全 文 ：树脂吸附 -薄层扫描法测定
抗病毒口服液菝葜皂甙元含量
苏子仁　周莉玲 (广州中医药大学　 510407)
摘要　利用抗病毒口服液中知母皂甙被大孔树脂吸附 ,除去糖等杂质干扰 ;再用 75%乙醇洗脱皂甙。 加
酸水解生成皂甙元 ,经有机溶媒富集后 ,按薄层扫描法测定菝葜皂甙元含量。 该法专一性强 ,灵敏度高 ,线性
关系好 ,回收率为 97. 2% , RSD为 3. 28%。
关键词　抗病毒口服液　菝葜皂甙元　大孔树脂　薄层扫描法　含量测定
Determination of Sarsasapogenin in an Anti-virus Oral Liquid
with a Resin-absorptive and TLCSMethod
Su Ziren ,Zhou Lil ing (Guangzhou University of TCM ,Guangzhou , 510407)
Abstract: The timosaponin in an anti-vi rus o ra l liquid was abso rbed by g rea t o ccipi ta l
resin to g et rid o f the disturbance o f impurities like suga r, then eluted wi th 75% alcohol and
hydroly zed by acid to produce sapogenin, whose content w as determined wi th a TCLS-
method w as sensi tiv e w ith high specificity and good linear relationship, and the ra te of recov-
ery w as 97. 2% , RSD 3. 28% .
Key words: anti-vi rus o ral liquid, sa rsasapogenin, g reat occipi tal resin, TLCS content de-
termina tion
　　抗病毒口服液由北板蓝根、知母、广藿
香、连翘等药材制成 ,具有清热祛湿、凉血解
毒的功效 ,用于治疗病毒性疾患疗效较好。原
试行的质量标准只有挥发油的试管反应和连
翘的薄层鉴别 ,尚不能满足进一步控制质量
的需要。我们选择清热泻火之要药知母作为
研究对象 ,利用知母皂甙易被大孔树脂吸附 ,
除去糖等杂质的干扰 ;再将知母皂甙洗脱 ,加
酸水解生成皂甙元后 ,用有机溶媒富集 ,薄层
扫描法测定菝葜皂甙元含量。现将实验结果
报告如下。
1　实验材料
抗病毒口服液 ,无附加剂的抗病毒口服
液原液 ,知母药材等均由广州市萝岗制药厂
提供。
菝 葜 皂 甙 元 ( Sarsasapogenin, 简 写
SAR)对照品 ,批号为 744-8701,由中国药品
生物制品检定所提供。大孔树脂 D101 (天津树
脂厂 )。硅胶 G(青岛海洋化工厂 )。氯仿 ,正己
烷 ,乙酸乙酯等试剂均为 AR级。
Shimadzu CS-920型薄层扫描仪 ,薄层
涂布器 ,微量进样器 ,索氏提取器。
2　实验方法与结果
2. 1　样品溶液的制备
2. 1. 1　菝葜皂甙元对照品溶液　精密称取
菝葜皂甙元 5mg ,置 5m l容量瓶中 ,用苯溶
解并稀释至刻度、摇匀、备用。
2. 1. 2　知母药材对照液　取干燥的知母药
材粉碎成粗粉 (过 40目筛 ) ,精密称取 2g ,置
50ml具塞三角瓶中 ,加入 95%乙醇 20. 0ml ,
超声波振荡提取 40min,静置后取上清液
10. 0m l于 100ml圆底烧瓶中 ,加入浓盐酸
5ml及蒸馏水 40ml,沸水浴回流 2h,放置至
室温 ,用滤纸过滤 ,烧瓶用少量水多次洗涤 ,
·6· Chinese Journal of Experimenta l T raditional Medica l Fo rmulae Apr. 1998, 4( 2)DOI : 10. 13422 /j . cnki . syf jx . 1998. 02. 003
过滤 ,蒸馏水洗至滤液无色 ( p H6～ 7) ,滤纸
100℃干燥 1h后 ,置索氏提取器中用氯仿回
流提取 3h,提取液回收氯仿至剩余少量 ,转
移至具塞离心管中 ,挥去氯仿至干。取 1. 0ml
氯仿 -乙醇 ( 1∶ 1)混合液定量溶解 ,取 5μl点
样。
