全 文 ：作者简介:杜素兰 , 大学专科 , 主管中药师;Tel:(0355) 2024189;E-m ail:kblyz@163.com
短梗菝葜的定性与定量检测方法研究
杜素兰 , 张晋宏 , 耿爱萍 , 宋　慧 , 侯远生 , 朱　云 , 杨　眉 , 吴冬宏 (山西省
长治市药品检验所 , 长治　046011)
摘要:　通过考察研究短梗菝葜药材性状和显微特征 , 并采用 T LC 鉴别短梗菝葜中的薯蓣皂苷元 、
HPLC法测定短梗菝葜中薯蓣皂苷元的含量 。结果表明不同产地的短梗菝葜在与对照品薯蓣皂苷元色谱相
应的位置上 , 均显相同颜色的斑点;薯蓣皂苷元在 1.08 ～ 5.40μg (r=0.999)呈良好的线性关系 , 加样
回收率 99.3%、 RSD=0.63% (n=5);不同产地的短梗菝葜平均含薯蓣皂苷元 0.039%。本方法简便快
速 、 灵敏度高 、 重复性好 、准确可靠 , 可作为短梗菝葜质量控制标准。
关键词:　短梗菝葜;薯蓣皂苷元;TLC鉴别;HPLC
中图分类号:R284.2　　文献标识码:A　　文章编号:1002-7777 (2008)03-0230-03
Studies onMethod of Qualitative and Quantitative Test of Smilax Scobinicaulis C.H.Wright
Du Sulan , Zhang Jinhong , Geng Aiping , Song Hui , Hou Yuansheng , Zhu yun , Yang Mei and Wu
Donghong (Changzhi Institute for Durg Contro l , Shanxi Province , Chang zhi 046011)
ABSTRACT　Through researching the mo rpholo gic characters and the cha racter of microscopic feature of
the medicine plants , T LC method w as used to identify the diosg enin of smilax scobinicaulis C.H.w right ,
HPLC method w as used to determination o f the marterials.The resul ts show ed that the different region
prepsrstions had the same chromatog rams location as the control sample , moreover they displayed the
same colour spot .Results show ed a good linear relat ionship of diosg enin w ithin a range of 1.08 ～ 5.04μg
(r=0.999).The average recovery w as 99.3%, RSD was 0.63%(n=5).The dif ferent region average
content o f diso genin w as 0.039%.The method is simple , rapid , accurate , reproducible and sui table fo r
content determination of the smilax scobinicaulis C.H.w right.
KEYWORDS　Smilax scobinicaulis C.H .w right ;diosg enin ;T LC ;HPLC
　短梗菝葜 Smila x scobinicaulis C.H.Wright 为
百合科植物 , 其干燥根及根茎入药 , 商品名叫铁丝
威灵仙。该药在我国北方地区资源丰富 、野生产量
大 , 药用历史较长 , 具有祛风除湿 、散瘀 、 解毒等
功效 , 主要用于风湿腰腿痛 、 疮疖等症[ 1] 。据文献
报道 , 短梗菝葜含有薯蓣皂苷元 、 替告皂苷元 、 新
替告皂苷元等甾体皂苷类化合物[ 2] , 但对其生药学
研究报道却很少 , 仅涉及植物特征 、性状和显微鉴
别描述[ 1-4] 。本研究采用薄层色谱法及高效液相色
谱法对短梗菝葜中薯蓣皂苷元进行了定性定量测
定 , 为其更准确 、更科学的质量控制提供了可靠的
依据 。
1　仪器与试药
LC-2010AH TG 型高效液相色谱仪 (岛津);
OLYMPUS CX31显微镜;BT25S 型十万分之一
电子分析天平。薯蓣皂苷元对照品 (中国药品生物
