell infiltration,glandular destruction or reduction and mucosal hyperemia and edema(P <
0.05 or P <0.01);The low dose group of volatile oil of A. galanga had very obvious effects on improving the inflammatory cell
infiltration(P <0.01);The low dose group of volatile oil of A. japonica had very obvious effects on the improvement of gastric
收稿日期:2013-11-01
基金项目:广西教育厅课题(编号:201012MS144)
作者简介:秦华珍,女,中药学教授、博士,研究方向:中药理论与中药药效研究
通讯作者:黄燕琼
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mucosal hyperemia and edema(P <0.01);The low dose group of volatile oil of A. oxyphylla had very obvious effects on inflammatory
cell infiltration,glandular destruction or reduction(P <0.01). The high dose group of water extract with volatile oil removed of A.
galanga had very obvious effects on inflammatory cell infiltration and gastric mucosal hyperemia and edema(P <0.01);The low dose
group of water extract with volatile oil removed of A. galanga had very obvious effects on mucosal hyperemia and edema(P <0.01);
The high and low dose group of water extract with volatile oil removed of A. japonica had very obvious effects on the mucosal
hyperemia and edema(P <0.01);The high and low dose group of water extract with volatile oil removed of A. oxyphylla had no effects
on gastric mucosal damage. [Conclusion]The volatile oil of A. galanga,A. japonica,A. oxyphylla has good improving effect on the
gastric mucosa of the stomach excessive cold syndrome rat. It is indicated that the volatile oil is the main active component in the
three kinds of Chinese medicinal and has close relevance with the function of warming middle energizer and dispersing cold. The
water extract with volatile oil removed of A. galanga,A. japonica has certain improvement on gastric mucosal hyperemia and edema,
which illustrates that this two kinds of medicine also contain other active components.
Key Words:A. galangal(L.)Willd;A. japonica(Thunb.)Miq;A. oxyphylla Miq;volatile oil;stomach excessive cold syndrome;
