全 文 ：薄层扫描法测定滇丹参 SFE-CO2
和常规提取物中丹参酮ⅡA的含量
卫　强1 , 梁晓原 , 陈　奎
(云南中医学院 , 云南昆明　650200)
　　摘　要:目的:测定滇丹参超临界二氧化碳 (SFE-CO2)和常规提取物中丹参酮ⅡA 的含量。方法:样品
经索氏提取 4h后 , 以苯—乙酸乙酯 (19.5∶0.5)为展开剂 , 检测波长λS=480nm , 参比波长λR=630。结果:平
均回收率为 99.81%, RSD 为3.94%.结论:本方法灵敏 , 准确 , 专属性强 , 可作为制定滇丹参提取物质量标准
的含量测定方法之一。
关键词:薄层扫描法;丹参酮ⅡA;含量测定
中图分类号:R284.2　　文献标识码:A　　文章编号:1000—2723(2005)03—0011—02
　　滇丹参为唇形科鼠尾草属植物 , 为临床常用的
活血化瘀药 , 在云南资源丰富 , 且分布广泛 , 作为
丹参的代用品 。本实验旨在摸索滇丹参 SFE-CO2
提取物及常规提取物中丹参酮 ⅡA的含量测定方
法 , 从而进一步为控制其提取物的质量作基础性研
究。
1　材料与仪器
1.1　仪器
HA221—50—06型超临界萃取装置 (南通华安
超临界萃取有限公司), CS —9000 型薄层扫描仪
(日本岛津), UPS—500 型 SANTAK 全稳压电源
(美国山特公司), 定量毛细管点样器 (美国 Drum-
mond), AEG—120型电子天平 (日本岛津)。
1.2　样品
药材滇丹参 , 购自昆明菊花村药材市场 , 经本
院中药学院药用植物教研室钱子刚副教授鉴定为唇
形科滇丹参 Salvia yunnanensis C.H.Wright的根 。
对照品丹参酮 ⅡA (批号 110766—200314)由中国
药品生物制品检定所提供 。
1.3　试剂及原料
CO2气体 (昆明氧气厂生产), 高效硅胶 G 薄
层板 (青岛化学试剂厂), 所用试剂均为分析纯。
2　实验方法与结果
2.1　对照品溶液的制备
精密称取经 60℃干燥至恒重的丹参酮 ⅡA 对
照品2.9mg , 以无水乙醇溶解并定容至 5ml , 摇匀 ,
得到浓度为 0.580mg/ml的丹参酮 ⅡA对照品溶液 。
2.2　供试品溶液的制备
称取滇丹参药材粗粉 300g 5份 , 分别经 SFE-
CO2 萃取设备进行萃取 (萃取温度 35℃, 压力
15MPa , 流量 25L/h , 95%乙醇 , 萃取 3h), 收集萃
取液以后浓缩 、干燥后得其 SFE-CO2 提取物;另
精密称取滇丹参粗粉 40g , 按 《中国药典》 (2000
版)的复方丹参片的生产工艺[ 1] , 加入 6 倍量
95%乙醇 , 回流提取1.5h , 抽滤 , 浓缩干燥后得常
规提取物。
称取上述提取物适量 , 置 100ml索氏提取器
中 , 加入60ml氯仿 72℃水浴回流提取 4h , 挥干氯
仿 , 残渣以无水乙醇溶解并定容至 10ml , 作为供
试品溶液。
2.3　薄层层析与测试条件
2.3.1　薄层层析
层析板:高效硅胶 G 薄层板 105℃活化 0.5h;
展开剂:苯—乙酸乙酯 (19.5∶0.5), 可见光下观
察 , 丹参酮 ⅡA呈暗红色斑点。
2.3.2　测试条件
参照梁晓原教授对云南丹参药材的薄层扫描研
究[ 2] , 根据提取物的扫描特点 , 确定主要条件为:
参比波长 λR =630 , 检测波长 λS =480nm , SWING
WIDTH:12.0 , SCAN MODE:ZIG -ZAG , BC AC-
11
收稿日期:2005—04—19
作者简介:卫强 (1977～ ), 男 , 安徽合肥人 , 云南中医学院 2003级研究生 , 师从梁晓原教授从事中药资源开发研究。
第 28 卷第 3期
2005年 9月
云南中医学院学报
Journal of Yunnan College of Traditional Chinese Medicine
Vol.28 No.3
9.2005
CUM: 8 , ACCUM NO.: 4 , SMOOTHING: 7
POINTS , MIN WIDTH:2.0 , MINI AREA:1000.0
2.4　标准曲线的绘制
吸取对照品丹参酮ⅡA溶液 1 , 2 , 3 , 4 , 5μl ,
分别点于同一高效硅胶 G 薄层板上 , 按上述层析
测试条件展开 , 扫描 , 测定峰面积 , 以点样量为横
坐标 , 斑点峰面积为纵坐标作图 , 回归方程为 A=
8155.4210+4359.4150 , r=0.99995。
2.5　精密度实验
同板精密度:吸取对照品溶液 3μl 5份 , 分别
点于同一高效硅胶 G 薄层板上 , 展开 , 扫描 , 测
定斑点峰面积值 , 结果 RSD=2.48%.
