全 文 ：肝脏病理学显示重度组为重度 NAFLD 改变，轻度组为
轻 ～中度 NAFLD改变，对照组肝脏形态正常。肝脏 CT与肝组
织 H2S浓度对比分析发现:脂肪肝程度加重与肝脏 CT值、肝组
织 H2S浓度下降有关。
脂肪肝的影像学诊断指标中，彩色超声检查诊断 NAFLD
的敏感性、特异性均不高，且不能量化脂肪肝的程度;MRI 在脂
肪肝的诊断中也存在敏感性、特异性不高的问题;肝脏 CT 是脂
肪肝诊断最佳指标的观念已得到医学界的公认，脂肪肝时随脂
肪肝程度的加重肝脏 CT值下降。
肝脏是体内 H2S生成的主要部位，对维持循环血液中 H2S
的浓度起到重要作用，而 H2S在调节正常及肝硬化的微循环中
的作用也已被证实〔7〕。NAFLD 导致肝血管重构使肝组织缺血
缺氧，内源性 H2S 作为气体信号分子首先被消耗，从而导致肝
组织 H2S水平下降，且与 NAFLD程度成反比。笔者认为，肝脏
CT值下降程度可以作为肝组织 H2S 浓度的间接量化指标，指
导 NAFLD的治疗。
4 参考文献
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〔2010-09-25 收稿 2010-11-17 修回〕
(编辑 徐 杰)
五脉绿绒蒿总黄酮及其中苜蓿素的体外抗氧化活性
王志旺 张 扬 程 芳 郭 玫 马 骏 (甘肃中医学院，甘肃 兰州 730000)
〔摘 要〕 目的 研究五脉绿绒蒿总黄酮和苜蓿素的体外抗氧化作用。方法 采用体外实验研究五脉绿绒蒿总黄酮与不同剂量苜蓿素的化学抗
氧化作用(包括对羟基自由基和超氧阴离子的清除作用)以及动物组织抗氧化作用(包括对大鼠肝匀浆脂质过氧化的抑制作用和对 H2O2 诱导的红细胞
氧化溶血的保护作用)。结果 五脉绿绒蒿总黄酮和苜蓿素可清除羟基自由基与超氧阴离子;抑制大鼠肝匀浆自发性与 VitC-Fe2 +诱导性脂质过氧化产
物丙二醛(MDA)的生成;减少 H2O2 诱导的红细胞氧化溶血。结论 五脉绿绒蒿总黄酮和苜蓿素具有清除自由基及抗脂质过氧化的作用。
〔关键词〕 五脉绿绒蒿总黄酮;苜蓿素;抗氧化;自由基
〔中图分类号〕 R931. 6 〔文献标识码〕 A 〔文章编号〕 1005-9202(2011)22-4381-03;doi:10. 3969 / j. issn. 1005-9202. 2011. 22. 041
Study on ant-oxidative activity of total flavones of radix angelicae sinensis and tricin in vitro
WANG Zhi-Wang，ZHANG Yang，CHENG Fang，et al.
Gansu College of TCM，Lanzhou 730000，Gansu，China
【Abstract】 Objective To study on anti-oxidative activity of total flavones of radix angelicae sinensis and tricin in vitro. Methods
Anti-oxidative activities of chemistry (oxygen radicals)and of mammal fabric (rat liver and red blood cells)were adopted to observe the ant-
oxidative effects of total flavones of radix angelicae sinensis and tricin in vitro. Results Total flavones of radix angelicae sinensis and tricin
exhibited an inhibitory effect on the hydroxyl free radical and superoxide an ion free radical showing antioxidant activity in homogenates of the
rat liver. The haemolysis of rat red blood cells on H2O2-induced was blocked by total flavones of radix angelicae sinensis and tricin (P ＜
0. 05). Conclusions Total flavones of radix angelicae sinensis and tricin show antioxidant activity in experiments in vitro.
