全 文 ：2011年 第 29卷 第 3期
2011 Vol.29 No.3
新疆中医药
Xinjiang Journal of Traditional Chinese Medicine
复方地柏丸由黄柏、地黄、金银花等药组成，系
药材原粉加蜜制成的小蜜丸，具有滋肾运脾、解毒
化瘀、利湿消肿的功效，用于治疗慢性肾炎、肾炎蛋
白尿、血尿、水肿等。原质量标准仅包括金银花的薄
为对照液，备用。按处方比例称取除龙血竭以外的
其它药材适量，依照本品制备工艺制得阴性样品，
并按供试品溶液制备方法制成阴性对照品溶液，分
别吸取上述3种溶液各8μL点于同一硅胶G薄层板
上，以三氯甲烷-甲醇（19∶1）为展开剂[1]，展开，取出，
晾干，置紫外光灯（365nm）下检视。供试品色谱中，
主斑点在与对照药材色谱相应的位置上，显相同颜
色的荧光斑点，而阴性对照则无此斑点。
2．2．2 冰片 取消痔栓1枚剪碎置于锥形瓶中，加
入氯仿10mL，振摇10min使溶解，再加10mL无水乙
醇，冷冻30min，滤过，自然挥干，残渣加10mL无水乙
醇，冷冻20min，滤过，滤液再加入5mL无水乙醇，冷
冻，滤过，自然挥干，残渣加1mL乙酸乙酯，作为供试
品溶液，另取冰片对照品，加乙酸乙酯制成每1mL含
lmg的溶液，作为对照液 [2]，按处方比例称取除冰片
以外的其它药材适量，依照本品制备工艺制得阴性
样品，并按供试品溶液制备方法制成阴性对照品溶
液，分别吸取阴性对照液5μL，对照液和供试液各
7．5μL点于同一硅胶G薄层板上，以环己烷-乙酸乙
酯（17∶3）为展开剂[1]，展开，取出，晾干，喷以1％香草
醛硫酸溶液，在105℃加热至斑点显色清晰，供试品
色谱中，在与对照药材色谱相应的位置上，显相同
颜色斑点，而阴性对照则无此斑点。
3 讨论
3.1 在鉴别龙血竭时，曾采用苯-乙酸乙酯（15∶0.5）[3]、
氯仿-甲醇（5∶5）[4]、氯仿-甲醇（95∶5）[5]等几种展开
剂，因分离效果欠佳，Rf值较低等，故未选用；在对
龙血竭的提取中，曾采用石油醚提取，斑点模糊不
清晰，改用乙醚无水乙醇提取法后，斑点清晰，分离
效果好。
3.2 由于龙血竭种类繁杂，本实验采用龙血竭（剑
叶龙血树）对照药材作为对照，结果供试品色谱中，
主斑点在与对照药材色谱相应的位置上，显相同颜
色的荧光斑点。
3.3 在鉴别冰片时，因冰片易挥发，曾采用升华、甲
醇提取等方法，但分离效果不好，改用氯仿无水乙
醇提取法后，斑点清晰，分离效果好。
3.4 在对消痔栓进行质量标准研究时，基质—半合
成脂肪酸甘油酯对提取方法影响较大，经过大量试
验，结果采用冷冻法除去该基质，得到了较理想的
薄层色谱图。
参考文献：
[1] 国家药典委员会．中国药典[S].一部.北京：化学工业出版社，
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[2] 秦文杰，吴成立，刘杰，等．消渴膏质量标准的研究[J].中医研究，
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[4] 祝红达，杨远荣，李纪元．克痔栓的制备及质量控制[J].中国药
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[5] 杨晓晖，杨霞，张翠莲，等．复方儿茶栓质量标准的研究［J］．中国
药学杂志，1999，34（7）：489-490.