gastric mucosa
大高良姜[A. galanga (L.)Willd.]、建砂仁[A. japonica
(Thunb.)Miq.]、益智(A. oxyphylla Miq.)均为姜科山姜属药
物,性味辛热(温),主归脾胃经,皆有温中散寒功效[1],主要
用于脾胃寒证。它们的主要有效成分均为挥发油[2-3],因挥发
油在水中的溶解度很小,为了探讨亲缘关系相同的三味中药
所含挥发油与温中散寒功效的相关性,笔者以大高良姜、建砂
仁、益智的挥发油及去挥发油水提液为观察对象,建立大鼠胃
实寒证模型,观察此三味中药的不同提取物对胃实寒证大鼠
胃黏膜的保护作用[4-5],现报道如下。
1 实验材料
1.1 药材 大高良姜(采自广西上思十万大山)、建砂仁(采
自福建三明)、益智(批号:110114,购买于南宁生源中药饮片
有限责任公司,产地为广西)。造模寒凉中药:石膏(广西产,
批号:110307);知母(山西产,批号:110117);黄柏(四川产,批
号:101124);龙胆草(广西产,批号:101209);均购于南宁生源
中药饮片有限责任公司,并经广西中医药大学中药鉴定学教研
室蔡毅教授鉴定符合 2010版《中华人民共和国药典》的要求。
1.2 动物 SPF级雄性 SD大鼠,体重 250±20 g,由湖南斯莱
克景达实验动物有限公司提供,许可证号:SCXK(湘)2009-
0004。
1.3 试剂 吐温-80(上海化学试剂公司,批号:F990622);生
理盐水(昆明市宇斯药业有限责任公司,批号:10083020);水
合氯醛(上海化学试剂公司,批号:20100125);95%乙醇(国药
集团化学试剂有限公司,批号:20100318)。
1.4 仪器 BP211D万分之一克电子天平(德国赛多利斯公
司);HH -4 数显恒温水浴锅 (国华电器有限公司);
YKKYFM40制冰机(北京长流科学仪器公司);LD4-18型台
式低速离心机(北京离心机有限公司);RE-52A旋转蒸发仪
(上海亚荣生化仪器厂)。
2 实验方法
2.1 药物的制备
2.1.1 大高良姜、建砂仁、益智挥发油的提取 取大高良姜、
建砂仁、益智饮片各 1 kg,粉碎成粗粉,分别加 10倍量水浸
透,按 2010年版《中华人民共和国药典》一部附录 XD中规定
的挥发油测定法进行,连续回流至油量不再增加为止,收集挥
发油,用棕色瓶装,密封,于 4 ℃冰箱保存,用时以 5%吐温-
80配制成所需浓度。
2.1.2 大高良姜、建砂仁、益智去挥发油水液的制备 趁热过
滤 2.1.1中提取挥发油后的去挥发油水提液,加 2倍量的乙醇
进行醇沉,静置,过滤,回收乙醇,浓缩成浸膏,密封,于 4 ℃冰
箱保存,用时以蒸馏水配制成所需浓度。
2.1.3 造模寒凉药的制备 取石膏、知母、黄柏、龙胆适量,按
2∶1.5∶1∶1的比例混合均匀(石膏打碎包煎),加 10倍量水浸
透,用武火煮沸后,保持微沸煎煮 1 h,趁热过滤,残渣加入 8
倍量水再煎,沸腾后保持微沸煎煮 1 h,过滤,合并两次药液,
浓缩成相当于生药量 1.5 g/ml的药液,密封,于 4 ℃冰箱保存
备用。
2.1.4 附子水提液的制备 取 1 kg生附子加入 10倍量水浸
透,武火煮沸后,保持微沸煎煮 1 h,过滤。残渣加入 8倍量的
沸水保持微沸煎煮 1 h,过滤,合并两次滤液,摇匀,于 4 ℃冰
箱静置过夜。取附子水煎液上清液减压浓缩至密度为 1.05
(20 ℃),按水煎液∶乙醇(1∶2)加入相应体积的乙醇,混合均
匀,密闭静置过夜,析出沉淀。次日药液抽滤,减压回收乙醇,
浓缩药液至无醇味,加蒸馏水配制成浓度为 4 g/ml的药液,
于 4 ℃冰箱密闭储存备用。
2.2 动物分组 取大鼠 160只,随机抽取 10只作为空白对
照组,剩余大鼠 150只均进行造模。造模结束后随机分为模
型Ⅰ组,模型Ⅱ组(吐温-80对照组),阳性对照组,大高良姜
挥发油高、低剂量组(分别简称为大挥高、大挥低),大高良姜
去挥发油高、低剂量组(分别简称为大去挥高、大去挥低),建
砂仁挥发油高、低剂量组(分别简称为建挥高、建挥低),建砂
仁去挥发油高、低剂量组(分别简称为建去挥高、建去挥低
组),益智挥发油高、低剂量组(分别简称为益挥高、益挥低),
益智去挥发油高、低剂量组(分别简称为益去挥高、益去挥
低),共 16个组,每组 10只。
2.3 造模 根据本课题组前期工作基础[ 6-7 ],并参考文
献[8-10],采用灌服寒凉药及冰柜冷冻的方法复制大鼠胃实
寒证模型。大鼠于室温 22±2 ℃饲养,空白对照组大鼠灌服
