全 文 ：收稿日期: 2007-11-14
修回日期: 2007-12-16
作者简介:陈　勇 ( 1961-) ,男 ,教授 ,主要从事中药质量控制研究。
* 广西高校人才小高地建设创新团队资助计划项目资助。
广西科学 Guangxi Sciences 2008, 15( 2): 178～ 180
绵萆 药材质量控制的实验研究*
The Experiment Study for Qual ity Control of Diascorea
septemloba Thunb
陈　勇 ,王　勤 ,李　立 ,李　兵 ,潘丽娜 ,王智勇
CHEN Yong, W ANG Qin, LI Li, LI Bing, PAN Li-na, WANG Zhi-yong
(广西中医学院药学院 ,广西南宁　 530001)
( Guangxi TCM University, Nanning, Guangxi , 530001, China)
摘要:以薯蓣皂苷元为对照品 ,采用三氯甲烷 -乙酸乙酯 ( 10∶ 1)为展开剂 ,对绵萆 药材进行薄层色谱鉴别 ;采
用 Hyper silODS2C18柱 ( 5μm, 4. 6mm× 250mm) ,乙腈 -水 ( 90∶ 10)为流动相 , 203nm为检测波长 ,测定绵萆 药材
中薯蓣皂苷元的含量。绵萆 药材薄层色谱鉴别中 ,薯蓣皂苷元与其他成分分离良好 ,能较好的鉴别出薯蓣皂苷
元 ; HPLC定量分析中 ,薯蓣皂苷元进样量 2. 16～ 19. 44μg范围内呈良好的线性关系 ,平均回收率为 100. 92% ,
RSD为 1. 30%。 本方法简便 ,结果准确 ,重现性好 ,可以用于绵萆 药材的质量控制。
关键词:薄层色谱法　高效液相色谱法　薯蓣皂苷元　绵萆
中图法分类号: O657. 7, R282. 5　　文献标识码: A　　文章编号: 1005-9164( 2008) 02-0178-03
Abstract: Diascorea septemloba Thunb were identified by TLC respectively; using diosgenin as
reference substances, and ( 10∶ 1) as mobile phases. Diosg enin contents w ere determined by HPLC
using the ODS reversed-phase column of Hypersil C18 ( 5μm, 4. 6mm× 250mm) , the mobile phase
was a combination of acetonit rile and w ater ( 90∶ 10) , and the eluate w as monitored with UV
absorption at 203nm. Diosgenin was w ell-separated by TLC. The diosgenin contents in D.
septenloba Thunb by HPLC, in the linear range of 2. 16 to 19. 44μg and the recoveries of 100. 92%
( RSD = 1. 30% ). The established methods are simple, feasible and reproducible. It i s also proposed
to be used for the quali ty control of theD . septemloba Thunb.
Key words: TLC, HPLC, Diosgenin, Diascorea septemloba Thunb
　　 绵萆 是薯 蓣科植 物绵萆 (Diascorea
septemloba Thunb)或福州薯蓣 (D . f utschaueusis Uli-
ne ex R. Kunth)的块茎 [1 ]。主要含有薯蓣皂苷等甾体
皂苷类成分 ,具有祛风、利湿之功 ,临床上作为利水渗
湿药应用 ,用于治疗风湿顽痹、腰膝疼痛、小便不利、
淋浊、遗精、湿热疮毒等。绵萆 具有抗心肌缺血、抗
肿瘤、降血脂、预防动脉粥样硬化等作用 ,其有效成分
主要为甾体皂苷类 [2 ]。目前对于该药材质量控制方面
研究报道较少。为了有效控制该药材的质量 ,本实验
建立绵萆 药材的薄层鉴别和含量测定方法。
1　材料、仪器与试剂
1. 1　材料
　　绵萆 药材购于南宁医药有限公司 ,经我院蔡毅
教授鉴定为薯蓣科植物绵萆 (Dioscorea septemloba
Thunb)的干燥块茎。 薯蓣皂苷元对照品由中国药品
生物制品检定所提供 ,供含量测定用 ,批号: 1539-
200001。
1. 2　仪器与试剂
　　美国安捷伦科技公司 Agilent1100高效液相色谱
仪 (含在线真空脱气机 ,高压四元梯度泵 ,标准自动进
样器 ,智能化柱温箱 ,可变波长检测器 , Agilent1100
series色谱工作站 ) ; CG-16W高速微量离心机 (北京
医用离心机厂生产 ) ; SB3200-T超声波提取器 (上海
