全 文 ：度 ,然后保持恒速释药(药动学研究有待进行)。青
蒿琥酯贴片与其它青蒿琥酯临床常用剂型比较 ,青
蒿琥酯贴片具持效性 ,可维持稳定血药浓度 ,避过肝
脏首过效应 ,且给药方便 。
参考文献:
[ 1] 　王京燕 ,徐在海 ,王明道.青蒿琥酯的毒性机理及其对弓形虫的
作用[ J] .中国药理学与毒理学杂志 , 1997 , 11(2):127.
[ 2] 　杨　平 ,潘启超 ,梁永钜.青蒿酯钠的抗瘤作用[ J] .癌症 , 1997 ,
16(3):186.
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新药与临床药理 , 2000, 11(2):113.
[ 4] 　周莉玲 ,侯海霞 ,李　锐.青蒿琥酯透皮吸收研究中接收液的筛
选[ J] .中成药 , 2000 , 22(3):184.
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生物利用度[ J] .广州中医学院学报 , 1990 , 7(3):163.
大孔树脂吸附法富集保和丸中橙皮苷的工艺研究
刘中秋 , 　赖小平 , 　吴燕红 , 　蔡　雄 , 　梁　前
(广州中医药大学 ,广东 广州 510405)
关键词:保和丸;橙皮苷;大孔树脂吸附法;富集
摘要:目的:研究大孔树脂吸附法富集保和丸中有效成分的工艺条件及参数。方法:以保和丸中主要药味陈皮中的主要
成分橙皮苷富集程度为考察指标 , 考察大孔树脂富集保和丸有效成分的最佳工艺条件。结果:保和丸提取液(500mg/
ml)5mL上大孔树脂柱(R15mm×H100mm),吸附 30min 后 , 先用100mL蒸馏水洗脱除去杂质 ,然后 , 采用100mL 50%乙
醇洗脱橙皮苷为最佳工艺。结论:通过大孔树脂富集橙皮苷洗脱率在 95%以上 , 50%乙醇洗脱液干燥后总固物约为处
方量的 4%。采用此法可较好的富集保和丸中有效成分。
中图分类号:R944.2　　　　　文献标识码:A　　　　　文章编号:1001-1528(2001)08-0550-03
Study on Enrichment Process of Hesperidin of Baohe Pills with Macroporous
Resin
LIU Zhong-qiu , 　LAI Xiao-ping , 　WU Yan-hong , 　CAI Xiong , 　LIANG Qian
(Guangzhou Universi ty of Tradi tional Chinese Med icine , Guangzhou 510405 , Ch ina)
Key words:Baohe Pills;hesperidin;macroporous resin;enrichment
Abstract:Objective:To study the technological parameters of the enrichment purif ication process of Baohe Pills
w ith macroporous resin.Methods:With the enriched deg ree of hesperidin of Pericarpium Cit ri Reticulatae of
Baohe Pills as a marker , the optimum technological parameters of the enrichment process w ere studied.Results:
The opt imum process is that 5mL of the ex tract of BaoHe Pills(500mg/mL)was adsorbed for 30min wi th a col-
umn of macroporous resin(R15mm×H100mm)and the resin w as washed w ith 100mL of distilled w ater , then
the hesperidin w as eluted from the macroporous resin w ith 100mL of 50%ethanol.Conclusion:The elutive rate
of hesperidin w as above 95% by means of the macroporous resin.So this process enriching the active compo-
nents of Baohe Pills is feasible.
收稿日期:2001-10-10
基金项目:广东省重点科技攻关项目(中药有效成分提取分离技术研究 2000).
作者简介:刘中秋(1968～ ),男 ,湖南省汉寿县人 ,讲师 ,研究方向:中药新药开发及应用基础研究 ,电话:(020)86591233-2354.