【Key words】 Total flavones of radix angelicae sinensis;Tricin;Anti-oxidative activity in vitro;Free radicals
基金项目:甘肃省教育厅基金项目(0706-02)
通讯作者:郭 玫(1963-) ，女，教授，硕士，主要从事中药有效成分及质
量标准研究。
第一作者:王志旺(1970-) ，男，硕士，副教授，主要从事中药药理与分子
生物学研究。
罂粟科绿绒蒿属植物是藏医传统用药，具有清热解毒、止
痛利尿等功效，临床用于治疗头痛、肝炎、肺炎、水肿等病症〔1〕，
而藏医药以五脉绿绒蒿为其正品，在 30 多个藏药复方中配伍
使用。本课题组前期研究显示五脉绿绒蒿总黄酮具有明显的
抗炎、镇痛等作用〔2〕。为进一步研究五脉绿绒蒿的药理作用机
制，本实验分别设计了五脉绿绒蒿总黄酮及其中指标性成分苜
蓿素的化学抗氧化与动物组织体外抗氧化实验，以验证五脉绿
绒蒿总黄酮和苜蓿素的抗氧化功能。
1 材料与方法
1. 1 实验材料 Wistar 大鼠，雄性，体重(200 ± 20)g，由甘肃
·1834·王志旺等 五脉绿绒蒿总黄酮及其中苜蓿素的体外抗氧化活性 第 22 期
中医学院 SPF 级动物实验中心提供，实验动物质量合格证
SCXK(甘)2004-0006;三氯乙酸(TCA)、2-硫代巴比妥酸
(TBA)、硫酸亚铁、过氧化氢等均为市售分析纯试剂;VIS7220
型分光光度计(北京第二光学分析仪器厂)、BS110S型 Sartorius
电子天平(北京赛多利斯天平有限公司)、DZKW电子恒温水浴
锅(北京永光明医疗仪器厂)、低温离心机(北京医用离心
机厂)。
1. 2 实验方法
1. 2. 1 五脉绿绒蒿总黄酮及苜蓿素的制备 称取藏药五脉绿
绒蒿药材粗粉适量，用 95%乙醇回流提取，减压回收乙醇后加
入石油醚以除去脂溶性较强的杂质，残留物用 1 mol /L HCl 溶
液溶解，调 pH值至 2 ～ 3，过滤，残留物部分即为黄酮类粗品。
将上述黄酮粗品用 1 mol /L NaOH溶液溶解，调 pH值至 9 ～ 10，
过滤，碱水层再用 1 mol /L HCl溶液调 pH值至 2 ～ 3，用乙酸乙
酯萃取数次，合并乙酸乙酯，减压浓缩即得五脉绿绒蒿总黄酮。
将上述所得五脉绿绒蒿总黄酮上硅胶柱，氯仿-丙酮(10∶ 1)洗
脱流分分别用石油醚-乙酸乙酯(2∶ 1)进行硅胶柱层析和氯仿-
甲醇(1 ∶ 1)进行聚酰胺柱层析，得一化合物，经 ESI-MS、1H-
NMR、13 C-NMR 和 DEPT 图谱数据分析确定该化合物为苜蓿
素。精密称取上述五脉绿绒蒿总黄酮 100. 0 mg、苜蓿素
10. 0 mg，分别用少量乙醇溶解，加双蒸水稀释、定容至 100 ml，
即得 1. 0 mg /ml五脉绿绒蒿总黄酮溶液和 100 μg /ml苜蓿素溶
液，冷藏备用。
1. 2. 2 样品的制备
1. 2. 2. 1 肝匀浆制备 大鼠禁食 12 h 后，脱颈椎致死，迅速
取出肝脏，4℃生理盐水中反复漂洗，洗净表面残血并剔除脂肪
及结缔组织，滤纸吸干多余水分，称重，用 pH 7. 4 的 9 倍量冷
生理盐水制成 10%的肝匀浆，4℃冷藏待用。
1. 2. 2. 2 红细胞悬浮液的制备 大鼠眼眶取血，肝素抗凝后
4℃ 3 000 r /min离心 10 min，移弃上清液，用生理盐水洗涤沉
