全 文 ：2016，35(2) 河南大学学报(医学版) ·89·
文章编号:1672－7606(2016)02－0089－03
菝葜体外抗肝癌细胞活性物质筛选
吴先闯1，宋卫中2，宋晓勇1，康文艺2，侯彦涛3，张永州1，张晓坚4，张凌云1，卢 红1，刘瑜新1
1． 河南大学 淮河医院，河南 开封 475001;2． 河南大学 中药研究所，河南 开封 475004;3． 河南省医药学校，河南 开封
475003;4． 郑州大学 第一附属医院，郑州 450052
摘 要:〔目的〕筛选菝葜抗肝癌细胞的活性物质，为临床应用菝葜辅助治疗肝癌提供实验依据。〔方法〕采用不同工
艺制备菝葜提取物，将菝葜提取分离为乙醇粗提物、石油醚部位、乙酸乙酯部位、正丁醇部位，利用 MTT法检测 4种物质
部位对肝癌细胞 H22、HepG-2、BEL-7402的体外生长抑制。〔结果〕从菝葜分离提取的 4种物质部位均有不同程度抗肝
癌细胞活性，其中乙酸乙酯部位抗肝癌细胞增殖活性最强，并在浓度范围内呈现良好的量效关系。〔结论〕乙酸乙酯部
位为菝葜主要抗肝癌细胞活性物质。
关键词:菝葜;肝癌细胞;乙醇提取物;乙酸乙酯部位
中图分类号:Ｒ979．1 文献标志码:A
收稿日期:2016－02－17
基金项目:河南省科技发展计划项目(144300510019)
作者简介:作者简介:吴先闯(1985－)，男，河南开封人，硕士，主管药师，从事临床药学研究工作。
通信作者:宋晓勇(1972－)，男，河南开封人，主任药师，教授，从事临床药学教学与科研工作。
Screening of anti-HCC Components from Ｒhizomes of Smilax china L． in
vitro
WU Xianchuang1，SONG Weizhong2，SONG Xiaoyong1，KANG Wenyi2，HOU Yantao3，ZHANG
Yongzhou1，Zhang Xiaojian4，ZHANG Lingyun1，LU Hong1，LIU Yuxin1
1． Huaihe Hospital of Henan University， Henan Kaifeng 475001， China; 2． The Institute of Traditional Chinese Medicine， Henan
University， Henan Kaifeng 475004， China; 3． Henan Fharmaceutical School， Henan Kaifeng 475003， China; 4． The First Affiliated
Hospital of Zhengzhou University， Zhengzhou 450052， China
Abstract:〔Objective〕To Screen anti-HCC active components from the rhizomes of Smilax china L． and provide experimental
basis for clinical application treatment of liver cancer．〔Methods〕Ethanol crude extracts， petroleum extracts， ethyl acetate
extracts and n-butylalcohol extracts were extracted and separated from Smilax china L． by using solvent method． The survival rates
of H22、HepG-2、BEL-7402 were measured by MTT．〔Ｒesults〕All the extracts had different anti-HCC activities tannins showed
the best activity against H22、HepG-2、BEL-7402 cells and presented good dose-effect relationship．〔Conclusion〕Ethyl acetate
extracts are the main anti-HCC ingredients of the rhizomes of Smilax china L．
