全 文 ：楮实子油对亚急性衰老模型小鼠脑组织抗氧化
作用的实验研究
杨金枝1 　尹皎琳2　任汉阳1 　管向华1 　任慧玲1
1.河南中医学院 (河南 郑州 450008)　2.山东中医药大学第二附属医院 (山东 济南 250002)
　　摘要:目的:观察楮实子油对 D-半乳糖衰老模型小鼠脑组织的影响。方法:采用 D-半乳糖颈背部皮下注射复制
小鼠亚急性衰老模型 , 给药组给予不同的剂量 , 实验结束检测相关指标。结果:楮实子油能明显提高衰老模型小鼠的
SOD、 GSH-Px 活性 (P<0.01);降低衰老模型小鼠 NO、 MDA值 (P<0.01)。结论:楮实子油有抗氧化 、 延缓衰老的
作用。
　　关键词:D-半乳糖　超氧化物岐化酶　一氧化氮　丙二醛　谷胱甘肽过氧化酶
　　中图分类号:R285.5　　文献标识码:A　　文章编号:1000-3649 (2008)09-0016-02
　　Study on the Anti-oxidation Effect of Oils of Papermulberry Fruits on the Brain of Sub-acute Aging Mice/ Yang Jinzhi1
　Yin Jiaolin2　Ren Hanyang1　Guan Xianghua1　Ren Huiling1∥1.Henan College of Traditional Chinese Medicine (Zhengzhou
Henan 450008 , China)　2.The Second Affiliated Hospital of Shandong University of Traditional Chinese Medicine (Jinan Shandong
250002 , China)
　　Abstract Objective:To observe the anti-oxidation effect of oil of Papermulberry fruits on the brain of sub-acute aging mice
caused by D-galactose.Methods:This research adopted D-galactose to establish the sub-acute aging model.At the end of experi-
ment , the correlated indicators were measured.Results:The high and medium doses of oil of Papermulberry fruits could greatly increase
the content of SOD, GSH-Px , and decrease NO andMDA(P<0.05).Conclusion:Oil of Papermulberry has an anti-oxidation ef-
fect that helps delay the aging process.
Keywords:D-galactose　SOD　GSH-Px　NO　MDA
　　随着经济的发展和社会的进步 , 人们越来越渴
望长寿 , 因而抗衰老就成为当今人类共同关心的一
个热点 , 也是医药界不懈努力探究的一个课题。如
何研制安全、 有效 、 廉价的抗衰老药物对于生活质
量的提高、 社会负担的减轻都具有很大的现实意义。
目前 , 抗衰老中药的研究取得了很大的进展。但抗
衰老中药多集中在名贵补益药的研究上 , 对普通药
物的研究不够;对中药研究复方多 , 面对单味中药
的研究不够。楮实为桑科构树 【Broussonetia papyrifera
(L.)Vent.】的干燥成熟果实 , 为常用中药 , 具有滋
肾清肝 、 明目、 利尿的功效。在现代的抗衰老的研
究中对其研究的比较少 , 因此有必要对其进行进一
步的研究。我们在对 D-半乳糖致衰老小鼠模型上 ,
观察其对机体最主要的抗氧化酶超氧化物歧化酶
(SOD)、 谷胱甘肽过氧化物酶 (GSH-Px)以及一氧化
氮 (NO)、 丙二醛 (MDA)的影响 , 并初步探讨其机
理。
1　实验材料
1.1　实验动物　昆明种小鼠 , 雌雄各半 , 清洁级 ,