淀红细胞 3 次，制成 0. 5%红细胞悬液，置 4℃冰箱保存待用。
1. 2. 3 五脉绿绒蒿总黄酮和苜蓿素对·OH 清除效果的测定
根据 Smirnoff的方法改进〔3〕。4 ml 反应体系(1 mmoL /L Fe-
SO4、9 mmoL /L水杨酸和 113. 34 mmoL /L H2O2 各 1. 0 ml)中包
括 1. 0 ml五脉绿绒蒿总黄酮或不同浓度的苜蓿素在 37℃反应
30 min，紫外分光光度计测定 510 nm处 OD值。其中空白反应
管以双蒸水代替药液、空白对照管以双蒸水代替药液和 FeSO4、
给药对照管以双蒸水代替 FeSO4 进行实验。
1. 2. 4 五脉绿绒蒿总黄酮和苜蓿素对超氧阴离子清除效果的
测定〔4〕 采用改进的邻苯三酚法，即在碱性条件下邻苯三酚可
以自氧化而产生超氧阴离子自由基，并生成有色中间产物，在
325 nm处有最大吸收峰。实验中每支试管加 Tris-HCl 缓冲液
(pH8. 2)4. 5 ml，25℃预热 20 min，加 1. 0 ml 五脉绿绒蒿总黄
酮或不同浓度的苜蓿素溶液，再加 1 mmol /L 的邻苯三酚
0. 4 ml，立即摇匀，准确反应 4 min 后立即加入 8 mol /L HCl
0. 1 ml终止反应，325 nm测吸光值。其中空白反应管以双蒸水
代替药液、空白对照管以双蒸水代替药液和邻苯三酚、给药对
照管以双蒸水代替邻苯三酚进行实验。
1. 2. 5 五脉绿绒蒿总黄酮和苜蓿素对大鼠肝匀浆自发性脂质
过氧化产物丙二醛(MDA)的影响〔5，6〕 取 1. 2. 2. 1 项下 10%
肝匀浆 1. 0 ml于试管中，各加入 1. 0 ml 五脉绿绒蒿总黄酮或
不同浓度苜蓿素溶液，在 37℃水浴恒温振荡 1. 5 h，取出后加入
10% TCA 2. 0 ml终止反应，5 min后加入 0. 67% TBA 1. 0 ml，振
荡混匀，沸水浴中显色 15 min，流水冷却，经 3 500 r /min 离心
5 min除去沉淀，取上清液在 532 nm 处测定吸光度(OD) ，其中
对照管以双蒸水代替药液，底色管以双蒸水代替 TBA
进行实验。
1. 2. 6 五脉绿绒蒿总黄酮和苜蓿素对 VitC-Fe2 +诱导的大鼠
肝匀浆脂质过氧化的影响〔5，6〕 取 1. 2. 2. 1 项下 10%肝匀浆
1. 0 ml于试管中，各加入 1. 0 ml五脉绿绒蒿总黄酮或不同浓度
的苜蓿素溶液、VitC (1 mmol /L)0. 05 ml 及 FeSO4·7H2O
(1 mmol /L)0. 05 ml，其余操作和计算方法与 1. 2. 5 项下相同。
1. 2. 7 五脉绿绒蒿总黄酮和苜蓿素对大鼠红细胞氧化溶血的
影响〔7〕 取 1. 2. 2. 2 项下 0. 5% 红细胞悬液 1. 0 ml，加入
1. 0 ml五脉绿绒蒿总黄酮或不同浓度的苜蓿素(用生理盐水配
制) ，最后加 50 mmol /L H2O2 0. 5 ml 混匀，37℃温浴 1 h，加生
理盐水 2. 5 ml，3 000 r /min 离心 5 min，取上清于 415 nm 测定
其吸光值(OD)。其中空白反应管以生理盐水代替药液、空白
对照管以生理盐水代替药液与 H2O2、给药对照管以生理盐水
代替 H2O2 进行实验。以空白管为 100%溶血来计算溶血度。