Key words: Smilax china L．; hepatoma carcinoma cell; ethanol crude extracts; ethyl acetate extracts
肝癌是一种十分常见的恶性消化道肿瘤，其病
死率高、危害性大，已经位居世界肿瘤性疾病的第 3
位，且有逐年升高的趋势［1］。大多数病例在确诊时
肝功能储备已很差，化疗药的细胞毒性会进一步损
害正常肝细胞，使肝脏功能进一步恶化。因此，寻找
和开发高效低毒的抗肝癌药物具有十分重要的意
义。菝葜(Smilax china L．)为百合科菝葜属植物，又
名铁菱角、金刚藤、王瓜草、金刚树，性平，味甘酸，其
根、茎、叶均可入药，尤以根茎入药最为常见。该中
药收载于《中国药典》2015 版一部，具有利湿去浊、
祛风除痹、解毒散瘀的功能［2］。民间常用于风湿性
关节痛及恶性肿瘤(如食管癌、胃癌、直肠癌、乳腺
DOI:10.15991/j.cnki.41-1361/r.2016.02.004
·90· Journal of Henan University(Medical Science) 2016，35(2)
癌、宫颈癌等)的治疗。菝葜是中医临床治疗肿瘤
疾患的常用配伍组方药味。有人［3-6］报道菝葜的黄
酮类、鞣质类成分具体外抗肺癌作用，菝葜皂苷及乙
酸乙酯提取物具有抗肿瘤作用，菝葜的醋酸乙酯部
位在抗炎和抗肿瘤方面有着独特的疗效［7］。其乙
醇提取物的各萃取部位抗肝癌生物活性尚未见文献
报道。我们采用乙醇提取，经石油醚、乙酸乙酯、正
丁醇萃取后得到 3 个化学部位，观察菝葜乙醇提取
液及 3个化学部位抗肝癌活性，探讨菝葜抗肝癌的
单一活性部位，从而使有效物质富集度高，药效物质
相对明确，药理活性相对稳定，为进一步利用菝葜抗
肝癌提供实验数据。
1 材料
1．1 药材与试剂
中药菝葜购于开封市天济堂药店，经河南大学
药学院中药鉴定学丛悦教授鉴定为百合科植物菝葜
(Smilax china L．)的根茎。
ＲPMI1640 培养基(美国 Gibco-BＲL 公司)，胎
牛血清(天津市源洋生物制品科技有限责任公司)，
0． 25% 胰蛋白酶(美国 Gibco 公司)，二甲基亚砜
(DMSO)(美国 Sigma-Aldrich 公司)，3-(4，5二甲基
噻唑-2)-2，5-二苯基四氮唑溴盐 (MTT，美国
Ameresco)。其余试剂均为分析纯。
1．2 细胞株
小鼠肝癌 H22细胞由河南大学药学院提供，体
内接种传代保存。人肝癌 BEL-7402、H epG2 细胞
株(美国 ATCC 公司)，在含体积分数为 10%的胎牛
血清的 ＲPMI 1640培养液中培养，其内加入青霉素
(100 μmol /L)、链霉素(100 μmol /L)，置于体积分
数为 5%的 CO2 饱和湿度培养箱内培养，2．5 g /L 胰
酶消化传代。
1．3 仪器
CO2 恒温培养箱(Sanyo Forma，日本);HDL 洁
净台(北京东联哈尔仪器制造有限公司);UV-2000
型紫外-可见光分光光度计(上海尤尼柯仪器有限公
司);LGＲ16-W 型高速冷冻离心机(北京京立离心
机有限公司);800 型酶标仪(Bio-Tek);Forma 3110
CO2培养箱;96 孔细胞培养板(美国 Costar 公司);
XDS-500D 型倒置荧光显微镜(上海蔡康光学仪器
有限公司)。
2 方法
2．1 供试药物的制备
取中药菝葜干燥根茎，分别用 10倍量体积分数
为 65%的乙醇热回流提取 3次，每次提取 1 h，过滤，
收集提取液;药渣再用 10倍量体积分数为 50%的乙
醇热回流提取 3 次，每次提取 0．5 h，过滤，收集滤
液;将 2次不同浓度的乙醇提取液合并，减压回收溶
剂，浓缩至浸膏状，得菝葜乙醇总提物。用适量热蒸
馏水将菝葜乙醇总提物浸膏进行分散，依次用等体
积石油醚、乙酸乙酯和水饱和正丁醇萃取 3～ 5 次并
减压回收每个萃取部位溶剂，浓缩后分别得石油醚
部位、乙酸乙酯部位、正丁醇部位。
将乙醇总提物、石油醚部位、乙酸乙酯部位、正
丁醇部位溶解于 DMSO，然后用含体积分数为 10%
的胎牛血清的 ＲPMI-1640 培养基稀释成相应浓度，
备用。
2．2 供试品对体外培养肿瘤细胞生长的影响
小鼠肝癌 H22 细胞体内接种传代。人肝癌
BEL-7402、HepG-2细胞均为贴壁细胞，将复苏好的
细胞置于含体积分数为 10%的胎牛血清、10 万 U /L
的青霉素、100 mg /L的链霉素的 ＲPMI-1640 培养基
