全 文 ：目前，白芷种植有秋播和春播两种，以秋播为好，且一般第二年 7
～ 9 月采收，正处于果实成熟期，与成分积累过程相符。王梦月
等［13］认为白芷根中香豆素类成分主要存在于皮层及韧皮部中，
木质部中不含香豆素类成分。通过我们对杭白芷根横切面的观
察可知分泌道多分布在根的皮层、韧皮部中，而分泌道是细胞后
含物合成和积累的主要部位，其结构发生及数量与香豆素等后含
物的合成和积累可能存在密切的关系，这为今后进一步研究植物
结构和药用成分含量变化提供了方向。同时，通过对白芷根中药
用成分的动态变化进行研究，为今后研究白芷中主要成分积累过
程与结构变化提供了很好的基础，对指导白芷药材原植物的采收
及其开发利用具有重要意义。
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收稿日期:2014-12-31; 修订日期:2015-05-14
修订日期:南京军区科技创新项目(No． 13MS067);
南京市药学会 －常州四药医院药学科研基金(No． 2013YX018)
作者简介:蔡 鹰(1967-)，女(汉族)，江苏宜兴人，中国人民解放军第四
五四医院副主任药师，博士学位，主要从事中药学研究工作．
作者简介:黄重发(1962-)，男(汉族)，安徽安庆人，中国人民解放军第四
五四医院主任药师，硕士研究生导师，硕士学位，主要从事中药制剂分析
工作．
白茅根药材水溶性成分的 HPLC-DAD指纹图谱研究
蔡 鹰1，陆 瑜1，邱蓉丽2，纪永章1，龚 琳1，黄重发1*
(1．中国人民解放军第四五四医院，江苏 南京 210002; 2．南京中医药大学，江苏 南京 210002)
摘要:目的 建立白茅根药材水溶性成分的指纹图谱。方法 采用 HPLC － DAD 检测，色谱条件:Dikma Platisil ODS C18
(4． 6 mm × 250 mm，5μm)。流动相:0． 1%磷酸水 －乙腈梯度洗脱，流速 1． 0 ml· min － 1，30℃柱温。结果 测定了绿原酸
含量 ，构建了白茅根药材的指纹图谱，结论 该法准确 ，重复性好 ，可作为白茅根药材的质控方法。通过和标准指纹谱的
相似度对比，未知样品可以被鉴别真假和质量优劣分类。
关键词:白茅根; 绿原酸; 高效液相色谱法; 指纹图谱
DOI标识:doi:10． 3969 / j． issn． 1008-0805． 2015． 08． 049
中图分类号:Ｒ284． 1 文献标识码:A 文章编号:1008-0805(2015)08-1929-03
白茅根为禾本科植物白茅 Imperata cylindrical Beauv． var． ma-
jor(Nees)C． E． Hubb 的干燥根茎，全国各地均产。具有清热利
尿，保肝的功效，临床应用频率非常高。研究表明，白茅根的活性
成分较少，且不是十分明确。赵燕燕等［1］采用 ＲP － HPLC 法对
10个产地的白茅根的氯仿提取物进行了指纹图谱的研究，用 4，7
－二甲氧基 － 5 －甲基 －香豆素作为对照峰。熊科元［2］比较了
不同产地白茅根中 2 种主要酚酸类成分(香草酸、对羟基肉桂
酸)的含量，香草酸的平均含量为 54． 85μg /g，对羟基肉桂酸的平
均含量为 28． 86μg /g。王莹［3］优选白茅根水提物中绿原酸的最
佳提取工艺，测定了绿原酸的含量 0． 139%。2010 版《中国药典》
对白茅根药材质量控制只有规定水溶性浸出物大于 28%。由于
临床白茅根多煎煮入药，本文建立了白茅根药材中水溶性成分的
HPLC指纹图谱。并对不同产地的白茅根中绿原酸进行了含量
比较，为白茅根的质量评价提供了依据。
1 仪器与材料
1． 1 仪器 Agilent 1260 Series 高效液相色谱仪(包括四元梯度
泵、在线脱气机、自动进样器、柱温箱、DAD 检测器、Agilent Chem
Station 化学工作站)，安捷伦科技有限公司提供。
1． 2 试药 绿原酸(Chlorogenic acid，20131009，上海源叶生物科
技有限公司)乙腈(Dikma公司，色谱纯);甲醇、磷酸均为分析纯
(江苏百林科技有限公司)，哇哈哈纯净水。
1． 3 药材 从南京市药材公司等购买 18 个批号白茅根药材，经
南京中医药大学中药鉴定教研室乐魏副教授鉴定均为正品药材。
1． 4 数据处理软件 中药色谱指纹图谱相似度评价系统
2004AB版 (国家药典委员会)，将测试数据导入该软件 ，经选峰
，设定匹配模板 ，将谱峰自动匹配 ，然后设定标准模板 ，进行谱
