全 文 ：分析测试　 中国食品添加剂ChinaFoodAdditives
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反相高效液相色谱法测定白苏子和
白苏子油中迷迭香酸的含量
邹盛勤
(江西省天然药物活性成分研究重点实验室 , 宜春学院化学与生物工程学院 , 宜春　336000)
　　摘　要:采用反相高效液相色谱法测定了白苏子及其油中迷迭香酸的含量。使用 KromasilC
18
(250mm×
4.6mm, 5μm)色谱柱 , 流动相为甲醇 -0.1%磷酸水溶液 (40 ∶60), 光电二极管阵列检测器 , 检测波长
331nm, 流速 0.8mL/min, 柱温 28℃。迷迭香酸进样量在 0.20 ～ 4.00μg时呈现良好的线性关系 , 线性回归方
程为 Y=3.02×105X-3.50×103 , r=0.9999, 平均加样回收率为 97.3%, RSD为 2.1%。白苏子中迷迭香酸
的含量为 0.2475mg/g, 约为白苏子油中迷迭香酸含量 0.0794mg/g的 3.12倍。白苏子采用压榨法生产白苏子
油时 , 活性成分迷迭香酸大部分残留在油粕中。方法灵敏 、 准确 , 重现性好 , 适用于白苏子和白苏子油中迷
迭香酸的定量检测分析 。
关键词:白苏;子和油;迷迭香酸;光电二极管阵列检测器;高效液相色谱
中图分类号:TS207.2　　　文献标识码:A　　　文章编号:1006-2513(2009)04-0173-04
Determinationofrosmarinicacidinseedsandoilsof
Perilafrutescens(L.)Briton
ZOUSheng-qin
(KeyLaboratoryofJiangxiProvinceforResearchonActiveIngredientsinNaturalMedicines,
ColegeofChemistryandBioengineering, YichunUniversity, Yichun336000)
Abstract:Thecontentsofrosmarinicacid(RA)inseedsandoilsofPerillafrutescens(L.)Britonweredeterminedby
RP-HPLC.RosmarinicacidwasseparatedandanalyzedonKromasilC18 column(250mm×4.6mm, 5μm)usingmeth-
anol-phosphoricacidsolution(40 ∶60)asmobilephaseatflowrateof0.8mL/min.UVdetectionwavelengthwassetat
210nmandthecolumntemperaturewas28℃.Anaveragerecoveryof97.3%wasobtainedwithaRSDof2.1% inthe
rangeof0.20 4.00μgforrosmarinicacid.ThelinearregressionequationofdycloninehydrochloridewasY=3.02×
105X-3.50×103(r=0.9999)forHPLCmethod.Thecontentsofrosmarinicacidinseedsandoilswere0.2475mg/g
and0.0794mg/g.Thecontentofrosmarinicacidinseedswas3.12timeshigherthanthatofinoils.ActiveComponentof
rosmarinicacidremainedmostlyinoilmealbymechanicalextrusion.Themethodwassensitiveandaccurate.Ithasgood
repeatabilityandapropermethodfordeterminationofrosmarinicacidinseedsandoilsofPerilafrutescens(L.)Britton.