（收稿日期：2011-03-24）
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复方地柏丸中黄柏的鉴别及含量测定
李小红1， 傅 涵2， 张海英3
（1．乌鲁木齐市米东区中医医院药械科， 新疆 乌鲁木齐 831400； 2．解放军第474医院， 新疆 乌鲁木齐 830011；
3．新疆医科大学附属中医医院， 新疆 乌鲁木齐 830000）
摘 要 目的：建立复方地柏丸中黄柏的质量控制方法。方法：采用薄层色谱法对黄柏进行定性鉴别，采用高
效液相色谱法测定盐酸小檗碱的含量。结果：薄层色谱斑点清晰，阴性对照无干扰。用Symmetry shield C18（3.9×
150mm，5μm）分析柱，流动相：乙腈-0．1％磷酸溶液（46∶54）（每100mL加十二烷基磺酸钠0．2g）；检测波长：265nm；流
速：1．0mL．min-1；柱温：35℃。盐酸小檗碱进样量在0．0652~0．3260μg之间线性关系良好，r=0．999 2（n=5），平均回收率
为100．5％，RSD=1．19％（n=6）。结论：用该法可对复方地柏丸中黄柏进行质量控制，操作简单、重复性好、精密度高。
关键词 复方地柏丸；黄柏；薄层色谱鉴别；高效液相色谱法
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层色谱鉴别，无含量测定项，标准要求相对较低，无
法全面评价其内在的质量。本试验在原标准的基础
上结合实际情况，增加了制剂中黄柏的薄层色谱鉴
别和高效液相含量测定，使其质量标准在原基础上
进一步提高，更有效地控制了复方地柏丸的质量。
1 实验仪器与试药
1．1 仪器
Waters2695高效液相色谱仪（美国Waters公司）；
AG-135电子天平0．01mg（瑞士）；SK3300LH超声清
洗器（上海科导超声仪器有限公司）：Direct-QTM5
超纯水仪（MilliPore）；AP-OIP真空泵（天津奥特塞
恩斯仪器有限公司）；YOKO-ZS紫外线分析摄影仪
（武汉药科新技术开发公司）。
1．2 试药
复方地柏丸（批号：20080127、20080609、
20090112，由自治区中医医院中药药学实验室提
供）；黄柏对照药材（批号：121510-200702）、盐酸小
檗碱对照品（批号：110713-200609），均购自中国药
品生物制品检定所；水为超纯水；乙腈为色谱纯；盐
酸、磷酸、苯、乙酸乙酯、甲醇、异丙醇、浓氨等均为
分析纯。
2 方法与结果
2．1 黄柏薄层鉴别[1-2]
取本品粉末3g，加甲醇10mL，加热回流30min，
滤过，滤液作为供试品溶液。另取黄柏对照药材
50mg，加甲醇5mL，同法制成对照药材溶液。再取盐
酸小檗碱对照品，加甲醇制成每lmL含0．5mg的溶液，
作为对照品溶液。再取除黄柏外的其余成分按制备
工艺制成缺黄柏的阴性对照溶液。照薄层色谱法
（《中国药典》附录VI B）试验，吸取供试品溶液、阴
性对照溶液、对照药材溶液、对照品溶液各10μL，
分别点于同一以羧甲基纤维素钠为黏合剂的硅胶
G薄层板上，以苯-乙酸乙酯-甲醇-异丙醇-浓氨试
液（12∶6∶3∶3∶1）为展开剂，置氨蒸汽预饱和的展开缸
内，展开，取出，晾干。置紫外光灯（365nm）下检识。
供试品色谱中，在与对照药材和对照品色谱相应的
位置上，显相同颜色的荧光斑点，阴性对照溶液无
干扰。
2．2 盐酸小檗碱含量测定
2．2．1 色谱条件 [3] Symmetry shield RpC18 column
（3．9×150mm，5μm）；柱温：35℃；流动相：乙腈-0．1％
磷酸溶液（46 ∶54）（每100mL加十二烷基磺酸钠
0．2g）；流速：1．0mL·min-1；检测波长：265nm；进样量
10μL；理论板数按盐酸小檗碱峰计算应不低于4 000。
2．2．2 对照品溶液的制备 精密称取盐酸小檗碱对
照品适量，置容量瓶中，加甲醇制成浓度32．6μg·mL-1
的溶液，即得。
2．2．3 供试品溶液的制备 取本品粉末约1．0g，精
密称定，置100mL容量瓶中，加入盐酸-甲醇（1∶100）
定容，密塞，置60℃水浴中加热15min，超声提取（功
率250W，频率50KHZ）30min，取出，放置至室温，取
上清液，过有机微孔滤膜（0．45μm），滤液即为供试
品溶液。
2．2．4 阴性对照溶液的制备 按处方要求制备不
含黄柏的阴性样品，同供试品溶液的制备方法制成
缺黄柏的阴性对照溶液，即得。
2．2．5 专属性试验 精密吸取对照品溶液、供试品
溶液及阴性对照品溶液各10μL，注入高效液相色谱
仪，按上述色谱条件测定。结果阴性对照溶液在盐酸
小檗碱对照品色谱峰保留时间相应处无干扰，且盐
酸小檗碱峰与其他组分可达到基线分离。
2．2．6 线性关系考察 精密吸取浓度32．6μg．mL-1的
盐酸小檗碱对照品储备液 1mL、2mL、3mL、4mL、
5mL，各置于5mL容量瓶中，用甲醇稀释至刻度，摇
匀，测定峰面积。以进样量为横坐标，测得的色谱峰
面积为纵坐标进行线性回归。求出盐酸小檗碱的线
性回归方程为：y=3．72×105x-4．99×104，r=0．999 2（n=5），
实验结果表明盐酸小檗碱在0．065 2～0．326 0μg范围