峰差异性评价和整体相似性评价。
2 方法与结果
2． 1 色谱条件 色谱柱:Dikma Platisil ODS C18(250mm × 4． 6
mm，5μm);流动相:A:乙腈，B:0． 1%磷酸水溶液，梯度洗脱方
法:0 ～ 40 min，A 为 5 % ～12 %;40 ～ 80min ，A 为 12 % ～22%;
保持 5 min ，体积流量 1． 0 ml·min －1柱温:30℃，检测波长:
320nm。
2． 2 测定溶液的制备
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2． 2． 1 供试品溶液制备 白茅根 15g，加 10 倍量水煎煮两次，合
并水煎液，减压浓缩至 25ml，量取 10ml 蒸干，用 50%甲醇 20ml
溶解，0． 45μm微孔滤膜滤过，取续滤液作为供试品溶液。20μl
进样。
2． 2． 2 绿原酸工作曲线的制定 精密称取绿原酸对照品16． 5mg，
置 10ml棕色容量瓶，50%甲醇溶解并稀释至刻度，作为贮备液，
再取 2ml置于 10ml棕色容量瓶中，50%甲醇定容至刻度，制成对
照品溶液，浓度为 0． 33mg·ml －1。取 2． 5，5，7． 5，10，15μl 进样。
以峰面积为纵坐标 ，以进样量为横坐标 ，得直线回归方程为:Y
= 2109 X + 34． 92 ，绿原酸线性关系范围在 0． 825 ～ 4． 95μg。r
= 0． 9999。
2． 2． 3 精密度试验 用 0． 33mg /ml的緑原酸 50%甲醇对照品溶
液连续进样 5 次，每次 5μl，结果峰面积 ＲSD为 1． 9%。
2． 2． 4 重复性试验 称取 20140325 批号的药材样品 15g，照
“2． 2． 1”方法制备样品 ，平行 5 份 ，进样 20μl。结果测得绿原酸
含量的 ＲSD为 2． 8%。
2． 2． 5 稳定性试验 取 0． 33mg /ml的緑原酸 50%甲醇对照品溶
液，分别于 0，24，28，32，48h进样 ，每次 10μl ，测定峰面积计算含
量 ，ＲSD为 1． 1%，说明样品稳定性好。
2． 2． 6 加样回收试验结果 称取 20140325 批号的药材 7． 5g(绿
原酸含量 0． 3034 mg·g －1)，加入 1． 65 mg·ml －1的绿原酸对照
品溶液 1ml，照“2． 2． 1”方法制备样品。结果见表 1。
表 1 加样回收试验结果
取样量
/g
绿原酸
含量 /mg
绿原酸添
加量 /mg
实测量
/mg
緑原酸回
收率 /%
ＲSD
/%
7． 526 2． 283 1． 65 3． 980 102． 1
7． 601 2． 306 1． 65 3． 878 96． 6
7． 638 2． 317 1． 65 3． 923 98． 1 98． 94
7． 422 2． 252 1． 65 3． 939 101． 6
7． 582 2． 300 1． 65 3． 864 96． 3
2． 2． 7 样品含量测定 精密吸取上述 18 个样品供试液各 20μl，
依次注入 HPLC仪，进行色谱分析，所得到的数据见表 2 所示。
从表 2 看出，绿原酸含量最小 0． 1030mg· g －1，最大 1． 3552
mg·g －1，相差 13 倍，均为江苏产。总体而言，绿原酸含量与产地
没有明显相关性。
表 2 各白茅根药材样品中绿原酸含量测定
样品号 批号 所购买单位 产地
绿原酸含量
/mg·g － 1
1 20140212 市药材 安徽 0． 4280
2 20140203 市药材 安徽 0． 5290
3 20140325 市药材 安徽 0． 3034
4 20140308 市药材 安徽 0． 1532
5 20140416 市药材 安徽 0． 4253
6 20140411 市药材 安徽 0． 4766
7 20140523 市药材 江苏 0． 1785
8 20140624 市药材 江苏 0． 5485
9 20130718 市药材 江苏 1． 3552
10 20140418 市药材 江苏 0． 4606
11 20140707 百姓缘药店 湖北 0． 8125
12 20140729 同仁堂药店 江苏 0． 3513
13 20140817 百信药店 山东 0． 1199
14 20140510 同仁堂药店 江苏 0． 3938
15 20140612 百信药店 江苏 0． 1719
16 20140619 三九药店 江苏 0． 1030