　　保和丸为《中国药典》收载的中成药 ,疗效确切 。
具有消食导滞 、和胃之功效 ,临床上广泛用于食积停
滞 ,脘腹胀满 ,嗳腐吞酸 ,不欲饮食等症[ 1] 。但保和
丸为传统全粉末水泛丸和大蜜丸 ,存在服用量大 ,崩
解时限 、卫生学难控制等缺陷。大孔吸附树脂为一
种有机高聚吸附剂 ,具有选择性吸附有机化合物的
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能力 ,可应用于皂苷 、黄酮 、蒽醌 、生物碱 、水溶性酚
性成分等的富集 ,其吸附性能 、解吸条件参数因化合
物的理化性质不同而不同[ 2] 。本文以保和丸中陈
皮的主要成分橙皮苷和总固物为评价指标 ,着重考
察 D101型大孔吸附树脂富集保和丸有效成分的工艺
条件与参数 ,探索保和丸剂型改革的可行工艺方法
及流程。
1　仪器 、材料和试剂
1.1　仪器　GAMAG Ⅲ型薄层扫描仪(瑞士 GAM-
AG 公司)。
1.2　材料　保和丸(市售 ,批号 990523),橙皮苷标
准品(中国药品生物制品检定所), 大孔吸附树脂
(D101型 ,天津制胶厂)。
1.3　试剂　乙醇 、乙酸乙脂 、甲醇 、甲苯 、甲酸 、硅胶
G 、CMC-Na均为AR级。
2　方法与结果
2.1　橙皮苷含量测定
2.1.1　含量测定方法:取水提液适量 ,浓缩近干 ,加
两倍量甲醇超声提取 ,过滤 ,沉淀用甲醇超声洗涤 ,
过滤 ,合并滤液蒸干 ,残渣加甲醇使溶解 ,定量转移
至 2mL 量瓶中 ,加甲醇至刻度 ,摇匀 ,作为供试品溶
液(过大孔吸附树脂的 50%乙醇洗脱液直接蒸干 ,
甲醇定容 ,即得)。另取橙皮苷对照品适量 ,精密称
定 ,加甲醇使 1mL 含 0.2mg 的溶液 ,作为对照品溶
液。照薄层色谱法(中国药典 2000年版一部附录 Ⅵ
B)试验 ,精密吸取供试品溶液 2μL 、对照品溶液 1μL
与2μL ,分别交叉点样于同一用 0.5% NaOH 和
0.3%CMC-Na溶液制备的硅胶 G 薄层板上 , 以乙
酸乙脂-甲醇-水(100∶17∶13)为展开剂 , 展至约
3cm ,取出 ,晾干 ,再以甲苯-乙酸乙脂-甲酸-水(20∶
10∶1∶1)上层液为展开剂 ,展至约 8cm ,取出 ,晾干 ,
喷以 3%的 AlCl3/EtOH 溶液 ,照薄层色谱法(中国
药典 2000年版一部附录 Ⅵ B薄层扫描法)进行扫描
测定 ,波长:λs=280nm ,测量供试品吸收度积分值与
对照品吸收度积分值 ,按外标二点法计算 ,即得。
2.1.2　保和丸样品液制备和橙皮苷的含量测定:保
和丸粉碎成粗粉 ,取 1kg ,加 8倍量水煎煮 3次 ,每
次 1h ,过滤 ,滤液浓缩至 1000mL ,离心 ,取上清液 ,
加蒸馏水定容至 2000mL 作为样品液。取其中
10mL , 浓缩至近干 , 加 20mL 甲醇 , 超声提取
30min ,过滤 ,用 10mL 甲醇超声 5min 洗涤滤渣 2
次 ,合并滤液 , 水浴挥干 , 加甲醇使溶解 , 定容至
2mL ,作为供试品溶液 ,照含量测定方法测定橙皮苷
含量为 0.34±0.002mg/mL(n=3), RSD=0.60%。
2.2　工艺参数考察与优化
2.2.1　大孔吸附树脂的预处理 、装柱与再生:以甲
醇湿法装柱(R15×H90mm),继而用甲醇洗脱 ,不时
检测流出的甲醇 ,当流出的甲醇液与水混合不呈白
色混浊时即可 , 然后用大量的蒸馏水洗至无醇
味[ 3] 。
2.2.2　洗脱溶媒确定
2.2.2.1　溶媒定性选择:吸取 5mL 保和丸样品液
上大孔树脂柱 ,依次用蒸馏水 、10%乙醇 、30%乙醇 、
50%乙醇 、70%乙醇 100mL 梯度洗脱 ,分段收集 ,洗
脱液蒸干 ,甲醇定容至 2mL ,照薄层色谱法薄层定
性检查橙皮苷 。结果显示 50%乙醇洗脱液中含有
橙皮苷 ,其余洗脱液中在加大点样量的条件下 ,均不
能检出橙皮苷 ,故解吸洗脱橙皮苷溶媒确定为 50%
乙醇液 。
2.2.2.2　50%乙醇洗脱量的确定:精密吸取样品液
5mL(0.5g 生药/mL)上柱 ,静置 30min 后 ,先用蒸
馏水 100mL ,再用 50%乙醇共 200mL 依次洗脱 ,洗
脱液流速 1.5mL/min ,对 50%乙醇洗脱液每 50mL
收集 1份 ,共 4份 ,分别蒸干 ,用甲醇溶解并定容至
2mL ,分别测定橙皮苷含量 ,结果见表 1 。
表 1　 不同用量 50%乙醇洗脱后橙皮苷含量
50%乙醇用量(mL) 橙皮苷含量(mg) 累积百分含量(%)
0～ 50 0.87 52.4
50～ 100 0.74 97.0
100～ 150 0.05 100.0
150～ 200 未检出 —
　　表 1 结果显示 , 100mL 洗脱溶媒橙皮苷的累积
百分含量达 97%,基本洗尽 ,故确定洗脱溶媒量为
100mL 。
2.2.3　最佳上柱量的确定
分别吸取保和丸提取液 5 , 10 , 15 ,20 , 25mL 上
