全 文 ：白茅根水提物中绿原酸的含量测定
王　莹１，２，孟宪生２＊，包永睿２，郭小瑞２
（１．通辽市职业学院 药学系，内蒙古 通辽０２８０００；２．辽宁中医药大学 药学院，辽宁 大连１１６６００）
摘　要：目的：优选白茅根水提物中绿原酸的最佳提取工艺，测定绿原酸的含量。方法：通过正交试验设
计考察白茅根水提物中的最佳提取工艺；采用高效液相色谱法测定绿原酸的含量。结果：白茅根水提物
中绿原酸的最佳提取条件为加１６倍量水，回流提取３次，１ｈ／次。精密度、重复性、稳定性、回收率试验
结果均比较理想，测定的绿原酸含量达到０．１３９％。结论：该方法快速简便，结果准确，可作为白茅根水
提物的质量控制方法之一。
关键词：白茅根水提物；绿原酸；提取工艺；高效液相色谱法；含量测定
中图分类号：Ｒ２８４　　　文献标识码：Ａ　　　文章编号：１６７３－２１９７（２０１１）０３－００２２－０２
收稿日期：２０１０－１２－１８
基金项目：“十一五”科技重大专项计划（２００９ＺＸ０９１０３－３５４）
作者简介：王莹（１９８２－），女，辽宁中医药大学生硕士研究生，研究方向为生药学；孟宪生（１９６４－），男，博士，辽宁中医药大
学副教授，研究方向为中药组分配伍、代谢组学及药品质量分析。
　　 白茅根为禾本科植物白茅 （Ｉｍｐｅｒａｔａ　ｃｙｌｉｎｄｒｉｃａｌ
Ｂｃａｕｖ．Ｖａｒ．ｍａｊｏｒ（Ｎｅｅｓ）Ｃ．Ｅ．Ｈｕｂｂ．）的干燥根茎，广泛
分布于全国各地，为中医传统常用中药，具有凉血止血、清
热利尿之功效，用于治疗热病烦渴、吐血、尿血、热淋涩痛、
小便不利、水肿和黄疸等症。白茅根作为常用的中药材之
一，为使用方便，临床上多采用传统煎煮方法制备的白茅根
水提物。目前研究表明，白茅根药用活性成分相对较少，而
绿原酸是最为重要的成分之一，具有多种生物活性。因此，
建立白茅根水提物中绿原酸的含量测定方法，以期为白茅
根水提物的质量控制提供科学依据。
１　材料
１．１　仪器
Ａｇｉｌｅｎｔ　１１００型高效液相色谱仪（ＤＡＤ检测器）：美国
Ａｇｉｌｅｎｔ公司；旋转蒸发仪（ＲＥ－５２ＡＡ）：上海亚荣生化仪器厂；
循环水式真空泵（ＳＨＺ－ＤⅢ）：巩义市予华仪器有限责任公司；
ＡＣＣＵＬＡＢ　ＡＬＣ－１１Ｃ．４型电子天平：德国赛多利斯集团。
１．２　药品与试剂
白茅根（批号：２００７０６０１）产于河北省，购于大连同仁堂
药店，经辽宁中医药大学翟延君教授鉴定为（Ｒｈｉｚｏｍａ　Ｉｍ－
ｐｅｒａｔａｅ）；绿原酸对照品（批号：７５３－８７０１），中国药品生物
制品所鉴定；甲醇色谱纯：天津市科密欧化学试剂有限公
司；乙腈色谱纯：ＴＥＤＩＡ公司。
２　实验内容及方法
２．１　色谱条件
色谱柱为Ａｇｉｌｅｎｔ－Ｃ１８（４．６ｍｍ×２５０ｍｍ）；流动相：甲
醇－乙腈（５０：５０）：水（０．５％冰醋酸）＝１３：８７；检测波长
３２７ｎｍ；流速为１．０ｍＬ／ｍｉｎ。
２．２　对照品和供试品溶液的制备
①对照品溶液：精密称取绿原酸对照品１０．４５ｍｇ，置于
１０ｍＬ棕色容量瓶中，５０％甲醇溶解并稀释至刻度，作为储
备液，再取２ｍＬ置于１０ｍＬ棕色容量瓶中，５０％甲醇定容至
刻度，浓度为０．２０９ｍｇ／ｍＬ；②供试品溶液：取白茅根药材
５ｇ，粉碎，过１０目筛，精密称定，置圆底烧瓶中，加１６倍量
水，加热回流提取３次，１ｈ／次，合并提取液，５０℃减压浓缩
