全 文 ：HPLC法测定复方菝葜颗粒中落新妇苷的含量
陈新元1，谢 谊2，刘玉琴2，3王实强2
(1. 湖南国华制药有限公司，湖南 长沙，410013;
2. 湖南省中医药研究院中药研究所，湖南 长沙，410013;
3. 湖南中医药大学，湖南 长沙，410208)
［摘要］ 目的:建立高效液相法测定复方菝葜颗粒中落新妇苷含量的测定方法。方法:采用 Waters Symmetry C18(150
× 4. 6mm，5μm)为色谱柱，流动相为甲醇 － 0. 3%冰醋酸(32∶ 68)，流速为 1. 0mL /min;检测波长为 291nm。结果:落新妇苷的
线性范围为 0. 12 ～ 1. 2μg，平均回收率为 98. 19%，ＲSD为 0. 82%。结论:所建立方法操作简便、准确、可靠、重复性好，可用于
复方菝葜颗粒中落新妇苷的含量测定。
［关键词］ 高效液相色谱法;复方菝葜颗粒;落新妇苷;含量测定
［中图分类号］Ｒ284. 1 ［文献标识码］A ［文章编号］1003 － 7705(2014)11 － 0163 － 02
第一作者:陈新元，男，副主任药师，研究方向:药品质量和药品生产管理的研究
通讯作者:王实强，男，研究员，研究方向:中药新药研究与开发，E － mail:wsq8135@ 163. com
Determination of astilbin in compound Baqia granules by high － performance liquid chromatography
CHEN Xin － yuan1，XIE Yi2，LIU Yu － qin2，3，WANG Shi － qiang2
(1. Hunan Guohua Pharmaceutical Co. ，Ltd. ，Changsha 410013，Hunan，China;
2. Institute of Chinese Materia Medica，Hunan Academy of Chinese Medicine，Changsha 410013，Hunan，China;
3. Hunan University of Chinese Medicine，Changsha 410208，Hunan，China)
Abstract:Objective:To establish a method for determining the content of astilbin in Baqia granules by high －
performance liquid chromatography(HPLC). HPLC was performed on a Waters Symmetry C18 column(150 ×
4. 6mm，5μm)with a mobile phase of methanol － 0. 3% glacial acetic acid(32∶ 68)at a flow rate of 1. 0ml /min and
a detection wavelength of 291 nm. Ｒesults:A linear relationship was found within an astilbin content range of0. 12 －
1. 2μg. The average recovery rate was 98. 19%，and the relative standard deviation was0. 82% . Conclusion:This
HPLC method is simple，accurate，reliable，and repeatable and can be used for the determination of astilbin in com-
pound Baqia granules.
Key words:high － performance liquid chromatography;compound Baqia granule;astilbin;determination
复方菝葜颗粒是由菝葜、鱼腥草、猫爪草、土鳖虫等药
物组成的中药复方制剂，方中菝葜解毒消肿为君药;鱼腥
草、猫爪草、土鳖虫清热解毒为臣药;款冬花、枸杞子、大枣、
乌鲤益气扶正共为佐使药。诸药合用共奏清热解毒、软坚
散结、滋阴益气之功效，用于癌症辅助治疗。
方中君药菝葜所含化学成分多样，主要有甾体皂苷类、
黄酮类、芪类、苯丙素等，其中甾体皂苷和黄酮类化合物为
其主要成分。落新妇苷是一种二氢黄酮醇类化合物［1］，具
有选择性免疫抑制、抑制癌细胞增殖和诱导调亡、降血糖及
抑菌杀虫的作用［2 － 3］，为复方菝葜颗粒的主要药效成分。本
研究拟用 HPLC法测定复方菝葜颗粒中落新妇苷的含量，对
制剂的质量控制研究提供依据。
1 仪器与试药
1. 1 仪器 Agilent 1100 高效液相色谱仪，紫外可见检测
器，Agilent ChemStation 色谱工作站(美国 Agilent 公司);
AE240 型电子分析天平(梅特勒 －托利多公司);KQ2200B
型超声波清洗器(昆山市超声仪器有限公司)。
1. 2 对照品与试药 落新妇苷对照品:四川省维克奇生物
科技有限公司提供，HPLC 测定含量大于 98%;复方菝葜颗
粒:湖南国华制药有限公司提供，规格:20g /包。