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常温自来水,20 ml/kg,每天 2次;其余各组大鼠造模期间的
日常饮用水为 0~10 ℃的冰凉水,并灌服 2~3 ℃寒凉药,给药
浓度为1.8 g/ml,给药体积为 20 ml/kg,每天 2次,给药后置于
特制鼠笼内,于-15 ℃冰柜冷冻,每次 2 h,每天 2次,其间间
隔 8 h;连续 2 d,复制胃实寒证模型。以动物出现食欲下降、
大便稀溏、喜扎堆、毛脏等现象提示造模成功。
2.4 给药 造模结束后按分组分别灌胃给药,灌胃体积为
20 ml/kg,2次/天。空白对照组与模型Ⅰ组灌服等容积常温自
来水,模型Ⅱ组给予等容积 5%吐温-80溶液;阳性组给予附子
水提液,剂量为 8 g/kg;其他各受试药物组根据成人临床日用
量按体表面积折算出动物等效剂量作为低剂量,低剂量的 3倍
为高剂量,经计算,低、高剂量组的剂量分别为 20 g/kg,60 g/kg。
每隔 12 h给药 1次,连续给药 3次。
2.5 标本采集 末次给药后各组大鼠禁食不禁水 24 h,10%
水合氯醛麻醉大鼠,而后处死动物,剖腹取胃,去胃内食物残
渣,用 10%甲醛固定,进行常规石蜡包埋切片,HE染色,光镜
下观察胃黏膜的病理学改变。
2.6 统计学方法 采用 Mann-whitney秩和检验,以 P <0.05
为有显著性差异。
3 结 果
3.1 各组胃组织病理切片图 见图 1。
图 1 各组胃组织病理切片图
1 空白对照组(×100) 2 模型Ⅰ组(×200) 3 模型Ⅱ组(×200) 4 阳性对照组(×100)
5 大挥高组(×100) 6 大挥低组(×100) 7 大去挥高组(×100) 8 大去挥低组(×100)
9 建挥高组(×100) 10 建挥低组(×100) 11 建去挥高组(× 100) 12 建去挥低组(×100)
13 益挥高组(×100) 14 益挥低组(×100) 15 益去挥高组(×100) 16 益去挥低组(×100)
模型大鼠胃形态肉眼观察可见胃肿胀、颜色变浅,有散在
的出血点。光镜下观察胃组织出现不同程度的炎细胞浸润、
腺体减少或破坏、黏膜充血水肿等病理改变,用药各组胃组织
中炎细胞浸润、腺体减少或破坏、黏膜充血水肿等得到不同程
度的改善。
3.2 胃组织病理评分标准 见表 1。
3.3 各组大鼠胃黏膜病理学改变分级情况 见表 2、表 3。
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表 1 胃组织病理改变的分级评分标准 (分)
观察项目 分级 评分 观察项目 分级 评分 观察项目 分级 评分
炎细胞浸润
正常 0
腺体破坏
正常 0
充血水肿
正常 0
轻度 1 轻度 1 轻度 1
中度 2 中度 2 中度 2
重度 3 重度 3 重度 3
表 2 各组大鼠胃黏膜病理学改变分级情况 (n=10)
组 别
剂量
(g/kg)
炎细胞浸润 腺体减少或破坏 黏膜充血水肿
正常 轻度 中度 重度 正常 轻度 中度 重度 正常 轻度 中度 重度
空白对照组 — 10 0 0 0 9 1 0 0 8 2 0 0
模型Ⅰ组 — 0 0 8 2 0 4 6 0 0 0 9 1
模型Ⅱ组 — 0 0 7 3 0 5 5 0 0 2 6 2
阳性对照组 8 6 3 0 1 7 3 0 0 5 4 1 0
大挥高组 60 3 3 4 0 7 3 0 0 8 2 0 0
大挥低组 20 2 4 4 0 0 4 6 0 0 2 8 0
大去挥高组 60 0 2 8 0 3 6 1 0 1 7 2 0
大去挥低组 20 0 0 5 5 0 4 4 2 0 5 1 4
建挥高组 60 2 6 1 1 6 3 1 0 3 6 0 1
建挥低组 20 1 7 2 0 0 9 0 1 0 9 1 0
建去挥高组 60 0 4 3 3 0 5 1 4 2 4 2 2
建去挥低组 20 0 0 7 3 2 5 2 1 0 5 3 2
益挥高组 60 6 2 1 1 4 5 1 0 6 3 1 0
益挥低组 20 5 4 1 0 4 6 0 0 2 7 1 0
益去挥高组 60 0 5 3 2 2 7 1 0 2 5 1 2
益去挥低组 20 1 3 3 3 2 0 8 0 1 0 7 2
表 3 各组大鼠胃黏膜病理学改变的评分结果 (x± s,n=10)
组 别 剂量(g/kg)
评分积分值
炎细胞浸润 腺体减少或破坏 黏膜充血水肿
空白对照组 — 0.00±0.00 0.00±0.00 0.20±0.42
模型Ⅰ组 — 2.20±0.42② 1.20±0.42② 3.00±0.00②