大孔树脂柱 , 过柱流出液重吸附 3 次 , 且静置
30min ,依次用蒸馏水 、50%乙醇各 100mL 梯度洗
脱 ,收集 50%乙醇洗脱液 ,按测定方法 ,测定橙皮苷
含量 ,结果见表 2。
表 2　 不同上柱量橙皮苷含量
上柱量(mL) 橙皮苷总量(mg n=2)
5 1.64±0.073
10 1.70±0.086
15 1.51±0.071
20 1.72±0.094
25 1.57±0.079
　　表 2结果显示 ,5mL 上柱量与其他各上柱量通
过大孔树脂吸附柱后 , 50%乙醇洗脱液中橙皮苷总
含量无显著性差异 ,这说明 5mL 上柱量为饱和上柱
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量 ,超过 5mL即超过了树脂的吸附容量 ,且 5mL 上
柱量过柱后橙皮苷总量与 5mL 样品原液中的总量
接近 ,因此 ,5mL 为最佳上柱量。
2.2.4　最佳吸附时间的确定
分别吸取保和丸提取液 5mL 上柱 ,过柱流出液
重吸附 3次 ,分别静置 5 , 15 ,30 ,60min ,依次用蒸馏
水 、50%乙醇各 100mL 洗脱 ,收集 50%乙醇洗脱
液 ,测定 50%乙醇液中橙皮苷含量 ,结果见表 3。
表 3　 不同吸附时间橙皮苷含量
吸附时间(min) 橙皮苷总量(mg)
5 1.31±0.056
15 1.21±0.058
30 1.64±0.073
60 1.29±0.041
　　从 50%乙醇洗脱液橙皮苷总量分析 ,静置时间
30min含量最高。时间过长与过短含量均偏低 ,这
可能时间过短 ,吸附不完全 ,时间过长 ,解吸难等有
关。
2.3　精制程度考察
2.3.1　保和丸水提液总固物测定:精密吸取 5mL
保和丸样品液置已恒重且称定的蒸发皿中 ,先水浴
蒸干 ,再置 105℃烘箱中烘至恒重 ,干燥器中冷却
中 ,称定重量 ,计算总固物含量 。结果见表 4。
2.3.2　保和丸水提液过柱总固物测定:精密吸取
5mL 保和丸样品液 ,上柱 ,按最佳洗脱条件洗脱 ,收
集50%乙醇洗脱液置已恒重且称定的蒸发皿 , 按
2.3.1方法测定总固物 ,结果见表 4。
表 4　 大孔树脂吸附法精制程度比较
项　　目 总固物(mg) 橙皮苷总量(mg)
上柱前 455 1.70
过柱后 100 1.64
橙皮苷保留率(%) 96.5
　　表 4结果显示 ,以保和丸水提液过大孔树脂吸
附柱前后的总固物和橙皮苷含量为评价指标 ,大孔
树脂吸附法不仅可有效的除去杂质 ,而且保和丸方
中的主要有效成分的保留率为 96.5%,该法应用于
保和丸剂改的精制工艺具有可行性 。
3　讨论
3.1　发挥中医药历史优势 ,选择疗效确切 、安全 、可
控 、稳定的传统中药制剂进行二次改造 ,提高产品技
术含量 ,是中药行业发展值得注意的重要方面。我
们从市场需求 、疗效 、剂改可行度等方面综合分析 ,
选择了药典制剂保和丸 ,尝试从新技术 、新工艺应用
上 ,探讨提高传统制剂技术含量进行二次改造的可
能性和可行性。剂型改革 、新技术应用必须围绕“药
效不降低”这一核心问题开展研究。本研究紧密的
结合“药理导向评价”模式 ,与原剂型相比较 ,对大孔
树脂吸附法富集后的精制物进行多指标药理评价 ,
结果显示 ,没有改变原剂型之功效 ,且服用剂量明显
减少 ,初步说明剂改具有合理性 。
3.2　本文证实了 D101型大孔吸附树脂富集橙皮苷
等黄酮类成分水溶液不仅具有吸附快 、解吸率高特
点 ,而且具有吸附容量较大 ,洗脱率高 、树脂再生简
便等优点 ,在保和丸剂改中具有一定的推广应用价
值 。
3.3　大孔树脂吸附法在藿香正气丸剂改中的应用
提供了成功范例 ,本实验亦尝试该技术的应用。保
和丸为复方制剂 ,所含化学成分复杂 ,水提物中主要
为黄酮类成分 ,实验时曾采用橙皮苷 、芦丁等为对照
测定其总黄酮含量 ,但方法学考察显示该测定方法
可靠度较差;亦另有实验显示陈皮中挥发油成分不
宜水提和采用大孔树脂吸附法分离;为此 ,本实验选
择了可定量的橙皮苷为有效成分富集的评价指标 ,
从研究结果来看 ,前后总固物显著减少 ,而橙皮苷洗
脱率 、保留率达 96.5%。从精制 、解吸等方面分析 ,
大孔树脂吸附法适宜于保和丸剂改要求。
3.4　本文采用薄层扫描法测定橙皮苷含量方法可
行 。样品中薄层斑点分离度好(R=1.5);线性关系
良好 ,回归方程为 Y =5854.63X +1020.81 , r =
0.9991;回收率为 95.1%, RSD=2.3(n=5);采用
紫外扫描在 2h 内稳定 。
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社.
[ 2] 　侯世祥 ,田恒康.大孔吸附树脂在中药复方分离工艺中的应用
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