1. 3 试剂 甲醇为色谱纯;水为超纯水;其他试剂均为分
析纯。
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第 30 卷第 11 期
2014 年 11 月 HUNAN JOUＲNAL OF TＲADITIONAL CHINESE MEDICINE
Vol. 30 N0. 11
Nov 2014
2 实验方法与结果
2. 1 色谱条件 色谱柱:Waters Symmetry  C18(150 ×
4. 6mm，5μm);流动相:甲醇 － 0. 3%冰醋酸水溶液(32∶ 68);
检测波长:291nm;流速:1. 0mL /min;柱温:30℃;进样量:
10μL［4］。落妇新苷对照品、菝葜药材与供试品色谱图见
图 1。
A. 落新妇苷对照品 B. 菝葜药材 C. 复方菝葜颗粒
图 1 HPLC图
2. 2 供试品溶液的制备 取本品 5. 0g，研细，精密称定，置
具塞锥形瓶中，精密加入 60%甲醇溶液 50mL，密塞，称定重
量，超声 50min，放冷，再称定重量，用 60%甲醇溶液补足减
失的重量，摇匀，滤过，取续滤液，即得［5］。
2. 3 对照品溶液的制备 取落新妇苷对照品 6. 0mg，精密
称定，置于 50mL的量瓶中，用 60%甲醇溶解并稀释至刻度，
摇匀，即得落新妇苷对照品储备液(0. 12mg /mL)。精密量
取该储备液适量，用 60%甲醇稀释成浓度为 24μg /mL 的溶
液，即得。
2. 4 线性关系的考察 精密量取对照品储备液 1、2、4、6、
8、10μL，按照 2. 1 项下色谱条件分别进样测定，记录各色谱
峰面积，以峰面积(Y)对进样量(X，μg)进行线性回归，得回
归方程为:Y = 2. 13 × 106 X － 2. 62 × 104(r = 0. 9996)，落新
妇苷在 0. 12 ～ 1. 2μg线性范围内与峰面积成良好线性关系。
2. 5 精密度试验 精密量取对照品溶液(24μg /mL)10μL，
按照 2. 1 项下色谱条件，连续进样 6 次测定，记录各次峰面
积。结果得落新妇苷峰面积的 ＲSD 为 0. 95%，表明本方法
精密度良好。
2. 6 稳定性试验 取同一批号(1 批)样品按照 2. 2 项下方
法制备供试品溶液，分别于 0、2、4、6、8、10h 精密量取 10μL
进样测定，记录各次峰面积，计算得落新妇苷峰面积的 ＲSD
为 1. 26%，表明供试品溶液在 10h内稳定。
2. 7 重复性试验 取同一批号(1 批)样品 6 份，每份 5. 0g，
按 2. 2 项下方法制备供试品溶液，精密量取各溶液 10μL，注
入液相色谱仪，按外标法计算落新妇苷的含量。6 份样品中
落新妇苷的平均含量为 0. 0159%，其 ＲSD为 1. 92%，表明方
法的重复性良好。
2. 8 加样回收试验 取已知含量的同一批(1 批)样品 6
份，每份约 2. 5g，分别加落新妇苷对照品溶液(浓度为
0. 41mg /mL)1mL，按照 2. 2 项下方法制备供试品溶液，精密
量取 10μL，注入色谱仪，记录落新妇苷峰面积，计算回收率，
结果见表 1。
表 1 回收率试验结果
取样量
(g)
样品含量
(mg)
加入量
(mg)
测定量
(mg)
回收率
(%)
平均回收
率(%)
ＲSD
(%)
2. 5081 0. 3993 0. 41 0. 8006 97. 88
2. 5092 0. 3995 0. 41 0. 8019 98. 15
2. 4986 0. 3978 0. 41 0. 8042 99. 13 98. 19 0. 82
2. 5017 0. 3983 0. 41 0. 8037 98. 89
2. 5084 0. 3993 0. 41 0. 7964 96. 84
2. 5038 0. 3986 0. 41 0. 8013 98. 22
2. 9 样品测定 取不同批号的样品，分别按前述供试品溶
液制备方法及色谱条件，测定，计算样品中落新妇苷的含
量，结果见表 2。
表 2 复方菝葜颗粒中落新妇苷含量(n = 2)
编号 批号 落新妇苷含量(%)
1 1 批 0. 0159
2 2 批 0. 0167
3 3 批 0. 0142
3 讨 论
3. 1 样品处理方法的选择 比较水浴中回流和超声两种提
取方法，所得结果证明超声提取完全，且操作简便，补液少，
故采用超声法提取。
3. 2 流动相的筛选 本实验对甲醇 －水、甲醇 －冰醋酸水
溶液这两种流动相系统进行了比较筛选，甲醇 －水系统无
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电针对缺血再灌注大鼠脑内小胶质细胞活化的影响
楼志来1，俞国尧2
(1. 浙江大学医学院附属第二医院，浙江 杭州，310000;
2. 浙江省杭州市萧山区第一人民医院，浙江 杭州，310000)
［摘要］ 目的:探讨电针对缺血再灌注损伤模型大鼠脑内小胶质细胞活化的抑制作用。方法:将 54 只 SD大鼠随机分为
假手术组(6 只)、模型组(24 只)、电针组(24 只)，再将模型组、电针组分成再灌注 3、12、24、48h 4 个亚组，每亚组 6 只。模型
组、电针组予制备缺血再灌注模型，其中模型组造模后不予电针治疗，电针组造模后即行电针治疗，取穴百会和大椎。各组大