必能信超声有限公司出品 ) ; Mi llipo re Simplici ty-185
超纯水器 (美国密里博公司出品 ) ; BP211D电子分析
天平 (德国赛多利斯公司出品 ) ; 939薄层制板器 (重
庆南岸贝尔德仪器技术厂出品 )。乙腈 (色谱纯 ) ,其他
178 Guangxi Sciences, Vol. 15 No. 2, May 2008
DOI : 10. 13656 /j . cnki . gxkx . 2008. 02. 029
试剂均为分析纯。
2　 TLC鉴别
　　称取本品 2g ,加乙醇 50ml,超声 0. 5h,滤过 ,滤
液加盐酸 5ml,加热回流 2h,放冷 ,用石油醚振摇提取
4次 ,每次 40ml,合并石油醚液 ,挥干 ,残渣加三氯甲
烷 1ml使溶解 ,作为供试品溶液。另取薯蓣皂苷元对
照品 ,加乙腈制成浓度为 1mg /ml的对照品溶液。吸
取上述两种溶液各 10μl,分别点于同一硅胶 G薄层
板上 ,以三氯甲烷 -乙酸乙酯 ( 10∶ 1)为展开剂 ,展距
10cm ,取出 ,晾干 ,喷以 10%硫酸乙醇试液 ,在 105℃
加热至斑点显色清晰。 供试品色谱中 ,在与对照品色
谱相应的位置上 ,显相同颜色的斑点。色谱图见图 1。
图 1　绵萆 药材 TLC鉴别色谱
　　 Fig. 1　 TLC distinction chroma to gram of D. septemloba
　 　 1～ 3: 绵萆 , 4: 对照品。 1～ 3: D .septemloba , 4:
Dio sg enin.
3　含量测定
3. 1　色谱条件
　　色谱柱: Hypersil, ODS2 C18柱 ( 5μm, 4. 6mm×
250mm ,大连依利特分析仪器有限公司出品 ) ,流动
相:乙腈-水 ( 90∶ 10) ,检测波长 203nm,柱温 25℃ ,
流速 , 1m l /min,进样量 10μl,理论塔板数以薯蓣皂苷
元色谱峰计算应不低于 8000。 色谱图见图 2和图 3。
图 2　薯蓣皂苷元对照品 HPLC色谱
　　 Fig. 2　 HPLC ch romatog ram o f diosgenin
　　 a: 薯蓣皂苷元。 a: Dio sgenin.
图 3　绵萆 药材 HPLC色谱
　　 Fig . 3　 HPLC chromatog ram of D . septemloba
　　 a:薯蓣皂苷元。 a: Diosgenin.
3. 2　对照品溶液制备
　　精密称取薯蓣皂苷元对照品适量 ( 5. 41mg ) ,置
50ml量瓶中 ,用适量乙腈溶解并稀释至刻度 ,摇匀 ,
即得浓度为 0. 108mg /ml的对照品溶液。
3. 3　供试品溶液制备
　　取本品粉末 (过 2号筛 )约 8g ,精密称定 ,置圆底
烧瓶中 ,加乙醇 100ml,置水浴锅中加热回流 2h,放
冷 ,滤过 ,滤液加盐酸 16ml,加热回流水解 2h,回收溶
剂至约 50m l,冷却 ,用石油醚 ( 60～ 90℃ )振摇提取 4
次 ,每次 40m l,合并提取液 ,回收溶剂至干 ,残渣加乙
腈溶解 ,并定量转移至 10m l容量瓶中 ,用乙腈稀释至
刻度 ,摇匀 ,离心 ,取上清液作为供试品溶液。
3. 4　方法学考察
3. 4. 1　标准曲线制备
　　分别配制浓度 ( mg /ml )为 0. 216、 0. 648、 1. 080、
1. 512、 1. 944的对照品溶液 ,精密吸取上述对照品溶
液各 10μl,注入高效液相色谱仪 ,按上述色谱条件测
定峰面积值。 以峰面积为纵坐标 ,对照品进样量 (μg)
为横坐标 ,绘制标准曲线 ,并求出回归方程为: Y =
9. 8056C+ 2. 7150, r = 0. 9998。 结果表明 ,薯蓣皂苷
元对照品进样量在 2. 16～ 19. 44μg间呈现良好的线
性关系。
3. 4. 2　精密度试验
　　吸取薯蓣皂苷元对照品溶液 (浓度为 1. 080mg /
m1) 10μl,注入高效液相色谱仪 ,重复进样 6次 ,测定
薯蓣皂苷元对照品峰面积 ,计算平均峰面积值为
1042. 4, RSD = 1. 14% 。
3. 4. 3　稳定性实验
　　取同一供试品溶液 ,每隔 4h ,分别进样 10μl,测
定薯蓣皂苷元峰面积值 ,计算平均峰面积值为
1215. 41, RSD = 4. 87% ,表明供试品在 24h内保持
稳定 ,
3. 4. 4　重复性试验
　　精密称取同一批供试品 ,共 6份 ,按样品测定项
下的方法进行测定 ,计算平均含量为 0. 046% , RSD
= 3. 03% 。
179广西科学　 2008年 5月　第 15卷第 2期
3. 4. 5　加样回收率试验
　　取已测知薯蓣皂苷元含量的绵萆 药材约
4. 0g ,精密称定 ,分别精密加入一定量的薯蓣皂苷元
对照品溶液 ( 2. 05mg /ml) ,按供试品溶液制备方法制
备待测溶液 ,按上述色谱条件测定 ,计算加样回收率 ,
结果见表 1。
表 1　加样回收率试验结果
Tabl e 1　 Determination resul ts of recovery
序号
No.