Keywords:Perilafrutescens;seedsandoils;rosmarinicacid;photodiodearraydetector;HPLC
收稿日期: 2009-03-09
作者简介:邹盛勤 (1970-), 男 (汉族), 江西奉新人 , 副教授 , 主要从事天然药物成分提取与分析研究。
中国食品添加剂ChinaFoodAdditives　分析测试　
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白苏 [ Perilafrutescens(L.)Briton] 是长江
中下游地区田间路边常见的野生植物 , 为唇形花
科紫苏属植物[ 1] , 是国家首批批准的药食两用植
物 , 具有降气消痰 、 平喘 、润肠的功效 , 用于治
疗咳嗽 、 气喘 、 肠燥 、便秘等症 [ 2-3] 。白苏子为
白苏的干燥成熟果实 , 是一味临床较常用的中
药 , 也是特种油料原料。迷迭香酸 (rosmarinic
acid, 分子式 C18H16O8)为水溶性的多酚类化合
物 , 由一分子咖啡酸和一分子 3, 4-二羟基苯基
乳酸 (即丹参素)的缩合物 , 化学名为 [ R(E)] α
-{[ 3-(3, 4)-二羟基苯基)-l-氧代 -2-丙
烯基 ]氧基}-3, 4-二羟基苯丙酸(图 1)。 1958
年由 Elis首次从唇形科植物迷迭香 Rosmarinusof-
finalisL.中分离得到 , 在植物中的分布较为广
泛 , 主要存在于唇形科 、 紫草科 、 葫芦科 、 椴树
科 、伞形科的多种植物中 [ 4] 。迷迭香酸为天然抗
氧化剂 , 有抗炎 、 免疫抑制等多种活性 [ 5-6] , 可
广泛应用于保健食品 、 保健饮料和口服液等功能
性食品 , 具有重要的研究开发价值[ 7] 。白苏子及
其油的化学成分研究的文献报道较多 , 但主要集
中在三萜类 、 脂肪油 、 氨基酸 、 微量元素等方
面 [ 8-10] , 其中活性成分迷迭香酸的含量测定未见
文献报道。本文采用高效液相色谱法分离测定了
白苏子及其油中的迷迭香酸 , 并进行了定性鉴别
和定量分析 , 以期为白苏子及其油的化学成分研
究和开发利用提供依据。
图 1　迷迭香酸的化学结构式
1　材料与方法
1.1　仪器
Water高效液相色谱仪 (515泵 , 2996光电
二极管阵列检测器 , 柱温箱 , Empower中文色谱
工作站 , 美国);CP225D分析天平 (十万分之
一 , 德国 Sartorius公司);SK2510HP超声提取器
(上海科导超声仪器公司)。
1.2　材料
甲醇 (色谱纯 , 上海陆忠试剂厂);95%乙
醇 (分析纯 , 江西洪都生物化学有限公司);水
为高纯水;迷迭香酸对照品 (中国固体制剂制造
技术国家过程中心 , 批号:1189-060824, 供含
量测定用);其余试剂均为分析纯。白苏子 (采
自江西宜春), 经鉴定为唇形科紫苏属植物白苏
的成熟果实 , 白苏子油来自于同一批白苏子样品
(压榨法)。
1.3　实验方法
1.3.1　样品溶液的制备白苏子样品干燥后粉碎 ,
过 20目筛 。分别精密称取白苏子和油约 10g, 置
于具塞三角烧瓶中 , 加入 95%乙醇 50mL, 精密
称重后超声提取 60min, 放冷后用乙醇补足损失
的重量 。提取液用微孔滤膜 (0.45μm)过滤 ,
取续滤液作为样品溶液 。
1.3.2　标准液的配制准确称取迷迭香酸对照品
2.50mg, 以无水甲醇定容至 25mL作为对照品溶
液。然后配制成迷迭香酸浓度为 10、 20、 40、
100、 200μg/mL的对照品溶液。
1.3.3　迷迭香酸的定量检测采用外标标准曲线法
进行定量 , 由 HPLC色谱峰面积并根据标准曲线
方程求其含量 。
1.3.4　迷迭香酸的定性检测分别采用色谱峰保留
时间和紫外光谱对分析组分定性 , 应用 Empower
色谱软件适应性模块分析色谱峰纯度 。
1.3.5　色谱条件色谱柱为 KromasilC18柱 (250mm
×4.6mm, 5μm, 带保护柱);Waters2996光电二
极管阵列检测器;柱温 28℃;流动相为甲醇 -
0.1%磷酸水溶液 (40 ∶60);检测波长 331nm;
流速 0.8mL/min。
2　结果与讨论
2.1　迷迭香酸检测波长的确定