中，在温度为 37 ℃、相对湿度为 95%、体积分数为
5%的 CO2 培养箱中培养，每日观察细胞生长情况。
BEL-7402和 HepG-2细胞 3～4 d传代 1次。
取接种肿瘤 7 d 后且生长良好的 H22肝癌腹水
型荷瘤小鼠，将其颈椎脱臼处死，在无菌条件下抽取
乳白色腹水，细胞经 PBS 液洗涤 2 次(1 000 r /min，
5 min)，调整细胞数 5×104 个 /mL;同时取对数生长
期的 HepG-2、BEL-7402 细胞用0．25%胰酶消化，调
整细胞数 5×104 个 /mL。将上述 3 种细胞以每孔
100 μL接种于 96 孔板中。培养 24 h，待细胞贴壁
后，吸弃上清液，于上述 96 孔板中加入不同浓度的
待测样品液 100 μL(使终质量浓度分别为 10 mg /L、
25 mg /L、50 mg /L、100 mg /L、200 mg /L)，每个浓度
平行 6 个复孔。以 0．1%的 DMSO 作空白于 37 ℃、
体积分数为 5%的 CO2 培养箱中培养，48 h 后除去
培养基，加含 MTT0．5 g /L的 PBS每孔 100 μL，继续
培养 4 h 后除去孔内的液体，加入 DMSO 每孔 10
μL，震荡 10 min，在酶标仪上 570 nm处测吸光度 A。
则
抑制率 =
A不加药组 － A加药组
A不加药物组
× 100%。
2．3 数据处理
所有数据用 SPSS 16．0 软件包进行处理，数据
以 珋x ± s表示，对所得计数资料进行方差分析、组间
比较用 t检验。P ＜ 0．05为有统计学意义。
3 结果
菝葜提取物对 H22、HepG－2、BEL－7402三种细
2016，35(2) 河南大学学报(医学版) ·91·
胞生长的影响与对照组比较，菝葜乙酸乙酯部位组
抑制肝癌细胞的存活率最强，菝葜乙酸乙酯部位抗
肝癌细胞活性优于其乙醇粗提物和石油醚及正丁醇
部位，并具计量效应关系，见图 1。
图 1 菝葜不同萃取部位对 3种肝癌细胞增殖抑制的影响
4 讨论
菝葜具有多方面的生物活性，其有效成分具有
抗炎镇痛、活血化瘀、免疫抑制、抗氧化和抗肿瘤等
多种药理作用［8］。我们通过对菝葜进行乙醇提取，
然后利用不同溶剂进行萃取，得到菝葜乙醇总提物、
石油醚部位、乙酸乙酯部位、正丁醇部位。选取小鼠
肝癌细胞 H22 和人肝癌细胞 HepG-2、BEL-7402 为
实验用细胞株，采用 MTT法测定菝葜醇提物及各萃
取部位对 3种肝癌细胞的活性影响，比较了菝葜不
同部位对 3种肝癌细胞的抑制活性作用强弱。研究
结果表明，菝葜乙酸乙酯部位对 3 种肝癌细胞抑制
活性最强，且在浓度范围内呈现良好的量效关系，说
明菝葜醇提物的乙酸乙酯部位具有良好的体外抗肝
癌细胞活性，为进一步诠释菝葜治疗肝癌的物质基
础提供实验依据。
参考文献:
［1］Kanda T，Jiang X，Yokosuka O． Androgen receptor signa-
ling in hepatocellular carcinoma and pancreatic cancers［J］．
World J Gastroenterol，2014，20(28):9229－9236．
［2］国家药典委员会． 中国药典:一部［M］． 北京:中国医药
科技出版社，2015:290．
［3］Wu Lisheng，Wang Xiaojing，Jia Aiqun． Cytotoxic polyphe-
nols against breast tumor cell in Smilax china L．［J］． J Eth-
nopharmacol，2010(130):460－464．
［4］邱千，戴琪，陈树和，等． 菝葜体外抗非小细胞肺癌细胞
活性物质研究［J］． 中国现代中药，2014，16(1):12－20．
［5］徐燕，王海燕，蒋家月，等． 菝葜中的甾体皂苷及其细胞
毒活性［J］． 中国实验方剂学杂志，2011，17(11):92－
96．
［6］王涛，王鹏．菝葜乙酸乙酯提取物抗癌活性的实验研究
［J］． 肿瘤基础及临床，2007，20(3):234－236．
［7］赵钟祥，冯育林，阮金兰，等． 菝葜化学成分及其抗氧化
活性的研究［J］． 中草药，2008，39(7):975－977．
［8］罗艳琴，马云，宋路瑶，等． 菝葜有效成分及其药理作用
研究概述［J］． 中药材，2013，36(3):502－504．
［责任编辑 李武营］