内具良好的线性关系。
2．2．7 稳定性试验 取同一份供试品溶液，按上述
色谱条件分别于0、2、4、6、8、10h进样10PL，结果盐
酸小檗碱峰面积的RSD为1．35%（n=6），表明供试品
溶液在10h内稳定性良好。
2．2．8 重复性试验 精密称取同一批（批号：20090112）
样品，按2．2．3项下分别制备5份供试品溶液，每份供
试品进样10μL，用标准曲线法测得盐酸小檗碱的平
均含量为2．086 4±0．02mg·g-1，RSD为0．96％，表明
本方法重复性良好。
2．2．9 精密度试验 按上述色谱条件，用同一批供
试品溶液连续进样6次，每次10μL，分别测得各峰面
积。盐酸小檗碱峰面积的RSD为1．16％，结果表明精
密度良好。
2．2．10 加样回收率试验 取批号为20090112样品
6份，每份重约0．5g，精密称定，精密加入一定量的盐
酸小檗碱对照品溶液，按供试品溶液制备项下操作
并测定，计算加样回收率。盐酸小檗碱平均回收率
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参苓白术丸收载于《卫生部药品标准》中药成
方制剂第四册（WS3-B-0764-91）[1]，功能主治补脾
胃，益肺气。用于脾胃虚弱，食少便溏，气短咳嗽，肢
倦乏力。处方中含有人参、茯苓、白术、山药、白扁豆
（炒）、莲子、薏苡仁（炒）、砂仁、桔梗、甘草十味中药
组成。而其中茯苓、白扁豆、甘草这3味中药具有较
为100．5％，RSD=1．19％，结果表明本方法准确可靠。
结果见表1。
表1 盐酸小檗碱加样回收率试验结果
称样量
（mg）
样品中
含量（mg）
加入对照
品量（mg）
实际测
得量（mg）
回收率
（%）
平均回
收率（%）
RSD
（%）
0．504 7 0．987 2 1．001 2 1．997 8 100．9
0．506 7 0．991 1 1．001 2 2．006 4 101．4
0．498 7 0．975 5 1．001 2 1．968 7 99．2 100．5 1．19
0．502 6 0．983 1 1．001 2 1．996 1 101．2
0．496 9 0．971 9 1．001 2 1．959 7 98．7
0．493 4 0．965 1 1．001 2 1．980 4 101．4
2．2．11 样品含量的测定 按照上述色谱条件，对
复方地柏丸3个批号进行含量测定，分别精密吸取
供试品溶液10μL，注入液相色谱仪，测定峰面积，计
算盐酸小檗碱平均含量为（2．018 6±0．02）mg·g-1，考
虑到药材的来源，以及制剂生产、储藏等因素，故暂
定本品每1g含黄柏以盐酸小檗碱（C20H18CINO4）计，
不得少于1．4mg。
3 讨论
黄柏的定性鉴别中，用《中国药典》2005版黄
柏药材项下的展开系统：乙酸乙酯-丁酮-甲酸-水
（10∶6∶1∶1）时，展开时间长，斑点不清晰，分离效果不
好；采用了苯-醋酸乙酯-甲醇-异丙醇-浓氨试液
（12∶6∶3∶3∶1）展开系统，展开缸用氨蒸汽预饱和，则
分离度好，专属性强，阴性无干扰。
采用高效液相色谱法测定盐酸小檗碱含量时，本
研究曾试用各种比例溶剂系统，先考察乙腈-0.1％磷
酸溶液（50 ∶50）[4]、乙腈-0．1％磷酸溶液（40 ∶60）
（每100mL加十二烷基磺酸钠0．1g）[5]，经预试表明，
在该条件下样品主峰受杂质峰干扰，故调整流动相
比例使其达到要求。当流动相乙腈-0．1％磷酸溶液
比例为（46∶54）（每100mL加十二烷基磺酸钠0．2g）
时，盐酸小檗碱出峰时间较为适中，主峰与其它峰
的分离度、主峰的理论板数、对称性等色谱参数均
符合要求。故最终确定色谱条件为色谱柱：
Symmetry shield RpC18（3．9×150mm，5μm）；流动相：
乙腈-0．1％磷酸溶液（46∶54）（每100mL加十二烷基
磺酸钠0．2g）；检测波长为265nm；流速：1mL·min-1；柱
温35℃。
本试验对复方地柏丸用水浴加热进行提取，结
果表明60℃超声提取30min后，样品含量保持恒定，
且峰对称性、塔板数、柱效都较高，故确定超声时间
为30min。
本文用薄层色谱法对黄柏进行鉴别，用高效液
相色谱法测定盐酸小檗碱的含量，该方法简单，专
属性强，重复性好，可用于复方地柏丸中黄柏的质
量控制。
参考文献：
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（收稿日期：2010-11-01）
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参苓白术丸微生物限度检查方法的验证
姜文生， 杜尔再
（新疆巴州药品检验所， 新疆 库尔勒 841000）
摘 要 目的：建立参苓白术丸的微生物限度检查法，并对方法进行验证。方法：细菌计数法为培养基稀释法，
霉菌和酵母菌计数法为常规法控制菌检查为常规法。结果：在3次独立的平行试验中，5株试验菌回收率均大于70％，
符合验证要求。结论：该方法消除了样品的抑菌性，可用于该品种的微生物限度检查法。
关键词 参苓白术丸；微生物限度检查；方法验证
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