PAD检测器设定在 190 400nm波长范围内
进行检测扫描 , 对照品和样品中迷迭香酸在流动
相中的最大吸收波长均为 198.7nm和 331.1nm,
紫外吸收光谱一致 (图 2)。但由于流动相在低波
长处有较强的末端吸收 , 为减少干扰 , 提高信噪
比 , 选择 331nm为检测波长 , 此时基线平稳 , 色
谱峰峰形对称 。
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图 2　对照品和样品中迷迭香酸的紫外光谱图
2.2　线性关系考察
1-迷迭香酸
图 3　对照品(A)和样品(B)的 HPLC色谱图
将配制的不同浓度的对照品溶液分别进样
20μL, 平行 3次 , 测定迷迭香酸峰面积。以进样
量(μg)对峰面积(μV.s)平均值进行线性拟合 ,
得迷迭香酸线性回归方程为 Y=3.02 ×105 X-
3.50 ×103 , r=0.9999。表明当迷迭香酸进样量
在 0.20 ～ 4.00μg之间时 , 进样量与峰面积呈良
好的线性关系 。样品中迷迭香酸色谱峰的分离度
大于 2.5, 对称因子为 1.01, 理论板数为 7276。
迷迭香酸对照品和白苏子样品的 HPLC色谱见图
3。
2.3　峰纯度的考察
从色谱图中可以看出 , 对照品和样品中迷迭
香酸在色谱柱中的保留时间一致。色谱峰纯度分
析表明 , 对照品和样品溶液中迷迭香酸峰的纯度
角值均小于阈值 , 纯度角线位于自动阈值线下方
(图 4), 表明迷迭香酸峰色谱峰为单一组分吸收
峰 , 无其它成分的干扰 , 与色谱峰顶点 、起始点
和终止点光谱归一化叠加后结果相吻合。
图 4　对照品和样品中迷迭香酸峰纯度分析 (331nm)
2.4　精密度试验
精密吸取迷迭香酸的对照品溶液 20μL进样
分析 , 重复 5次 , 测得迷迭香酸峰面积相对标准
偏差(RSD)为 0.6%(n=5)。表明仪器精密度和
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进样方法良好。
2.5　重现性试验
精密称取同一批白苏子样品 5份 , 制备样品
溶液 , 精密吸取 20μL进样分析 , 外标法计算含
量 , 迷迭香酸含量的 RSD为 1.6% (n=5), 方
法重现性良好。
2.6　加样回收率试验
准确称取已知迷迭香酸含量的白苏子样品 5
份 , 分别加入迷迭香酸对照品适量 , 配制加标样
品溶液 。进样 20μL, 测定加标样品中迷迭香酸的
含量 , 计算回收率。迷迭香酸的平均加样回收率
为 97.3% (RSD=2.1%)。
2.7　白苏子和白苏子油样品中迷迭香酸的含量测
定
准确吸取各样品溶液 20μL注入高效液相色
谱仪 , 测定迷迭香酸峰面积 , 平行 3次 , 按外标
法计算样品中迷迭香酸的含量 , 结果见表 1。
表 1　白苏子和油中迷迭香酸的含量
编号 样品 迷迭香酸含量(mg/g)
平均含量
(mg/g)
RSD
(%)
1 0.2448
2 白苏子 0.2492 0.2475 0.99
3 0.2485
4 0.0787
5 白苏子油 0.0803 0.0794 1.03
6 0.0792
3　结论
实验结果表明 , 白苏子中迷迭香酸的含量为
0.2475mg/g, 约为白苏子油中迷迭香酸含量
0.0794mg/g的 3.12倍 。白苏子采用压榨法生产
白苏子油时 , 活性成分迷迭香酸大部分残留在油
粕中 , 有待进一步开发利用 。
HPLC配合光电二极管阵列检测器 , 在优化
的色谱条件下 , 可以直接对紫苏子和白苏子中微
量的迷迭香酸进行定性鉴别和定量分析 , 迷迭香
酸具有良好的分离度和线性关系。光电二极管阵
列检测器可以采集时间 -波长 -响应值三维数
据 , 即在设定波长区域内的各波长下进行立体数
据采集 , 既可以察看各波长下的色谱图又可以察
看各时间下的光谱图 , 在比对保留时间的基础之
上 , 加以光谱确认 , 因而可以克服仅以保留时间
一项指标定性的缺点 , 增强了定性的确定性 。此
外 , 二极管阵列检测器与 Empower色谱工作站系
统适应性软件联用 , 可分析组分色谱峰的峰纯
度 , 进一步增强色谱方法的定性能力 。
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