17 20140211 市中医院 江苏 0． 3215
18 20140403 益丰药店 江苏 0． 2661
2． 3 色谱指纹图谱的方法学考察
2． 3． 1 精密度试验 取 20140325 批号供试品溶液，连续进样 5
次检测，直观观察各指纹图谱的全貌无明显差异，结果用“中药
色谱指纹图谱相似度评价系统 2004A版计算软件”计算，相似度
大于 0． 99，表明精密度好，符合要求［4］。
2． 3． 2 稳定性试验 取 20140325 供试品溶液，在 0，24，28，32，
48h进行检测，直观观察指纹图谱的全貌无明显变化，结果用“中
药色谱指纹图谱相似度评价系统 2004A版计算软件”计算，相似
度大于 0． 97，表明在 48h内供试品溶液是稳定的［4］。
2． 3． 3 重复性试验 取 20140325 批号白茅根药材，按“2． 2． 1”供
试品溶液的制备方法处理，制备供试品溶液 5 份，分别进样测定，
观察各指纹图谱无明显差异，结果用“中药色谱指纹图谱相似度
评价系统 2004A版计算软件”计算，相似度大于 0． 95，表明方法
重现性良好［4］。
2． 4 色谱指纹图谱的构建与解析［5 ～ 10］ 用所测 10 批南京市药
材公司所购优质药材制备的白茅根的指纹图谱数据导入“中药
色谱指纹图谱相似度评价系统 2004A 版(五点校正，中位数
法)”，该软件具有生成对照图谱功能，相似度计算方法为夹角余
弦法，可支持多点校正。经相似度计算及匹配结果有 14 个主要
共有峰。见图 1 和表 3。建立的共有模式见图 2。14 个主要共有
峰占总峰面积的 90%以上，非共有峰占总峰面积小于 10%。根
据对照品的保留时间可以判断出 8 号峰为绿原酸的峰。10 批白
茅根药材 HPLC图谱尽管有细微差别，但总体相似度较高，10 批
药材相似度大于 0． 9，表明各批次药材之间一致性较佳，质量比
较稳定，不受产地和切片形状影响。
S1 － 20140212 S2 － 20140203 S3 － 20140325 S4 － 20140308
S5 － 20140416S6 － 20140411 S7 － 20140523 S8 － 20140624
S9 － 20130718 S10 － 20140418
图 1 10 批白茅根指纹图谱
图 2 建立的共有模式图谱
2． 5 按指纹图谱考察 8 批药材质量 将 8 个批号的从同仁堂等
所购药材指纹图谱数据导入中药色谱指纹图谱相似度评价系统
2004B版，与图 2 对照图谱(共有模式)相比，结果见图 3，表 4，批
号 20140707 江苏产样品相似度在 0． 8 以下，其他 7 批相似度均
在 0． 8 以上。说明市场上白茅根药材质量大多数稳定，个别相差
较大。8 个批号药材与形态鉴定结果一致，无伪品药材。
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时珍国医国药 2015 年第 26 卷第 8 期 LISHIZHEN MEDICINE AND MATEＲIA MEDICA ＲESEAＲCH 2015 VOL． 26 NO． 8
S1 － 20140707 S2 － 20140729 S3 － 20140817 S4 － 20140510
S5 － 20140612 S6 － 20140619 S7 － 20140211 S8 － 20140403
图 3 共有模式与 8 批样品的指纹谱比对
3 讨论
药材水煎液杂质太多，滤过后直接进样不合适，水浴蒸干后
用甲醇、50%甲醇为溶剂对样品进行溶解，滤液作为供试品，发现
50%甲醇溶液出峰较多，蛋白质、多糖等杂质大多也能除去，故采
用 50%甲醇作为提取溶剂。
利用 DAD检测数据，重点选择 210，230，240，254，270，280，300，
320mm波长下的指纹图谱，结合色谱峰个数和峰强度综合考察。结
果 320nm下的指纹图谱信息量最为丰富，且绿原酸最大吸收波长为
327nm，故选择 320nm作为制定指纹谱的检测波长。
流动相的选择，分别以乙腈 － 1%乙酸、乙腈 － 0． 1%磷酸、乙
腈 － 0． 1%磷酸 － 0． 1%三乙胺等不同浓度、不同比例的流动相系
统进行梯度洗脱试验，比较不同洗脱条件的色谱图，选择分离效
果好，峰数多、峰形佳的最佳色谱条件，最终确定以乙腈 － 0． 1%
磷酸为流动相进行梯度洗脱。
表 3 10 批白茅根的相似度评价
批次 S1 S2 S3 S4 S5 S6 S7 S8 S9 S10 对照指纹图谱