体重 18 ～ 22g , 共 60只 , 由河北省动物实验中心提
供 , 合格证号:718103。
1.2　实验仪器　752紫外 、 可见分光光度计 , 上海
精密科学仪器有限公司生产;离心机 , 北京医用离
心机厂生产;玻璃匀浆器 , 涿州市长虹仪器厂;电
子恒温水浴锅 , 北京市光明医疗仪器厂;电子分析
天平 Sartoriu , BS110型;电子称 , 上海精科公司天平
仪器厂;DY89—1 型电动玻璃匀浆机 , 宁波新芝生
物科技股份有限公司。
1.3　药品与试剂　楮实子 , 购自漯河市药材公司;
D-半乳糖 , 系上海化学试剂二厂生产 , 批号 20070801;
六味地黄丸 , 购自张仲景大药房 , 河南宛西制药有限
公司生产 , 批号 20070398;SOD、 NO、 MDA、 GSH-Px
测定试剂盒、 蛋白质测定试剂盒 (考马斯亮兰法)均
为南京建成生物工程研究所生产 , 批号:20070903。
2　实验方法
2.1　小鼠亚急性衰老模型的制备　小鼠每天颈背部皮
下注射D-半乳糖 (1000mg/ kg), 连续注射40天 , 40天
后进行各项指标的检测。
2.2　动物分组、 给药　动物按照性别 , 随机分为 6
组 , 每组小鼠 10只。分别为 (1)生理盐水组:小鼠
每日颈背部皮下注射生理盐水 (0.1ml/ 10g);(2)D-
半乳糖模型组:小鼠每日颈背部皮下注射 D-半乳糖
(1000mg/ kg);(3)楮实子油大剂量组:小鼠每日颈背
部皮下注射 D-半乳糖 (1000mg/ kg)1h后 , 灌胃给予
楮实子油 12.0ml/ kg;(4)楮实子油中剂量组:小鼠每
日颈背部皮下注射 D-半乳糖 (1000mg/ kg)1h 后 , 灌
胃给予楮实子油 6.0ml/kg;(5)楮实子油小剂量组:
小鼠每日颈背部皮下注射 D-半乳糖 (1000mg/ kg)1h
后 , 灌胃给予楮实子油 3.0ml/ kg;(6)六味地黄丸组:
小鼠每日颈背部皮下注射 D-半乳糖 (1000mg/ kg)1h
后 , 灌胃给予六味地黄丸3g/ kg。
在实验过程中每 5天各鼠称重 1次 , 观察外观形
态。用药 40天后灌胃 2h 后处死小鼠 , 取标本 , 进行
各项指标的测定。
2.3　脑组织匀浆的制备　各组小鼠均于 40天后处死 ,
取出脑组织 , 吸干 , 精称 0.2g 加 1.8ml生理盐水 , 制
·16· 四　川　中　医Journal of Sichuan of Traditional Chinese Medicine 2008 年第 26卷第 9 期Vol.26 , No.9 , 2008　
成10%脑组织匀浆 , 3500r/min 离心 5min , 取上清液
冰箱冷藏备用。
2.4　指标测定　测脑组织匀浆超氧化物歧化酶
(SOD)、 一氧化氮 (NO)、 丙二醛 (MDA)、 谷胱甘肽
过氧化物酶 (GSH-Px), 均根据测试盒所附方法、 步
骤进行测定。
2.5　统计学方法　本研究中所有资料均采用SPSS13.0
forwindows软件包进行分析 , 计量资料组间比较采用
单因素方差分析 , 以 P<0.05为具有统计学差异。
3　实验结果
3.1　楮实子油对亚急性衰老小鼠 SOD、 GSH-Px 的影
响　与生理盐水组小鼠相比 , 模型组小鼠脑匀浆中
SOD和GSH-Px活力均明显下降 , 说明造模成功 (P<
0.01)。与模型组小鼠相比 , 楮实子油大剂量组、 楮实
子油中剂量组 、 六味地黄丸组小鼠脑匀浆中 SOD和
GSH-Px活力均明显提高 (P<0.01);表明六味地黄
丸、 楮实子油大、 中剂量能显著增高模型组小鼠脑匀
浆中SOD和GSH-Px 活力。与模型组小鼠相比 , 小剂
量也能增高模型小鼠脑匀浆中 SOD和 GSH-Px 活力 ,
但没有显著差异。结果显示:楮实子油、 六味地黄丸
能提高衰老小鼠脑组织抗氧化能力 , 且楮实子油在一
定范围内有量效关系。结果见表 1。
表 1　对脑组织匀浆 SOD、 GSH-Px的影响　( x±s , n=10)
分组 剂量 SOD(U/mgprot)
GSH-Px
(活力单位/mgprot)
生理盐水组 - 12.76±2.86 7.75±1.64
模型组 - 7.86±2.75＊ 4.26±1.47＊