至２５ｍＬ，精密量取浓缩液５ｍＬ，置棕色瓶中，用０．４５μｍ微
孔滤膜过滤，取续滤液即得。
２．３　提取条件的考察
将白茅根药材粉碎过１０目筛，准确称取９份白茅根粉
末各５０ｇ，加热回流，按正交试验设计分别进行提取，５０℃旋
蒸浓缩至５００ｍＬ。根据预实验及查阅相关文献，选择溶媒
量、提取时间、提取次数３个因素，对主要影响因素各取３个
水平，进行Ｌ９（３４）正交试验考察，优选最佳提取条件。用加
权综合评分，以绿原酸含量为主指标（权重系数为０．６），出
膏率（权重系数为０．４）为次指标，即综合评分作为考察指标
确定白茅根水提物提取条件。
表１　正交试验因素水平
水平
因素
Ａ溶媒量（药材倍数） Ｂ提取时间（ｈ） Ｃ提取次数
１　 ８　 １　 １
２　 １２　 ２　 ２
３　 １６　 ３　 ３
２．４　标准曲线的制备
精密吸取浓度为０．１０４５ｍｇ／ｍＬ的绿原酸对照品溶液
—２２—
４、８、１２、１６、２０μＬ，注入高效液相色谱仪，测定各自峰面积，
以对照品进样量（μｇ）为横坐标，色谱峰峰面积值为纵坐标，
求得回归方程：Ｙ＝２９２０Ｘ＋２７．７７，ｒ＝０．９９９９。结果表明绿
原酸对照品在０．４１８～２．０９μｇ范围内与峰面积呈良好的线
性关系。
２．５　精密度试验
取同一批号白茅根药材，按照“２．２”项供试品溶液制备
方法操作，分别精密吸取各供试品溶液１０μＬ，连续进样６
次，测定各自绿原酸峰面积，测得峰面积值的ＲＳＤ为０．８７％
（ｎ＝６）。测定结果表明，本实验精密度试验符合有关规定。
２．６　重复性试验
取同一批号白茅根药材，精密称取５ｇ，共６份，按照
“２．２”项供试品溶液制备方法操作，浓缩至２５ｍＬ，置于棕色
容量瓶中，进样量为１０μＬ，测定每份样品中绿原酸的含量。
样品中绿原酸平均含量为０．５６４４ｍｇ／ｇ，ＲＳＤ为１．２５％（ｎ＝
６），本实验重复性良好。
２．７　稳定性试验
取同一批号白茅根药材约５ｇ，精密称定，按照“２．２”项
供试品溶液制备操作，分别在０、２、４、６、８、１０ｈ，测定样品中
绿原酸峰面积，测得峰面积值的ＲＳＤ为０．１１％（ｎ＝６），说
明供试品溶液在１０ｈ内稳定。
２．８　回收率试验
采用加样回收法，取同一批号白茅根药材，取２．５ｇ（共６
份），精密称定，分别精密加入绿原酸对照品溶液（１．０４５
ｍｇ／ｍＬ）各１．４ｍＬ，称定重量，制成供试品溶液，测定样品中
含量，计算回收率，结果平均回收率为９６．６６％，ＲＳＤ为１．
４２％（ｎ＝６）。
表２　回收率试验
编号
称样量
（ｇ）
样品中绿
原酸含量
（ｍｇ）
对照品
加入量
（ｍｇ）
测得量
（ｍｇ）
回收率
（％）
平均回收
率（％）
ＲＳＤ
（％）
１　 ２．５３３８　１．４１９４
２　 ２．５１２７　１．４０７６
３　 ２．５１８５　１．４１０９
４　 ２．５０３４　１．４０２４
５　 ２．４７３２　１．３８５５
６　 ２．５２２７　１．４１３２
１．４６３
１．１１３　 ９５．１６
１．１１７　 ９６．６６
１．１３３　 ９９．２４
１．１１４　 ９６．４８
１．１１１　 ９７．１９
１．１１１　 ９５．２３
９６．６６　 １．４２
２．９　样品的含量测定
取同一批号白茅根药材，精密称取５ｇ，取３份，按照
“２．２”项供试品溶液制备方法操作，浓缩至２５０ｍＬ，置于棕
色容量瓶中。按“２．１”项色谱条件分析，进样量为１０μＬ，测
定每份样品中绿原酸的含量。