S1 1 0． 949 0． 938 0． 973 0． 956 0． 97 0． 907 0． 978 0． 949 0． 947 0． 977
S2 0． 949 1 0． 922 0． 953 0． 962 0． 935 0． 874 0． 932 0． 909 0． 907 0． 956
S3 0． 938 0． 922 1 0． 961 0． 946 0． 903 0． 839 0． 946 0． 915 0． 875 0． 945
S4 0． 973 0． 953 0． 961 1 0． 973 0． 95 0． 921 0． 981 0． 947 0． 94 0． 983
S5 0． 956 0． 962 0． 946 0． 973 1 0． 946 0． 897 0． 954 0． 928 0． 935 0． 972
S6 0． 97 0． 935 0． 903 0． 95 0． 946 1 0． 917 0． 967 0． 942 0． 962 0． 976
S7 0． 907 0． 874 0． 839 0． 921 0． 897 0． 917 1 0． 93 0． 86 0． 95 0． 934
S8 0． 978 0． 932 0． 946 0． 981 0． 954 0． 967 0． 93 1 0． 954 0． 954 0． 985
S9 0． 949 0． 909 0． 915 0． 947 0． 928 0． 942 0． 86 0． 954 1 0． 904 0． 947
S10 0． 947 0． 907 0． 875 0． 94 0． 935 0． 962 0． 95 0． 954 0． 904 1 0． 969
对照指纹图谱 0． 977 0． 956 0． 945 0． 983 0． 972 0． 976 0． 934 0． 985 0． 947 0． 969 1
表 4 8 批白茅根与共有模式相似度计算
批次 Ｒ S1 S2 S3 S4 S5 S6 S7 S8
Ｒ 1 0． 786 0． 882 0． 888 0． 857 0． 897 0． 911 0． 901 0． 878
S1 0． 786 1 0． 837 0． 733 0． 75 0． 833 0． 724 0． 719 0． 655
S2 0． 882 0． 837 1 0． 791 0． 819 0． 889 0． 864 0． 814 0． 799
S3 0． 888 0． 733 0． 791 1 0． 771 0． 823 0． 829 0． 828 0． 813
S4 0． 857 0． 75 0． 819 0． 771 1 0． 806 0． 8 0． 793 0． 783
S5 0． 897 0． 833 0． 889 0． 823 0． 806 1 0． 888 0． 846 0． 841
S6 0． 911 0． 724 0． 864 0． 829 0． 8 0． 888 1 0． 815 0． 913
S7 0． 901 0． 719 0． 814 0． 828 0． 793 0． 846 0． 815 1 0． 857
S8 0． 878 0． 655 0． 799 0． 813 0． 783 0． 841 0． 913 0． 857 1
比较了 Hanban ODS C18、Dikma ODS C18等不同牌号的色谱柱
的分离效果，Dikma色谱柱分离效果好些。
本文采用市药材公司所购优质药材建立标准指纹图谱，又从
同仁堂等药店购买 8 批普通药材，与标准共有模式比较，相似度
7 批 ＞ 0． 8，一批 ＜ 0． 8，总的来说相似度不是太高，与产地无明显
相关。所以，虽然白茅根是一个价廉的药材，即使是正品药材，成
分含量相差也比较大，仍需控制药材质量。
从结果看出，绿原酸含量的高低与指纹谱相似度高低没有相
关性。本实验结果进一步证明了色谱指纹图谱具有“整体性”和
“模糊性”的基本属性，共有峰的选择使指纹图谱具有了指纹特
征，而相似度的评价充分体现了图谱的模糊性，从整体上评价了
样品之间的相似程度。本实验中采用的 HPLC 分析方法操作简
单，稳定性、重现性、精密度均较好，具有广泛的适用性，对白茅根
药材的质量具有较好的评价性。
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LISHIZHEN MEDICINE AND MATEＲIA MEDICA ＲESEAＲCH 2015 VOL． 26 NO． 8 时珍国医国药 2015 年第 26 卷第 8 期