原有量
Original
( mg)
加入量
Added
(mg )
测得量
Found
( mg)
回收率
Recov ery
(% )
X-
(% )
RSD
(% )
1 1. 825 2. 05 3. 905 101. 45 100. 92 1. 30
2 1. 597 2. 05 3. 616 98. 48
3 1. 735 2. 05 3. 793 100. 38
4 2. 053 2. 05 4. 140 101. 79
5 1. 956 2. 05 4. 042 101. 76
6 2. 008 2. 05 4. 092 101. 69
3. 5　样品测定
　　分别取不同批次的绵萆 药材约 8g,精密称定 ,
按供试品溶液制备方法制备 ,注入高效液相色谱仪 ,
测定峰面积值 ,以外标一点法计算供试品中薯蓣皂苷
元的含量 ,结果见表 2。
表 2　绵萆 药材薯蓣皂苷元含量 (n= 3)
Tabl e 2　 The diosgenin contents in D . septemloba (n= 3)
批次 No. 含量 Conten t(% ) R SD (% )
1 0. 049
2 0. 046 0. 005
3 0. 047
4　结论
　　在薯蓣皂苷元的薄层鉴别实验中 ,曾试用过环己
烷-乙酸乙酯 ( 4∶ 1)、三氯甲烷 -丙酮 ( 9∶ 1)、三氯甲
烷 -乙酸乙酯 ( 10∶ 1)等展开剂 ,通过比较 ,采用本实
验所用的三氯甲烷 -乙酸乙酯 ( 10∶ 1)效果较好 ,斑点
清晰 ,圆整。
　　在薯蓣皂苷元的 HPLC含量测定中 ,在制备供
试品溶液时 ,分别用三氯甲烷、石油醚及醋酸乙酯进
行萃取 ,结果表明以石油醚 ( 60～ 90℃ ) 40ml直接萃
取 4次的效果最优。本品薯蓣皂苷元的含量测定在供
试品溶液制备时需进行水解 ,然后用石油醚进行多次
萃取 ,萃取过程中的步骤较多 ,会影响方法的重复性。
　　分别考察不同比例乙腈 -水、乙腈 -磷酸溶液等流
动相 ,结果发现以乙腈 -水 ( 90∶ 10)作流动相时 ,色
谱峰形及分离度较好。
参考文献:
[ 1 ]　国家药典委员会 .中国药典 2005版一部 [M ].北京: 化
学工业出版社 , 2005: 232.
[ 2 ]　李雪征 ,金光沫 .萆 的研究进展 [ J].中国野生植物资
源 , 2002, 21( 5): A-10.
(责任编辑:邓大玉 )　　
(上接第 177页 Continue f rom page 177)
[ 3]　余雄英 ,任启生 ,宋新容 .山海螺的研究进展 [ J].江西中
医药 , 2004, 35( 3): 60.
[ 4]　 Chang Y K, Kim S Y, Han B H. Chemical studies on the
alka loidal constituents of codonopsis lanceoalta [ J ].
Yakhak Hoechi, 1986, 30( 1): 1.
[ 5]　 Aladina N G, Elkin Y N , Chezhian E A. Structure
o f codonoside B [ J]. Khim Prir Soedin, 1989, 28( 3): 368.
[ 6]　宋彦梅 ,尹秋响 ,王静康 .甘氨酸的应用及生产技术 [ J].
氨基酸和生物资源 , 2003, 25( 2): 55-60.
[ 7 ]　徐琪寿 .氨基酸的药理研究进展 [ J].氨基酸和生物资
源 , 1996, 18( 1): 30-32.
[8 ]　周忠信 ,张泷娟 ,黄晓卉 .胃肠外营养添加精氨酸对肝癌
术后患者免疫功能的影响 [ J ].南方医科大学学报 ,
2007, 27( 7): 1094-1096.
(责任编辑:邓大玉 )　　
180 Guangxi Sciences, Vol. 15 No. 2, May 2008