３　实验结果
３．１　各因素对提取白茅根水提物中绿原酸的影响
正交试验的结果和方差分析，见表３、表４。
经方差分析结果得，溶媒量、提取时间对提取效果无显
著影响（Ｐ＞０．０５），提取次数对提取效果有显著影响（Ｐ＜
０．０５），对提取效果影响大小顺序依次为Ｃ＞Ａ＞Ｂ，即提取
次数＞溶媒量＞提取时间。由直观分析得，白茅根水提液
最提取佳工艺为 Ａ３Ｂ１Ｃ３，即加１６倍量水，回流提取３次，
１ｈ／次。
表３　正交试验结果
序号 溶媒量
提取
时间
提取
次数
空白
干膏收
率（％）
绿原酸
（％）
综合
指标
１　 １　 １　 １　 １　 ３１．２２　 ０．０７３６　 ６０．８０
２　 １　 ２　 ２　 ２　 ４１．８８　 ０．０８８２　 ７６．３３
３　 １　 ３　 ３　 ３　 ４７．６０　 ０．０９１４　 ８２．３６
４　 ２　 １　 ２　 ３　 ４４．３８　 ０．１０８４　 ８８．２９
５　 ２　 ２　 ３　 １　 ４８．６４　 ０．０９３０　 ８３．９７
６　 ２　 ３　 １　 ２　 ３４．４４　 ０．０７５６　 ６４．２９
７　 ３　 １　 ３　 ２　 ５１．４０　 ０．１２１０　１００．００
８　 ３　 ２　 １　 ３　 ３８．９２　 ０．０９１２　 ７５．５１
９　 ３　 ３　 ２　 １　 ４９．１０　 ０．０９６６　 ８６．１１
Ｋ１ ２１９．４９　２４９．０９　２００．６０　２３０．８８
Ｋ２ ２３６．５５　２３５．８１　２５０．７３　２４０．６２
Ｋ３ ２６１．６２　２３２．７６　２６６．３３　２４６．１６
Ｒ　 ４２．１３　 １６．３３　 ６５．７３　 １５．２８
ＳＳ　 ２９９．３９　 ５０．２６　７８６．３１　 ３９．８９
表４　方差分析
方差来源 离差平方和ＳＳ 自由度ｒ 方差 ＭＳ　 Ｆ值 Ｐ＊
Ａ　 ２９９．３９　 ２　 ６１．７０　 ７．５１ ＞ ０．０５
Ｂ　 ５０．２６　 ２　 １７０．２２　 １．２６ ＞ ０．０５
Ｃ　 ７８６．３１　 ２　 ３１７．２２　 １９．７１ ＜ ０．０５＊
Ｄ（误差） ３９．８９　 ２　 １５．１３
　　Ｆ０．０５（２，２）＝１９
注：干膏收率评分＝（４０／最大干膏收率）×干膏收率
绿原酸评分＝（６０／最大绿原酸含量）×绿原酸含量
综合评分＝干膏收率评分＋绿原酸评分
３．２　白茅根水提物中绿原酸的含量
按最佳工艺提取白茅根水提物中绿原酸，得到平均含
量为０．１３９％。
表５　白茅根水提物中绿原酸含量测定结果
序号 称样量（ｇ） 峰面积 含量（％） 平均含量（％）
１　 ５０．７９　 ３３８８．９　 ０．１４２
２　 ５０．９２　 ３３１９．８　 ０．１３８
３　 ５０．６８　 ３２５０．２　 ０．１３６
０．１３９
图１　绿原酸对照品高效液相色谱
４　讨论
运用ＨＰＬＣ测定白茅根药材中绿原酸含量的方法已有
—３２—
ＨＰＬＣ法测定宫血宁分散片中重楼皂苷Ｉ的含量
徐　龙１，董　玥１，刘永忠２
（１．宜丰县人民医院，江西 宜丰３３６３００；２．江西中医学院，江西 南昌３３０００６）
摘　要：目的：建立宫血宁分散片中重楼皂苷Ｉ含量的方法。方法：采用高效液相色谱 （ＨＰＬＣ）法，选用
Ｗａｔｅｒｓ　Ｓｙｍｍｅｔｒｙ　ＳｈｉｅｌｄＴＭＲＰ１８柱（２００ｍｍ×４．６ｍｍ，５μｍ）；流动相：乙腈－水（４１：５９）；检测波长
