全 文 ：HPLC法测定白茅根中绿原酸的含量
冯丽华1 　江 丰2 　汪玢1
(1.江西医学院药学系 , 330006;2.南昌市卫生学校 330006)
摘　要:目的:建立测定白茅根中绿原酸含量的高效液相色谱法。 方法:采用高效液
相色谱法 , C18色谱柱(250×4.6nm , 5μm);流动相:甲醇-0.1%磷酸溶液(89:11), 检测波
长:327nm ,流速:1ml/min。结果:绿原酸的平均回收率为 90.8 , RSD为 1.60(n=6), 结论:此
方法灵敏 ,专属性好 ,重现性好。
关键词:高效液相色谱法　白茅根　绿原酸
　　白茅根为常用的清热凉血中草药 ,用于血热吐血 、
衄血 ,尿血 、热病烦渴 、黄疸 、水肿 、热淋涩痛 , 急性肾炎
水肿[ 1] 。中国药典(2000 版)规定本品为禾木科植物白
茅 Imperata Cylindrica Beauv.var.maior(Nees)C.E.Hubb.
的根茎。而市场上存在其混淆品种较多[ 2] , 为了控制
白茅根药材及其中成药制剂的质量。我们首次建立了
HPLC 法测定白茅根药材中氯原酸的含量。
1　实验材料
1.1 试剂:用于分析的试剂均为分析纯 , 水为蒸馏
水 ,用于 HLPC 法测定的试剂均为色谱法 ,水为超纯水。
白茅根(购于不同的产地)。
1.2 仪器:LC 一 10AC 高效液相色谱仪;Mettler AE
163 电子天平;BUG25—06型超声仪
1.3 对照品:绿原酸(中国药品生物制品检定所)
2　实验条件的选择
2.1 色谱条件
C18柱(Diamonsi , 250×4.6nm , 5μm), 流动相:甲醇-
0.4%磷酸盐溶液(89:11), 检测波长:327nm , 流速:1.
0ml/min;柱温:室温。进样体积:5μl;检测波长:对标样
溶液进行 200-400nm 扫描 , 发现绿原酸在 327nm 有最
大吸收峰 ,因此检测波长为 327nm。
2.2 提取溶剂的选择
取白茅根 ,研细 ,精密称取供试品 0.5g ,分别采用甲
醇、50%甲醇 、乙醇及 50%乙醇作为提取溶剂 ,超声 30 分
钟, 测定结果分别为每 g 含 3.582mg、4.533mg 、3.526mg、
4.132mg ,由此可见选择 50%甲醇作为提取溶剂。
2.3 超声时间的考察
取供试品 , 研细 , 精密称取 0.5g , 加入 50%甲醇
50ml , 超声 ,时间分别为 15min 、30min、45min、60min ,测定
绿原酸的含量 ,结果分别为每 g 含 3.475mg、4.519mg、4.
712mg、4.723mg 。由此可见 , 45 分钟与 60分钟无显著差
异 ,说明 45 分钟已提取完成 , 所以超声时间可确定为
45 分钟较宜。
3　方法与结果
3.1 对照品溶液的制备
精密称取经 120℃减压干燥至恒重的绿原酸对照
品15mg , 置 50ml量瓶中 , 加 50%甲醇溶解 , 稀释至刻
度 ,摇匀即得对照品(每 lml含绿原酸对照品 0.3mg)。
3.2 标准曲线的制备
精密称取 1.0 、2.0、3.0、4.0 、5.0ml ,分置 10ml容量
瓶中 ,加入 50%甲醇稀释至刻度 , 摇匀 , 分别取上述溶
液各5μl , 注入高效色谱仪 , 测定峰面积 ,进行回归分析 ,
得回归方程为:y=4716725X+5609.01(r=0.9996)。结
果表明 ,绿原酸在(0.031-0.1525mg/ml)范围内 , 峰面
积与浓度线性关系良好。
3.3 供试品溶液的制备
取供试品 ,研细 , 精密称取 0.5g , 精密加入 50%甲
醇50ml , 超声 , 处理 45 分钟 , 放冷 , 用 50%甲醇补足减
失的重量 ,摇匀 , 滤过 ,取续滤液 , 即得供试品溶液。
3.4 稳定性试验
取同一样品溶液 , 按正文操作分别在 0、2、4、8、10、
24 小时进样测定 , 结果 RSD 0.87%,表明供试品溶液在
24h内稳定。
3.5 精密度试验
精密吸取相同浓度的绿原酸对照品溶液 , 进样 5
次 ,测定峰面积 , 结果 RSD 0.43%(n=5)。
3.6 回收率试验
精密称取已知含量的白茅根样品 , 精密加入浓度
为1.167mg/ml的绿原酸对照品的 50%甲醇溶液 2ml ,
按上述方法测定 ,计算回收率 , 结果见表 1。
104 江　西　化　工 2005年第 4 期　
DOI :10.14127/j.cnki.j iangxihuagong.2005.04.037
表 1
样品中
含量(mg)
对照品
加入量(mg) 测得量(mg) 回收率(%)
平均回
收率(%) 平均 RSD(%)
1 1.837 2.334 3.947 90.4
2 1.892 2.334 4.028 91.5
3 2.343 2.334 4.507 92.7 90.8 1.60
4 2.378 2.334 4.465 89.4
5 2.896 2.334 4.966 88.7
6 2.829 2.334 4.983 92.3
　　3.7 重复性试验
精密称取白茅根样品 5份 , 同法处理 , 进行含量测
定 ,平均含量为每 g 为 4.697mg , RSD为 0.75%(n=5)。
3.8 样品测定
按正文中含量测定方法对 6 种不同产地的白茅根
药材中绿原酸含量进行测定 ,测定结果见表 2。
表 2　不同产地样品含量测定结果表
产地 绿原酸(n为 3)% RSD(%)
1 江西樟树 0.468 1.45
2 安徽 州 0.512 1.67
3 湖南长沙 0.397 1.38
4 福建南平 0.456 1.92
5 广东肇庆 0.278 1.13
6 湖北黄石 0.823 1.73
4　结论与讨论
4.1 应用 HPLC法测定白茅根中主要成分氯原酸含
量 ,此方法灵敏 , 稳定 , 专属性好 , 重现性好 , 可作为白
茅根药材及其制剂的质量控制。
4.2 曾选用乙腈-0.4%磷酸溶液(17:83)作为流动
相 ,结果绿原酸分离效果不好 , 且乙腈对环境的污染
大。故选用甲醇-磷酸溶液 , 也完全可以达到分离效
果 ,相比之下 , 甲醇对环境污染要小 , 而用甲醇-0.4%
磷酸溶液不同比例作流动相 , 分离效果也较好 , 但出峰
时间太长 ,经反复实验得到文中所选流动相较合适。
4.3 由表 2可见 , 不同产地的白茅根含量差异还是
比较大 ,含量定在什么范围 , 还需进一步探讨。
参考文献:
[ 1] 卫生部药典委员会:中国药典 2000年版一部 ,化学工业出
版社 ,2000.
[ 2] 江苏新医学院 ,中药大辞典 ,上海 , 上海科技出版社 , 1977.
2008
105　2005年 12 月 HPLC 法测定白茅根中绿原酸的含量