异板精密度:分别吸取对照品溶液 1μl 5份 ,
分别点于 5 块不同的高效硅胶 G 薄层板上 , 展
开 , 扫描 , 测定斑点峰面积值 , 结果 RSD =
2.74%.
仪器精密度:吸取对照品溶液 3μl一份 , 点于
高效硅胶G薄层板上 , 连续测定5次峰面积值 , 其
RSD=3.08%.
2.6　稳定性实验
吸取对照品溶液 3μl , 点于高效硅胶G 薄层板
上 , 展开 , 每隔 30min扫描一次 , 结果表明峰面积
值在 2.5h内稳定 , RSD为 2.25%.
2.7　样品测定
吸取对照品溶液 1μl , 4μl , 供试品溶液适量 ,
点于高效硅胶G薄层板上 , 依丹参酮 ⅡA薄层层析
与测试条件下展开 , 扫描 , 测定峰面积值 , 以外标
两点法计算含量 , 结果见表 1 、表 2。
表 1　滇丹参 SFE-CO2提取物含量测定结果
批号
丹参酮ⅡA含量(%)
1 2
平均含量
(%) x±S
1 0.09196 0.08665 0.08930
2 0.09896 0.1096 0.1043
3 0.1286 0.1241 0.1264 0.09988±0.01676
4 0.08637 0.08027 0.08332
5 0.09493 0.09720 0.09606
表 2　滇丹参常规提取物含量测定结果
批号 丹参酮ⅡA含量(%)
1 2
平均含量
(%) x±S
1 0.05874 0.05911 0.05892
2 0.07999 0.07629 0.07814
3 0.08160 0.08566 0.08363 0.07292±0.009222
4 0.06869 0.07436 0.07152
5 0.07382 0.07098 0.07240
2.8　加样回收率实验
2.8.1　板上加样回收
吸取滇丹参 SFE-CO2 提取物 1 号溶液 1μl 5
份 , 点于同一高效硅胶 G 薄层板上 , 另吸取对照
品溶液 (同前述配制的对照品溶液)1μl 5份再加
点于样品点上 , 以上述展开和测试条件展开 , 扫
描 , 其结果见表 3。
表 3　板上加样回收率结果
样品中丹
参酮ⅡA
含量(μg)
加入丹参
酮ⅡA
含量(μg)
实测量
(μg)
加样回收
率(%)
平均加样
回收率(%)
RSD
(%)
0.9052 0.5800 1.5086 104.03
0.9052 0.5800 1.4916 101.10
0.9052 0.5800 1.4654 96.59 99.66 3.20
0.9052 0.5800 1.4585 95.40
0.9052 0.5800 1.4919 101.16
2.8.2　全程加样回收
精密称取滇丹参 SFE-CO2 提取物 2 号 5 份 ,
加入丹参酮 ⅡA对照品 0.95mg (0.475mg/ml的丹
参酮 ⅡA对照品液 2ml), 按丹参酮 ⅡA供试品溶液
项下制备 , 展开 , 扫描测定 , 结果见表 4。
表 4　全程加样回收率结果
提取物
样品重
量(mg)
样品中
丹参酮
ⅡA含
量(mg)
加入丹参
酮ⅡA
含量(mg)
实测量
(mg)
加样
回收率
(%)
平均加
样回收
率(%)
RSD
(%)
9.0000 1.0806 0.9500 2.0774 104.93
8.7000 1.0446 0.9500 1.9477 95.06
8.9000 1.0686 0.9500 2.0561 103.95 99.81 3.94
7.8000 0.9365 0.9500 1.8702 98.28
7.7000 0.9245 0.9500 1.8443 96.82
(下转第 21页)
12
2005年 云南中医学院学报 第 28 卷
肝与糖尿病的发病关系。
7　结语
中医药治疗糖尿病 , 有时疗效不甚理想 , 是对
糖尿病病机的认识不够全面。传统的三消辨治已不
能适应临床需要 , 而从脾 、从肾 、 从肺 、从瘀 、 从
湿论治 , 也只反映了糖尿病的某一方面或某个阶
段 , 未能揭示糖尿病的本质。临床和实验发现 , 糖
尿病的发生发展与肝的关系密切。肝主疏泄 , 能协
调平衡人体气机升降出入运动。脾升胃降 , 肾藏肺
降 , 都与肝有关 。肝失疏泄 , 不仅使人体气机紊
乱 , 还会犯肺 、 伐胃 、 耗肾 、 伤津 、 损血和挟痰 ,
从而使人体气血津液输布失调 , 发生消渴 (糖尿
病)。从肝治疗糖尿病 , 就是通过调肝以使人体气
机畅达 , 脾升胃降 , 肾藏肺降 , 升降有序 , 气血津
液输布正常 , 则病症自消。同时应配合心理治疗 ,
调畅情志 , 促进病情恢复。
Treating Diabetes with Method of Treating Liver
DENG Chuan-xian
(HanJiang Hospital of Dajiankao City , DanJiangKou , Hubei 442700 , China)