２０３ｎｍ；流速：ｌｍＬ／ｍｉｎ。结果：楼皂苷Ｉ进样量在ｌ．０　２３１～２６．１０２μｇ范围内具有良好的线性关系（ｒ＝
０．９９９８，ｎ＝６）；平均加样回收率为９９．８０％，ＲＳＤ为１．４８％ （ｎ＝６）。结论：该方法操作简便，结果稳定
可靠，重现性好，为建立宫血宁分散片的质量标准提供了良好的理论依据。
关键词：ＨＰＬＣ；宫血宁分散片；重楼皂苷Ｉ
中图分类号：Ｒ２８４　　　文献标识码：Ａ　　　文章编号：１６７３－２１９７（２０１１）０３－００２４－０２
收稿日期：２０１０－１２－１８
作者简介：徐龙（１９６３－），男，宜丰县人民医院药剂师，研究方向为医院药学。
　　宫血宁分散片由重楼经加工制成，是由我国中药部颁
标准第１８册收载的宫血宁胶囊［１］改变剂型而得。分散片又
称水分散片（Ｗａｔｅｒ　Ｄｉｓｐｅｒｓｉｂｌｅ　Ｔａｂｌｅｔｓ），具有多种优良性
能，其制备工艺和普通片剂相同，对生产设备无特殊要求。
分散片兼具口服片剂和口服液体制剂的优点，稳定性好，便
于携带且服用方便等，具有分散度高、溶出速度快、吸收快、
生物利用度高、不良反应少等特点。临床上主要用于凉血、
收涩止血，用于崩漏止血、月经过多、产后或流产后宫缩不
良、出血及子宫功能性出血属血热妄行证者的治疗［２］。
１　仪器与试剂
Ｗａｔｅｒｓ高效液相色谱仪（型号为５１５泵，９９６光电二极
管矩阵检测器，７７２５进样阀，Ｗａｔｅｒｓ－色谱工作站）；Ｗａｔｅｒｓ
Ｓｙｍｍｅｔｒｙ　ＳｈｉｅｌｄＴＭＲＰ１８柱；Ｓａｒｔｏｒｉｕｓ　ＢＳ１２４Ｓ电子分析天
平；ＳＫ５２１０ＬＨＣ型双频数显超声机（功率：２００Ｗ，频率：
４０ＫＨｚ，上海科导超声仪器有限公司）。乙腈色谱纯（上海
陆忠试剂厂）。其他试剂均为分析纯，甲醇为色谱纯，水为
重蒸馏水。宫血宁分散片（自制，批号：２００８０４０１、２００８０４０５、
２００８０４１０）；重楼皂苷Ｉ（中国药品生物制品检定所，批号：
１１２５８０－２００４０２）。
２　实验方法
用高效液相色谱法测定本品中重楼皂苷Ｉ的含量［３－５］。
２．１　高效液相色谱测定条件
Ｗａｔｅｒｓ　Ｓｙｍｍｅｔｒｙ　ＳｈｉｅｌｄＴＭＲＰ１８柱（２００ｍｍ×４．６ｍｍ，
５μｍ）；流动相：乙腈－水（４１∶５９）；检测波长２０３ｎｍ；流速：
ｌｍＬ／ｍｉｎ。
２．２　对照品溶液的制备
精密称取重楼皂苷Ｉ对照品适量，加适当甲醇溶解，使
每毫升溶液含０．５ｍｇ重楼皂苷Ｉ，为对照品溶液

。
图２　白茅根药材高效液相色谱
报道，但文献中白茅根样品的制备提取方法均为有机溶剂
甲醇超声提取，这与临床上采用的水煎煮方法制备的样品
化学成分及含量有很大差异。本课题在临床科研中使用的
是符合临床用药传统的白茅根水提物，建立了测定绿原酸
含量的 ＨＰＬＣ检测方法，本方法样品处理过程简单，ＨＰＬＣ
色谱峰分离度良好，该法灵敏、稳定，为有效控制白茅根的
质量提供了新的依据。
参考文献：
［１］　中华人民共和国药典委员会．中华人民共和国药典［Ｍ］．一
部．北京：化学工业出版社，２０００：２５６．
［２］　江苏新医学院．中药大辞典［Ｍ］．上海：上海科技出版社，
１９７７：２５．
［３］　冯丽华，江丰，汪玢．ＨＰＬＣ法测定白茅根中绿原酸的含量
［Ｊ］．江西化工，２００５，２１（７）：１０４．
（责任编辑：姜付平）
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