1. 3 统计学分析 实验数据用 x ± s表示，组间比较采用单因
素方差分析，应用 SPSS11. 5 统计软件进行统计处理。
2 结 果
2. 1 五脉绿绒蒿总黄酮和苜蓿素对·OH 清除效果的测定
表 1 结果显示，五脉绿绒蒿总黄酮和苜蓿素能显著清除 Fenton
反应体系中产生的·OH(P ＜ 0. 05) ，且苜蓿素不同剂量组
(3. 1 ～ 25. 0 μg /ml)清除作用呈一定的量效关系，最大清除率
为 17. 4%。
表 1 五脉绿绒蒿总黄酮和苜蓿素对·OH
清除效果的测定(x ± s，n =10)
组别
终浓度
(μg /ml)
OD值
(A反应-A对照)
抑制率
(%)
对照组 － 0. 638 ± 0. 060 －
五脉绿绒蒿总黄酮组 250 0. 576 ± 0. 0391) 9. 7
苜蓿素组 3. 1 0. 604 ± 0. 053 6. 7
6. 3 0. 581 ± 0. 0361) 8. 9
12. 5 0. 559 ± 0. 0372)3) 11. 6
25. 0 0. 527 ± 0. 0352)4) 17. 4
与对照组比较:1)P ＜ 0. 05，2)P ＜ 0. 01;与苜蓿素小剂量组比较:3)
P ＜ 0. 05，4)P ＜ 0. 01;下表同
2. 2 五脉绿绒蒿总黄酮和苜蓿素对超氧阴离子清除效果的测
定 五脉绿绒蒿总黄酮和苜蓿素对超氧阴离子的清除有显著
的加速作用(P ＜ 0. 01) ，1. 7 ～ 13. 3 μg /ml 浓度范围的苜蓿素
对超氧阴离子的清除有一定的量效关系(表 2)。
·2834· 中国老年学杂志 2011 年 11 月第 31 卷
表 2 五脉绿绒蒿总黄酮和苜蓿素对超氧阴离子
清除效果的测定(x ± s，n =10)
组别
终浓度
(μg /ml)
OD值
(A反应-A对照)
抑制率
(%)
对照组 － 0. 409 ± 0. 037 －
五脉绿绒蒿总黄酮组 100 0. 283 ± 0. 0292) 30. 8
苜蓿素组 1. 7 0. 327 ± 0. 0342) 20. 0
3. 3 0. 295 ± 0. 0312)3) 27. 9
6. 7 0. 271 ± 0. 0262)4) 33. 7
13. 3 0. 238 ± 0. 0232)4) 41. 8
2. 3 五脉绿绒蒿总黄酮和苜蓿素对大鼠肝匀浆自发性脂质过
氧化的影响 由于 MDA 是脂质过氧化的主要产物，其含量是
衡量脂质过氧化程度的一个重要指标。由表 3 可以看出，五脉
绿绒蒿总黄酮和苜蓿素对肝匀浆自发性脂质过氧化物 MDA的
生成有一定的抑制作用，与对照组比较有统计学意义(P ＜
0. 05)。
表 3 五脉绿绒蒿总黄酮和苜蓿素对大鼠肝匀浆
自发性脂质过氧化的影响(x ± s，n =10)
组别 终浓度(μg /ml) A532 nm 抑制率(%)
对照组 － 0. 103 ± 0. 032 －
五脉绿绒蒿总黄酮组 12. 5 0. 062 ± 0. 0152) 39. 8
苜蓿素组 0. 31 0. 083 ± 0. 024 19. 4
0. 63 0. 074 ± 0. 0281) 28. 2
1. 25 0. 070 ± 0. 0261) 32. 0
2. 50 0. 065 ± 0. 0192) 36. 9
2. 4 五脉绿绒蒿总黄酮和苜蓿素对 VitC-Fe2 +诱导的大鼠肝