2. 1. 3　抗病毒口服液样液　精密量取口服
液 50. 0ml ,置已处理好的大孔树脂柱 (大孔
树脂 D101经 95%乙醇浸泡 3d,水洗至无醇
味 ,取 10g大孔树脂 ,置内径 1cm,高 20cm
层析柱上 ,水冲洗备用 ) ,先用 100ml蒸馏水
洗去糖等干扰物质 ,再用 75%乙醇 100ml洗
脱 ,收集洗脱液 ,将洗脱液置 100ml圆底烧
瓶中 ,回收乙醇。 残渣按 2. 1. 2方法提取定
容 ,取 20μl点样。
2. 1. 4　无附加剂抗病毒口服液原液　按抗
病毒口服液样液方法制备。
2. 1. 5　缺知母样液　按抗病毒口服液处方
制成缺知母样液 ,依法水解 ,提取 ,定容后取
20μl点样。
2. 2　测定方法的建立
2. 2. 1　薄层层析条件和专一性考察　吸附
剂: 硅胶 G-0. 5% CMC-Na 板 (厚 0. 5mm,
105℃活化 2h) ;展开剂:正己烷 -乙酸乙酯 ( 8
∶ 2)。上行展开 10cm; 8%香草醛乙醇液 -3%
高氯酸液 ( 1∶ 1)混合液喷雾显色 ,于 100℃
烘烤 10min。抗病毒口服液在 R f= 0. 45处可
检出与知母相对应的菝葜皂甙元的黄色斑
点 ,缺知母的样液不能检出相应的斑点 ,结果
果表明 ,其它药材对测定无干扰。 结果如
图 1。
a. 抗病毒口服液
b.抗病毒原液 (无附加剂 )
s. SAR对照品
c.缺知母阴性样品
d. 知母
○ 棕色
● 黄色
图 1　抗病毒口服液的 TLC图谱
2. 2. 2　线性关系考察　精密吸取菝葜皂甙
元对 照品溶 液 1. 0、 2. 0、 3. 0、 4. 0、 5. 0、
6. 0μl,分别点于薄层板上 ,展开 ,显色后 ,参
照文献 [1 ] ,在λ= 445nm, SX= 3,狭缝 1. 25×
1. 25mm
2条件下反射式锯齿扫描测定峰面
积 ,经回归分析 ,回归方程 Y= 1. 509× 10- 4x
+ 0. 209;相关系数 r= 0. 9991。结果显示 ,在
1～ 6μg内 ,线性关系良好。
2. 2. 3　显色稳定性考察　取 4μl菝葜皂甙
元对照品溶液点于薄层板上 ,展开 ,显色后 ,
在不同的时间进行扫描测定。结果显示 ,显色
后 1h内峰面积值基本保持恒定 ;时间延长
后 ,斑点逐渐褪色 ,峰面积值明显下降。本实
验采用立即测定。
2. 2. 4　纯化条件的考察　样品溶液采用大
孔树脂吸附去糖 ,加酸水解 ,有机溶媒提取等
纯化措施。为了优化纯化条件 ,我们进行了如
下试验:
( 1)排除糖的干扰: 精密量取 50. 0ml同
一批号的不含附加剂的口服液原液 9份 ,其
中 6份按处方加入一定量的糖等附加剂制成
抗病毒口服液。其中原液 3份 ,抗病毒口服液
3份不经大孔树脂处理 ,直接依法水解 ,提
取 ,定容 ,测定。 抗病毒口服液另外 3份依法
过大孔树脂去糖 ,水解 ,提取 ,定容 ,测定。 结
果如表 1。
表 1　大孔树脂排除糖干扰测定结果
样品 测定法 测定结果 (x± s )
不含糖原液 不经大孔树脂柱 3. 483± 0. 275
样液 (含糖 ) 不经大孔树脂柱 2. 134± 0. 034
样液 (含糖 ) 经大孔树脂柱 3. 452± 0. 080
　　结果不加附加剂的半成品原液测定值远
大于加附加剂的样液。 含糖等附加剂的样液
经大孔树脂吸附除糖处理之后 ,测定值与无
糖原液无差别。结果显示 ,附加剂糖对测定结
果干扰大 ;大孔树脂处理可排除糖的干扰。
( 2)水解时间的选择　精密量取抗病毒
口服液原液 50. 0m l 6份 ,分别置 100ml圆底
烧瓶中 ,加入浓盐酸 5ml及蒸镏水 10ml ,分
别在沸水浴回流 0. 5、 1. 0、 1. 5、 2. 0、 3. 0、
6. 0h后 ,依抗病毒口服液样液制备法提取 ,
·7·1998年 4月　第 4卷第 2期 中国实验方剂学杂志
薄层扫描测定 ,按外标二点法计算含量 ,结果
如表 2。
表 2　不同水解时间的测定结果
水解时间 (h ) 0. 5 1. 0 1. 5 2. 0 3. 0 6. 0
测定结果 (μg /m l) 2. 060 3. 080 3. 660 3. 810 3. 760 3. 780
　　结果显示。水解 1. 5h,含量已接近最高
值 ,本实验采用水解 2h测定。
( 3)提取时间的选择　精密量取抗病毒
口服液 50. 0ml 5份 ,分别依法过大孔树脂
柱 ,加酸水解 2h后 ,放置至室温 ,过滤洗涤 ,