鼠到达预定时间点，将脑组织固定在 4%多聚甲醛固定液中保存，行免疫组化染色，检测 OX －42 阳性小胶质细胞的活化情况。
结果:各组缺血再灌注模型大鼠缺血侧顶叶皮层 OX －42 阳性细胞数较假手术组增多，差异具有统计学意义(P ＜ 0. 01);模型
组 OX －42 阳性细胞在 Ｒ3h明显增多，Ｒ24h达高峰，然后呈下降趋势;Ｒ24h与 Ｒ3h相比，差异具有统计学意义(P ＜ 0. 01);电
针组 OX －42 阳性细胞数较模型组均有所减少，除 Ｒ3h外，其余各组差异均有统计学意义(P ＜ 0. 05)。结论:电针百会穴、大
椎穴能抑制缺血再灌注损伤模型大鼠脑内小胶质细胞的活化，从而起到神经保护的作用。
［关键词］ 电针;缺血再灌注;小胶质细胞;实验研究
［中图分类号］Ｒ285. 5 ［文献标识码］A ［文章编号］1003 － 7705(2014)11 － 0165 － 03
基金项目:浙江省自然科学基金资助项目(编号:Y205389)
第一作者:楼志来，男，医学硕士，医师，研究方向:针灸临床治疗
Effect of electroacupuncture on activation of brain microglial cells in
rats with ischemia － reperfusion injury
LOU Zhi － lai1，YU Guo － yao2
(1. The Second Affiliated Hospital of Zhejiang University School of Medicine，Hangzhou 310000，Zhejiang，China;
2. The First Peoples Hospital of Xiaoshan District，Hangzhou 310000，Zhejiang，China)
Abstract:Objective:To investigate the inhibitory effect of electroacupuncture on the activation of brain mi-
croglial cells in the rat model of ischemia － reperfusion injury. Methods:Fifty － four Sprague － Dawley rats were
randomly divided into sham － operation group(n =6)，model group(n = 24) ，and electroacupuncture group (n = 24)
. Each rat in the model group and electroacupuncture group underwent ischemia － reperfusion for 3，12，24，or 48 h，
with 6 rats in each subgroup. After the rat model of ischemia － reperfusion injury was established，the rats in the
electroacupuncture group received electroacupuncture at Baihui and Dazhui acupoints. After treatment，
檿檿檿檿檿檿檿檿檿檿檿檿檿檿檿檿檿檿檿檿檿檿檿檿檿檿檿檿檿檿檿檿檿檿檿檿檿檿檿檿檿檿檿
brain tissues
论怎样调节两者比例均未得良好峰形的峰，而换用甲醇 －
0. 3%冰醋酸水溶液系统作为流动相时得到的落新妇苷峰
形好，柱效高，故经试验最终选定甲醇 － 0. 3%的冰醋酸水溶
液作为本实验的流动相。
3. 3 测定波长的选择 落新妇苷在 291nm 波长附近有最
大吸收，故选用 291nm作为测定波长，以保证测定结果的准
确性。本文建立了 ＲP － HPLC测定复方菝葜颗粒中落新妇
苷含量的方法，操作简便，测定结果准确，方法重复性好，可
作为复方菝葜颗粒质量控制的有效方法。
参考文献
［1］ 段本振，曲玮，梁敬钰 . 菝葜属植物的化学成分研究进展［J］.
海峡药学，2013，25(8):7 － 13.
［2］ 李广诚，董克礼，胡灿红 . 复方菝葜颗粒对非小细胞肺癌
A549 细胞 Bcl － 2 和 Bax 基因表达的影响［J］. 中南大学学
报，2007，32(2):312 － 315.
［3］ 张清峰，聂海纯，郑国栋，等 . 落新妇苷的理化性质与生物活
性研究进展［J］. 现代食品科技，2012，28(12):1834 － 1838.
［4］ 易艳，刘阳，王实强，等 . 11 种湖南产菝葜属植物和菝葜中落
新妇苷的含量比较［J］. 湖南中医杂志，2011，27(2):
110 － 111.
［5］ 中华人民共和国药典编辑委员会 . 中华人民共和国药典(一
部)［M］. 北京:中国医药科技出版社，2010:290．
(收稿日期:2014 － 04 － 10)
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第 30 卷第 11 期
2014 年 11 月 HUNAN JOUＲNAL OF TＲADITIONAL CHINESE MEDICINE
Vol. 30 N0. 11
Nov 2014