ABSTRACT:Diabetes is one style of chronic endocrineb illness , belonging to the category of the Chinese emaciation-
thirst disease.Based on the symptoms of the emaciation-thirst disease , people usually break the emaciation-thirst dis-
ease down into three different types , the diabetes due to lung , stomach and kidney.In their diagnosis , they treat lung ,
stomach and kidney as the appropriate organs for diabetes involving the upper warmer , the midde warmer and the lower
warmer.Authors of this paper found the fourth organ ignored in the traditional Chinese medicine , liver , which also has a
close relationship with Diabetes.This paper will discuss a new therapy , not only treating lung , stomach and kidney , but
also treating liver.
KEYWORDS:Diabetes;Liver;Bases of Theory of TCM;Emaciation-thirst Disease
(上接第 12 页)
3　小结与讨论
为了考察索氏提取最佳提取时间 , 我们结合文
献 [ 2] , 考察了 4 , 5 , 6h的提取效果 , 结果 4h 内
丹参酮ⅡA已提净 , 因此选择 4h作为提取时间 。
由于本实验中提取物在浓缩 、 干燥时间相对较
长 , 影响因素较多 , 而丹参酮 ⅡA稳定性差 , 导致
相同质量药材 、 相同提取条件下其丹参酮 ⅡA含量
差异增大 , 通过二者提取物中丹参酮ⅡA 含量的比
较 , SFE-CO2 提取物比常规高出 0.02696%.
在索氏提取后 , 装有 SFE-CO2 提取物的滤纸
袋较常规提取物纸袋干净 , 且无暗红色片状不溶物
残留 , 纯度相对较高。
[参考文献]
[ 1] 中国药典委员会.中国药典 (一部) [ M] .北京:化
学工业出版社 , 2000.518—519.
[ 2] 梁晓原 , 侯安国 , 阮志国 , 等.薄层扫描法测定云南
主要丹参植物的丹参酮 ⅡA 含量 [ J] .云南中医学院
学报 (增刊), 2000.13—16.
Determination of Tangshinone ⅡA from the Traditional Extraction and SFE-CO2
Extraction ofSalvia yunnanensis C.H.Wright by TLC-scanning
WEI Qiang , LIANG Xiao-yuan , CHEN Kui
(Yunnan College of TCM , Kunming , Yunnan 650200 , China)
ABSTRACT:Objective:To determine Tangshinone ⅡA from the traditional extraction and SFE -CO2 extraction of
Salvia yunnanensis C.H.Wright.Method:After the sample is extracted 4 hour by soxhlet extraction , and A mixed sol-
vent system of benzene and ethyl acetate(19.5∶0.5)was used as the developer.The scanning was performed at λS=
480nm , λR=630nm.Result:The recovery was 99.81%, RSD was 3.94%.Conclusion:The method with sensitivity ,
accuracy and exclusiveness should be one of the ways of establishing the quality standard of Salvia yunnanensis C.H.
Wright s extraction.
KEYWORDS:TLC-scanning;Tangshinone ⅡA;Determination on Content
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第 3 期 邓传贤:糖尿病从肝论治刍议