干燥后 ,置索氏提取器中加氯仿 100ml,分别
回流 1. 0、 2. 0、 3. 0、 4. 5、 6. 0后 ,提取液回收
氯仿至氯仿剩余少量 ,转移至具塞离心管中 ,
挥去氯仿至干。用 1. 0ml氯仿: 乙醇 ( 1∶ 1)
混合液定量溶解 ,取 20μl点样 ,薄层扫描测
定。按外标二点法计算含量 ,结果如表 3。
表 3　不同提取时间的测定结果
水解时间 (h ) 1. 0 2. 0 3. 0 4. 5 6. 0
测定结果 (μg /ml) 3. 527 3. 607 3. 633 3. 740 3. 627
结果显示 ,提取 2h,含量已接近最高值。本实
验采用提取 3h测定。
2. 2. 5　回收率试验　按抗病毒口服液的制
剂处方 (含辅料 ) ,制成缺知母的样液 300ml,
精密量取 50. 0ml 5份 ,分别精密加入已知含
量的知母水提醇沉液 2. 0ml ,按上述方法测
定含量。结果如表 4。
表 4　回收率试验结果
编
号
SAR加入值
(m g)
SAR测得值
( mg )
回收率
(% )
x± s
(% )
R SD
(% )
1 3. 042 2. 925 96. 2
2 3. 042 2. 808 92. 3 97. 2± 3. 2 3. 28
3 3. 042 2. 971 97. 7
4 3. 042 3. 028 99. 5
5 3. 042 3. 054 100. 4
2. 3　样品测定　将抗病毒口服液 ,知母原药
材分别按上述方法提取纯化。与 SAR对照品
溶液随行点于同一硅胶 G板上 ,展开 ,显色
后扫描测定 ,按外标二点法计算含量。结果如
表 5。
3　小结与讨论
3. 1　知母系本方的君药 ,具有清热泻火 , 滋
表 5　样品测定结果
样品批号 /来源 SAR含量 [μg /ml (g ) ] x± s
抗病毒口服液
9110128 4. 82 5. 03 4. 15 4. 67 4. 67± 0. 38
9112147 3. 80 4. 30 4. 13 3. 98 4. 08± 0. 21
9201114 4. 10 4. 60 5. 13 4. 53 4. 59± 0. 42
9111136 4. 40 4. 33 5. 10 4. 92 4. 69± 0. 38
9111131 3. 32 2. 93 3. 25 3. 10 3. 15± 0. 17
知　母
本校卫生所 2850 2880 2680 2800± 110
本校一附院 9450 10910 10130 10160± 730
萝岗制药厂 10370 9440 10550 10120± 600
阴润燥的功效。知母主要成分为知母皂甙 ,甙
元部分有菝葜皂甙元 ( Sarsasapogenin)、马可
甙元 ( markogenin)和新吉托甙元 ( neogi to-
getin)。其中菝葜皂甙元含量较多 ,故选择菝
葜皂甙元进行含量测定 ,控制抗病毒口服液
的内在质量。
3. 2　抗病毒口服液中的附加剂主要由蔗糖 ,
蜂蜜及甜味素等组成 ,对含量测定结果影响
较大。利用大孔树脂对皂甙的特异性吸附 ,将
糖等杂质除去 ,排除干扰 ,回收率由 61. 2%
提高至 97. 2% 。
3. 3　该法具有专一性强 ,灵敏度高 ,线性关
系好 ,回收率高的特点 ,适宜抗病毒口服液、
半成品、药材的含量测定。曾将本法与原位水
解法 [1 ]平行测定同一批知母 ,结果本法测定
值为 10. 12± 0. 59mg /g ,原位水解法测定结
果为 3. 60± 0. 13mg /g。两法测定结果有显著
性差异 ,这可能是原位水解法属固体不均相水
解 ,难以水解完全 ,以致 SAR测定结果偏低。
3. 4　知母药材的质量 ,直接影响成品的质
量。经鉴定为百合科 Anemarrhena asphode-
loides Bunge根茎的药材 ,因批次不一 ,其
SAR含量相差较大。 这可能与知母生长环
境 ,物候期 ,饮片加工因素有关。 为确保抗病
毒口服液质量 ,应于投料前对药材进行含量
测定。
参考文献
1　孙文基 ,沙振方 ,杨春光 . 知母及含知母成药中
菝葜皂甙元的薄层扫描法测定 . 中国中药杂志 ,
1989, 14( 9): 34
(收稿: 1997-04-28)
·8· Chinese Journal of Experimenta l T raditional Medica l Fo rmulae Apr. 1998, 4( 2)