全 文 ：中国药物警戒第 8卷第 10期 2011年 10月 October, 2011, Vol.8, No.10
HPLC 法测定东北铁线莲中白头翁素的含量
张海丰 1 孙健 2 滕坤 1 （1通化师范学院，吉林通化 134000；2中国中医科学院医学实验中心，北京 100700）
中图分类号：R927.2 文献标识码：A 文章编号：1672- 8629（2011）10- 0585- 02
基金项目：白头翁素抗肝癌的物质基础与活性研究，吉教科合字
[2009]第 268号。
作者简介：张海丰，男，博士，中药化学与新药基础研究。
摘要：目的建立东北铁线莲中白头翁素高效液相色谱法的测定方法。方法采用 Agilent XDB- C18色谱柱(250mm×
4.6mm，5μm)，以甲醇 - 水（40：60）为流动相，流速：0.8mL·min-1，柱温为室温，检测波长为 220nm。结果白头翁素在
5.45～109μg·mL-1范围内线性关系良好，r=0.9993，平均加样回收率为 102.41%，RSD为 2.78%（n=6）。结论该方法
操作简单，灵敏，重现性好，可以用来测定东北铁线莲中白头翁素的含量。
关键词：东北铁线莲；高效液相色谱法；白头翁素
Determination of the Contents of Anemonin in Clematis mandshurica Rupr by HPLC
ZHANG Hai-feng1 SUN Jian2 TENG Kun1 (1Tonghua Normal University,Jilin Tonghua, 134000, China; 2Ex－
perimental Research Center, China Academy of Chinese Medical Sciences, Beijing 100700, China)
Abstract: Objective To establish a HPLC method for the determination of anemonin in Clematis mandshurica
Rupr. Methods Agilent XDB C18(4.6 mm×250 mm, 5μm) column was applied,using. methanol-water(40：60) as
mobile phase with the rate of 0.8mL·min -1. The column temperature was room temperature and the detective
wavelength was 220 nm. Results A good linearity was obtained over the range of 5.45～109μg·mL-1 for anemonin
(r=0.9993). The average recovery (n=6) was 102.41%(RSD=2.78%). Conclus ion The method is simple, sensitive,
good reproducibility and used as the determination of Anemonin in Clematis mandshurica Rupr.
Key words : Clematis mandshurica Rupr; HPLC; anemonin
μ
东北铁线莲（Clematis manchurica Rupr），别名辣蓼
铁线莲、山辣椒秧子，是毛茛科铁线莲属多年生草本植
物，分布于我国东北、山东、山西、河北，朝鲜、内蒙古东
部、俄罗斯远东地区也有分布，是中药威灵仙的主要来
源之一[1]。具有通络止痛、祛风除湿的功效，用于肢体麻
木、风湿痹痛、屈伸不利、筋脉拘挛及骨哽咽喉[2]。生于山
野林边、田埂及路旁，花期 6～8月，果期 7～9月，以条
匀、皮黑、肉白、坚实者为佳[3]。
白头翁素（anemonin又名：银莲花素，白头翁脑）广
泛存在于白头翁、石龙芮和威灵仙等毛茛属药用植物中，
具有抗菌、镇静和镇痛、抗肿瘤等作用，临床曾用于治疗
痢疾及用作镇静、镇痛药等。白头翁素分子量 192.16，熔
点 157～158℃，微溶于冷水，溶于热水、三氯甲烷、热乙
醇、二氯甲烷等溶剂[4]，根据原白头翁素及白头翁素的沸
点较低，其能随蒸汽挥发的性质，舍弃了中药有效成分
提取常用法 - 煎煮法，而用水蒸汽蒸馏法从东北铁线莲
中提取获得白头翁素[5]。本研究拟建立一种简便、快速及
可靠的测定东北铁线莲中白头翁素含量的方法，旨在为
白头翁素的合理开发和应用提供理论基础。
1 仪器与试药
Agilent高效液相色谱仪（美国安捷伦科技公司），可