模型Ⅱ组 — 2.30±0.48② 1.30±0.48② 2.60±0.84②
阳性对照组 8 0.60±1.00④ 0.50±0.53④ 1.40±1.00④
大挥高组 60 1.00±0.82⑥ 0.30±0.48⑥ 1.20±0.63⑥
大挥低组 20 1.20±0.79⑥ 1.40±0.52 2.70±0.48
大去挥高组 60 2.80±0.42④ 0.80±0.63 2.20±0.63④
大去挥低组 20 2.50±0.53 0.80±0.79 2.10±0.88④
建挥高组 60 1.40±1.00⑤ 0.50±0.71⑥ 1.40±1.00⑥
建挥低组 20 1.90±1.00 1.10±0.32 1.60±0.70⑥
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表 3显示:与空白对照组比较,造模后模型Ⅰ组及模型Ⅱ组
大鼠胃组织均出现较严重炎细胞浸润、腺体减少或破坏、胃黏
膜充血水肿的病理改变,评分具有非常显著性差异(P <0.01)。
分别与模型Ⅰ、Ⅱ组比较,大高良姜挥发油高剂量组对炎细胞
浸润、腺体减少破坏、胃黏膜充血水肿均有非常显著的改善作
用(P <0.01);挥发油低剂量组对炎细胞浸润有非常显著的改
善作用(P <0.01);大高良姜去挥发油水提液高剂量组对炎细
胞浸润、胃黏膜充血水肿有非常显著的改善作用(P <0.01);低
剂量组对胃黏膜充血水肿有非常显著的改善作用(P <0.01)。
建砂仁与益智挥发油高剂量组对胃组织炎细胞浸润、腺体减
少或破坏、胃黏膜充血水肿均有显著的改善作用(P <0.05或
P <0.01);建砂仁挥发油低剂量组对胃黏膜充血水肿有非常
显著的改善作用(P <0.01);益智挥发油低剂量组对胃组织炎
细胞浸润、腺体破坏或减少有非常显著的改善作用(P <0.01)。
建砂仁去挥发油水提液高、低剂量组对胃黏膜充血水肿有非
常显著的改善作用(P <0.01),但对胃组织炎细胞浸润、腺体
破坏或减少无明显影响;益智去挥发油水提液高、低剂量组对
胃组织炎细胞浸润、腺体减少或破坏、胃黏膜充血水肿等病理
改变无明显影响。
4 讨 论
胃实寒证多因外寒直中脾胃或过食生冷等原因所致,由
于寒性凝滞收引,寒留胃脘,气滞不通,故胃脘疼痛,并常伴有
神疲乏力、形寒肢冷、食欲下降、大便溏泻等症状。本实验采
用灌服寒凉药和冰柜冰冻的方法复制胃实寒证,使机体产生
寒象的反应,大鼠出现精神萎靡,蜷缩不动,体重、进食量下
降,大便量增加等症状,提示大鼠出现与胃实寒证相似的临床
症状。
大鼠胃黏膜病变显示,肉眼观察,胃黏膜肿胀、颜色变浅,
有散在出血点;光镜观察显示,胃黏膜出现中性粒细胞增多、
腺体破坏增多的基本病理特征,说明胃实寒证大鼠的胃黏膜
出现多种受损现象。通过给予温中散寒药治疗,病变皆有所
改善和恢复。实验结果显示:大高良姜、建砂仁、益智挥发油
组对胃实寒证大鼠胃组织炎细胞浸润、腺体减少或破坏、黏膜
充血水肿均有良好的改善作用,高剂量组尤为明显;大高良
姜、建砂仁去挥发油水提液对胃黏膜充血水肿的病理改变也
有较显著的改善作用,益智去挥发油水提液对胃组织病理改
变无显著影响。结果说明:此三味药的主要活性成分挥发油
与其温中散寒功效有较密切的相关性。而大高良姜、建砂仁
去挥发油水提液对寒性胃黏膜损伤也有一定的保护作用,说
明这两味药的活性成分除了挥发油之外,还有其他保护胃黏
膜的活性成分,有待下一步研究。
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(编辑 陈明伟)
组 别 剂量(g/kg)
评分积分值
炎细胞浸润 腺体减少或破坏 黏膜充血水肿
建去挥高组 60 1.90±0.88 1.20±1.14 1.40±1.07④
建去挥低组 20 2.30±0.48 1.00±0.67 1.70±0.82④
益挥高组 60 0.70±1.06⑥ 0.60±0.52⑥ 1.60±0.84⑤
益挥低组 20 0.60±0.70⑥ 0.60±0.52⑥ 2.00±0.82
益去挥高组 60 2.50±0.53 0.90±0.57 2.60±0.70
益去挥低组 20 1.80±1.03 1.20±0.79 2.40±1.00
注:与空白对照组比较,①P < 0.05,②P < 0.01;与模型Ⅰ组比较,③P < 0.05,④P < 0.01;与模型Ⅱ组比较,⑤P < 0.05,
⑥P < 0.01
(续表 3)
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