制品检定所 , 批号:1539-200001);甲醇为色谱
纯;其他试剂均为分析纯。
短梗菝葜样品 (分别采自山西省长治市长子
县 、平顺县 、长治县 、 壶关县和屯留县 , 共 5批 ,
经 鉴 定 均 为 短 梗 菝 葜 Sm ilax scobinicaul is
C.H.Wright 的根及根茎)。
2　性状鉴别
根茎呈不规则块状 , 略横向延长而弯曲 , 上端
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DOI :10.16153/j.1002-7777.2008.03.003
偶有残留茎基。残茎上着生有小刺 。根茎上着生许
多细长的根 , 根长达 20 ～ 80cm , 直径 0.1 ～
0.3cm , 多弯曲 , 表面灰褐色或棕褐色 , 光滑 , 并
带有稀疏的刺状须根痕。质坚韧 , 难折断 , 富有弹
性。气微 , 味淡 。见图 1。
图 1　药材图
3　显微鉴别
根的横切面:内皮层外侧的组织多已脱落 , 有
时可见残存的皮层细胞。内皮层由一列含有棕色色
素的长椭圆形石细胞组成 , 长 45μm 、 宽 20μm ,
细胞内壁及侧壁三面显著增厚 , 胞腔小 , 有明显的
层纹 。中柱具初生构造约占根的 1/2。中柱鞘由 9
～ 13层木化厚壁纤维组成 , 直径 17 ～ 40μm 。韧皮
部由薄壁细胞和筛管构成 , 与木质部相间排列 , 各
15 ～ 25个 , 呈辐射型 。木质部由导管和纤维组成 ,
导管 2 ～ 3个一列排列成环 , 导管直径 40 ～ 120μm ,
中央为髓部 , 约占根的 2/5 。见图 2。
图 2　根横切面显微图 (×100)及局部放大图 (×400)
4　薄层色谱鉴别
4.1　对照品溶液的制备　称取薯蓣皂苷元对照品
2mg , 加甲醇制成每 1mL 含 1mg 的溶液 , 作为对
照品溶液 。
4.2　供试品溶液的制备　取样品粉末 (过 2号筛)
5g , 置于锥形瓶中 , 加乙醇 50mL , 超声处理 30
分钟 , 滤过 , 滤液加盐酸 5mL , 加热回流 2 小时 ,
用 40%氢氧化钠溶液调至中性 , 蒸至近干 , 残渣
加热水 50mL 使溶解 , 用二氯甲烷振摇提取 2 次
(40 , 30mL), 合并提取液 , 蒸干 , 残渣加甲醇
1mL 使溶解 , 即得[ 5] 。
4.3　薄层色谱分析　吸取上述对照品溶液和供试
品溶液各 5μL , 分别点于同一硅胶 G 薄层板上 ,
以环己烷-醋酸乙酯 (2∶1)为展开剂 , 展开取出
晾干 , 喷以 1%香草醛硫酸溶液 , 在 60℃加热数分
钟至斑点显色清晰 。供试品色谱中 , 在与对照品色
谱相应的位置上 , 显相同颜色的斑点 。见图 3。
1.长子县样品;2.平顺县样品;3.对照品;
4.长治县样品;5.壶关县样品。
图 3　短梗菝葜 TLC 图
5　薯蓣皂苷元的含量测定
5.1　色谱条件　SHMADU VP-ODS (4.6mm ×
250mm , 5μm)色谱柱 , 流动相:甲醇-水 (90∶
10), 检测波长 210nm;流速 1mL · min-1 , 进样
量:20μL , 柱温 40℃。理论板数按薯蓣皂苷元计
算 , 不低于 5000。
5.2　对照品溶液的制备　取薯蓣皂苷元对照品适
量 , 置五氧化二磷减压干燥器干燥 15小时后 , 精
密称取 5.41mg 薯蓣皂苷元 , 置于 10mL 容量瓶
中 , 加甲醇稀释至刻度 , 摇匀 , 制成浓度为
0.541mg ·mL-1的对照品溶液 。
5.3　供试品溶液的制备　取样品粉末 (过 4号筛)
约 5g , 精密称定 , 置于锥形瓶中 , 加乙醇 50mL ,
超声处理 (功率 250W , 频率 33kHz)30分钟 , 滤
过 , 滤渣及滤纸用乙醇 20mL 分 3次洗涤 , 合并乙
醇液 , 乙醇液加盐酸 5mL , 加热回流 2h , 放冷 ,
用 40%氢氧化钠溶液调至中性 , 转移至蒸发皿中 ,
用乙醇 10mL 分数次洗涤容器 , 洗液合并至蒸发皿
中 , 蒸至近干 , 残渣加热水 40mL 使溶解 , 用二氯
甲烷振摇提取 3次 (40 、 30 、 20mL), 合并二氯甲
烷液 , 回收二氯甲烷至干 , 残渣加甲醇溶解并转移
至 10mL量瓶中 , 加甲醇稀释至刻度 , 摇匀 , 用微
孔滤膜 (0.45μm)滤过 , 取续滤液 , 即得 。
按上述色谱条件 ,分别吸取对照品溶液 、供试品
溶液注入色谱仪中 ,记录色谱图。样品中薯蓣皂苷
元与相邻成分达到基线分离 ,分离度为 2.0。见图 4。
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a.对照品;b.样品;1.溶剂峰;2.薯蓣皂苷元峰