楮实子油大剂量组 12ml/ kg 11.68±2.98■ 6.49±1.75■
楮实子油中剂量组 6ml/kg 10.47±2.83■ 5.07±0.78■
楮实子油小剂量组 3ml/kg 8.15±3.13 4.63±1.01
六味地黄丸组 3g/kg 12.06±1.36■ 6.67±1.37■
　　注:与生理盐水组比较 , ＊P<0.01;与模型组比较 , ■P<0.01
3.2　楮实子油对亚急性衰老小鼠NO、 MDA的影响　
与生理盐水组小鼠相比 , 模型组小鼠脑匀浆中的NO、
MDA含量显著增高 , 说明造模成功 (P<0.01)。与模
型组小鼠相比 , 楮实子油大剂量组 、 楮实子油中剂量
组、 六味地黄丸组小鼠脑组织中的 NO、 MDA含量显
著下降 (P<0.01), 表明六味地黄丸 、 楮实子大、 中
剂量能显著降低模型小鼠脑组织中 NO、 MDA 的含量。
与模型组小鼠相比 , 小剂量同样能降低模型小鼠脑组
织中NO、 MDA的含量 , 但没有显著差异。结果显示:
楮实子油、 六味地黄丸能提高衰老小鼠脑组织清除过
氧化产物的能力 , 且楮实子油在一定范围内有量效关
系。结果见表2。
表2　对脑组织匀浆的MDA和 NO影响　( x±s , n=10)
分组 剂量 MDA(μmol/mgprot)
NO
(μmol/ gprot)
生理盐水组 - 3.73±1.14 33.85±11.64
模型组 - 5.95±1.86＊ 46.94±9.83＊
楮实子油大剂量组 12ml/ kg 4.08±1.21■ 36.09±10.14■
楮实子油中剂量组 6ml/kg 4.73±0.97■ 40.03±9.75■
楮实子油小剂量组 3ml/kg 5.46±1.64 45.29±12.8
六味地黄丸组 3g/kg 3.56±1.25■ 35.41±10.25■
　注:与生理盐水组比较 , ＊P<0.01;与模型组比较 , ■P<0.01
4　讨　论
近年来 , 国内外有关延缓衰老的研究报道颇多 ,
其中对人体衰老的观点已提出 200多种 , 如自体中毒
学说、 自由基学说、 微量元素学说、 免疫学说等等 ,
其中自由基学说影响比较大。目前认为自由基累积损
伤是衰老的重要原因。随着体内抗氧化酶类减少 , 防
护功能减退 , 机体开始出现衰老。因此测定 SOD、
GSH-Px等老化相关酶及 NO、 MDA等老化代谢产物是
衡量药物抗氧化、 抗衰老的重要方法。楮实子为桑科
构树 Broussonetia papyrifera (L.)Vent.的干燥成熟果
实 , 为常用中药。 《名医别录》 载为上品:“甘、 寒 ,
无毒。主治阴痿水肿。益气 , 充肌肤 , 明目 , 久服不
饥 , 不老 , 轻身。” 李时珍 《本草纲目》 曰:“楮实功
用大补益。” 从中医理论分析 , 楮实子味甘性寒 , 归肝
脾肾经 , 有滋阴养血之功效 , 能通过补肝脾肾而发挥
延年益寿的作用。楮实子的现代化学研究结果表明:
楮实含有黄酮、 生物碱、 脂肪酸、 氨基酸、 皂苷、 矿
物质、 维生素等多种成分。袁晓等以2 , 6-二叔丁基对
甲酚 (BHT)和维生素 E为对照 , 测试和评估了从楮
实子分离得到的楮实子油和楮实子黄酮的抗氧化和清
除自由基的作用。现代药理研究表明:楮实子具有抗
老年痴呆 , 促进学习记忆 , 增强免疫 , 降低血脂的作
用。这些为楮实子的进一步的实验研究提供了依据。
通过本实验的初步研究 , 提示楮实子油可能是通过降
低模型小鼠升高的 NO值 , 抑制其细胞毒的作用;提
高SOD等老化相关酶活力 , 诱导酶活性防御系统 , 消
除MDA等老化代谢产物 , 保护机体免受自由基损伤 ,
进而发挥其抗氧化 、 延缓衰老的作用。通过对楮实子
油抗衰老作用的一些初步研究 , 对于进一步阐明楮实
子的抗衰老作用机理具有重要的意义。为楮实子开发
成为抗衰老药物或保健食品、 化妆品等打下基础。
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(收稿日期　2008-05-28)
·17·2008年第 26卷第 9期Vol.26 ,No.9 ,2008 四　川　中　医Journal of Sichuan of Traditional Chinese Medicine