变波长检测器（VWD），四元梯度泵，Agilent 1100化学工
作站，7725i手动进样器。东北铁线莲，采于通化，经鉴定
为东北铁线莲（Clematis manchurica Rupr）干燥的根及根
茎；白头翁素对照品（北京中医药大学张宏桂老师惠赠，
经面积归一法测定含量 >98%）；甲醇为色谱纯；水为娃
哈哈纯净水；其他试剂均为分析纯。
2 方法与结果
2.1 色谱条件
色谱柱：Agilen XDB- C18 柱（4.6 mm×250 mm×
5μm）；流动相：甲醇 - 水（40:60）；检测波长：220nm；柱
温：室温；流速：0.8 mL·min-1[6]。
2.2 白头翁素对照品的配制
精密称取白头翁素对照品 10.9mg，置 100 mL容量
瓶中，加无水乙醇溶解并稀释至刻度，摇匀，0.22μm滤
膜过滤，制成浓度为 0.109mg·mL-1的对照品溶液，备用。
2.3 供试品溶液的制备
精密称取的东北铁线莲药材粉末 5g，置于 250mL圆
底烧瓶中，加入 150mL蒸馏水加热蒸馏提取至 0.1%高
锰酸钾指示剂不褪色，所得蒸馏液用微孔滤膜（0.22 m)
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图 1 白头翁素 HPLC色谱图
0
50
100
150
200
250
300
400
mAU
350
1 2 3 4 5 6 7 8 9 min0
1
A
0
50
100
150
200
250
300
400
mAU
350
1 2 3 4 5 6 7 8 9 min0
B
1
A：对照品色谱图；B：样品色谱图；1为白头翁素
表 1 样品含量测定结果（n=3）
组分 含量（%） 平均含量（%） RSD%
白头翁素 0.126 0.123 0.35
0.119
0.123
过滤，取续滤液作为样品溶液，备用。
2.4 样品测定
参照“2.1”项下色谱条件，分别精密吸取 20μL 样
品溶液和 5μL白头翁素对照品溶液进高效液相色谱柱
进行高效液相色谱测定，得白头翁素对照品及样品的HPLC
色谱图，在对照品溶液和样品溶液色谱图相应位置上，
有相同的保留时间（图 1）。按外标法以峰面积计算，即得
（表 1）。
2.5 线性关系考察
分别精密吸取白头翁素对照品溶液适量于 10 mL
容量瓶中，用无水乙醇稀释至刻度，配制成白头翁素浓度
分别为 5.45、7.33、10.90、21.8、36.33、54.50、109μg·mL-1
溶液。取上述不同浓度的对照品溶液各 5μL 注入高效
液相色谱仪，记录色谱图并计算白头翁素不同浓度的峰
面积比。以白头翁素的质量浓度 C对 Y进行线性回归，
结果表明 5.45～109μg·mL-1范围内，质量浓度 C与峰面
积比 Y呈线性关系，回归方程如下：
C=17.62Y+0.273，r=0.9993
2.6 精密度试验
精密吸取上述对照品溶液，参照“2.1”项下色谱条
件，重复进样 5次，每次进样 5μL，白头翁素峰面积积
分值的相对标准偏差 RSD为 0.67%，说明精密度良好。
2.7 稳定性试验
参照“2.1”项下色谱条件，取同一份样品溶液分别于
0，2，4，6，8，10，12，14，18，24h进样测定，结果白头翁素
与白头翁素色谱峰面积均无明显改变，RSD为 1.32%，
表明样品溶液稳定性良好。
2.8 加样回收率试验
精密吸取白头翁素对照品溶液（含白头翁素 55μg/mL）
10mL，置于 150mL具塞三角锥瓶中，共 6份，置水浴上
挥去溶剂后，精密加入 6份已知含量的东北铁线莲 0.5g
（白头翁素含量为 0.123%），按上述方法提取、测定，平
均回收率为 102.41%，RSD为 2.78%。
3 讨论
3.1 提取方法的选择
因白头翁素微溶于冷水，溶于热水、三氯甲烷、热乙
醇、二氯甲烷等溶剂，分子量小，故选用水蒸汽直接蒸馏
得到样品，用无水乙醇为对照品溶解溶剂,取得较好的
研究结果。
3.2 波长选择
取白头翁素对照品适量，加无水乙醇制成浓度约
10μg·mL-1的溶液，在 180～350 nm波长范围扫描，测得
白头翁素的最大吸收波长为 220nm。
3.3 色谱方法的建立
因白头翁素的检测波长属于末端吸收，在二元体系
流动相甲醇 - 水（40：60）、流速为 1mL·min-1的条件下
基线不稳定，将流速降为 0.8mL·min-1基线趋于平稳，使
白头翁素得到了良好的分离，HPLC法操作简便，结果准
确，适于东北铁线莲中白头翁素的含量测定与质量控制。
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（收稿日期：2011- 07- 14 编辑：郭述金）
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