图 4　短梗菝葜 HPLC 色谱图
5.4　线性关系考察 　取对照品溶液依次进样 2 ,
4 , 6 , 8 , 10μL , 以进样量 (μg)为横坐标 , 峰面
积为纵坐标绘制标准曲线 , 得线性回归方程:
Y =3.48767×105X +1.39567×104 　r=0.9999
结果表明薯蓣皂苷元在 1.08 ～ 5.40μg 呈良好的线
性关系。
5.5　精密度试验　精密吸取薯蓣皂苷元对照品溶
液 20μL , 重复进样 5 次 , 薯蓣皂苷元峰面积的
RSD为 0.4%。
5.6　稳定性实验　取采自长子县的短梗菝葜供试
品溶液 , 室温下放置 , 分别在 0 ,2 ,6 ,8 ,12h 进样 ,
薯蓣皂苷元峰面积的 RSD为 0.56%, 结果表明短
梗菝葜供试品溶液中薯蓣皂苷元在 12h内稳定 。
5.7　重复性试验　平行称取同一产地的样品 6份 ,
按 “5.3” 供试品方法处理 , 依上述色谱条件进样
20μL , 测定并计算。结果薯蓣皂苷元平均含量为
0.039%, RSD为 1.56%。
5.8　加样回收率试验　精密称取已知含量的短梗
菝葜(采自长子县)6份 , 每份样品各 2.1g , 分别置
于 6个锥形瓶中 , 分别精密加入与样品所含薯蓣皂
苷元相当量的薯蓣皂苷元对照品甲醇溶液 1mL
(0.816mg ·mL-1)。按样品溶液项下制备方法制备
及测定 , 结果见表 1。
表 1　加样回收率测定结果
样品中含量
(mg)
加入量
(mg)
测得量
(mg)
回收率
(%)
平均回收率
(%)
RSD
(%)
0.8198 　 1.626 98.8
0.8210 　 1.632 99.4
0.8213 0.816 1.639 100.2 99.3 0.63
0.8206 　 1.636 99.9
0.8221 　 1.627 98.6
0.8220 　 1.631 99.1
5.9　样品测定 　取 5 个产地的样品 , 分别按
“5.3” 项下方法制得供试品溶液 , 依上述色谱条
件 , 注入高效液相色谱仪 , 以外标峰面积法计算样
品中薯蓣皂苷元的含量 , 结果见表 2。
　　　　表 2　样品含量测定结果 (n=3)　　　　%
产地 含量1 含量2 含量3 平均含量
长治市长子县 0.039 0.037 0.039 0.039
长治市平顺县 0.038 0.040 0.041 0.040
长治市长治县 0.040 0.042 0.040 0.041
长治市壶关县 0.034 0.037 0.037 0.036
长治市屯留县 0.039 0.039 0.036 0.038
6　讨论
6.1　提取条件的选择　本品含甾体皂苷及薯蓣皂
苷类等化合物 , 其中薯蓣皂苷元为其主要有效成
分 , 含量较高 , 化学性质稳定 , 易提取分离[ 6] , 因
此以薯蓣皂苷元为对照品 。建立薄层色谱鉴别方
法 。采用酸水解 , 三氯甲烷提取效果较差;而用乙
醇回流 , 酸水解 , 二氯甲烷萃取的方法提取较完
全[ 5-6] 。
6.2　展开剂的选择　参考文献[ 1 , 5] 菝葜鉴别项下
的展开剂 , 以氯仿-丙酮-水 (12∶3 ∶0.7)、 环己
烷-醋酸乙酯 (4 ∶1)、 环己烷-醋酸乙酯 (2∶1)
等系统进行测定。结果表明:环己烷-醋酸乙酯 (2
∶1)为展开剂 , 展距为 10 ～ 15cm , 薯蓣皂苷元展
开得到的分离效果较好 , 斑点明显 , 重现性好 。
6.3　流动相的选择　参照 《中国药典》 2005年版
一部穿山龙含量测定项下流动相 , 用甲醇-水 (90
∶10)为流动相 , 薯蓣皂苷元具较好的分离效果和
线性关系。取薯蓣皂苷元对照品的甲醇溶液 , 经紫
外全波长扫描 , 结果薯蓣皂苷元在 210nm 处有最
大吸收 , 故采用 210nm作为检测波长。
本研究探讨了短梗菝葜药材的性状 、 显微及理
化 、定性 、定量检测方法 , 采用 TLC 鉴别短梗菝葜
药材中的薯蓣皂苷元 , HPLC 测定短梗菝葜药材中
薯蓣皂苷元的含量 。简便快速 、灵敏度高 、重复性
好 ,准确可靠 ,为其质量标准制定提供了参考依据。
参考文献:
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[ 2] 肖培根主编.新编中药志 [ M] .一卷.北京:化学工业出
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[ 6] 姚新生 , 吴立军.天然药物化学 [ M] . 4版.北京:人民
卫生出版社 , 2003:348.
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