匀浆脂质过氧化的影响 由表 4 可以看出，五脉绿绒蒿总黄酮
及苜蓿素能明显抑制 VitC-Fe2 +诱导的肝匀浆脂质过氧化产物
MDA的生成(P ＜ 0. 05) ;随着反应体系中苜蓿素浓度的增加
(12. 5 ～ 100 μg /ml) ，对肝匀浆诱导性氧化的抑制作用增强且
存在一定的量效关系。
表 4 五脉绿绒蒿总黄酮和苜蓿素对 VitC-Fe2 +诱导的
大鼠肝匀浆脂质过氧化的影响 (x ± s，n =10)
组别 终浓度(μg /ml) A532 nm 抑制率(%)
对照组 － 0. 728 ± 0. 190 －
五脉绿绒蒿总黄酮组 200 0. 531 ± 0. 1291) 27. 1
苜蓿素组 12. 5 0. 565 ± 0. 1101) 22. 4
25 0. 397 ± 0. 1262)4) 45. 5
50 0. 229 ± 0. 0522)4) 68. 5
100 0. 112 ± 0. 0372)4) 84. 6
2. 5 五脉绿绒蒿总黄酮和苜蓿素对大鼠红细胞氧化溶血的影
响 H2O2 为强氧化剂，因破坏红细胞膜而导致溶血，本实验观
察了五脉绿绒蒿总黄酮与苜蓿素对 H2O2 诱导的红细胞氧化溶
血的影响，表 5结果显示五脉绿绒蒿总黄酮和苜蓿素对 H2O2 诱
导的红细胞溶血具有明显的抑制效果(P ＜0. 05) ，苜蓿素不同剂
量组(0. 15 ～1. 20 μg /ml)的抑制作用呈现一定的量效关系。
表 5 五脉绿绒蒿总黄酮和苜蓿素对大鼠红细胞
氧化溶血的影响(x ± s，n =10)
组别
终浓度
(μg /ml)
OD值
(A反应-A对照)
溶血度
(%)
对照组 － 0. 582 ± 0. 127 100
五脉绿绒蒿总黄酮组 6. 25 0. 417 ± 0. 0852) 71. 6
苜蓿素组 0. 15 0. 524 ± 0. 095 90. 0
0. 30 0. 469 ± 0. 0871) 80. 6
0. 60 0. 383 ± 0. 0832)4) 65. 8
1. 20 0. 295 ± 0. 0692)4) 50. 7
3 讨 论
自由基参与机体多种生理病理过程，从疾病谱来看，机体
自由基水平过高是多种疾病特别是老年性疾病的主要病理之
一，因此，医药界一直在不断探索保护生物膜与生物大分子的
途径、利用抗氧化剂来清除活性自由基，阻止自由基对机体的
氧化损伤，而作为天然抗氧化剂的黄酮类化合物是该领域的研
究热点〔8〕。藏药五脉绿绒蒿是藏医治疗肝炎、肺炎等多种炎症
性疾病的常用药，前期研究结果显示五脉绿绒蒿总黄酮具有明
显的抗炎、保肝作用〔2，9〕。本实验探讨了五脉绿绒蒿总黄酮及
其指标性成分苜蓿素对化学氧化体系和体外生物组织氧化体
系的影响，实验数据表明五脉绿绒蒿总黄酮与不同剂量的苜蓿
素可清除羟基自由基与超氧阴离子、抑制肝组织 MDA的生成、
抵抗红细胞的氧化溶血。实验结果显示五脉绿绒蒿总黄酮与
苜蓿素具有清除自由基以及抗脂质过氧化的作用，本实验为进
一步研究防治与自由基有关疾病的药物提供了实验依据。
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〔2011-03-01 收稿 2011-05-10 修回〕
(编辑 曹梦园)
·3834·王志旺等 五脉绿绒蒿总黄酮及其中苜蓿素的体外抗氧化活性 第 22 期