全 文 ：第 40 卷第 19 期
2012 年 10 月
广 州 化 工
Guangzhou Chemical Industry
Vol. 40 No. 19
October. 2012
HPLC法测定滇桂艾纳香片中原儿茶酸的含量
黄 园，廖厚知，梁月钊，梁 霞，庞继梅，廖九明
( 广西博科药业有限公司，广西 南宁 530007)
摘 要:建立了滇桂艾纳香片中原儿茶酸的含量测定方法。用岛津 VP － ODS色谱柱 (150 × 4. 6 mm，5 μm) ;甲醇 － 1%冰
醋酸溶液 (7∶93)为流动相;检测波长为 256 nm，流速 1. 0 mL·min －1。结果表明:原儿茶酸在 0. 041 ～ 0. 329 μg范围内与峰面
积呈良好线性关系，r = 0. 9999，原儿茶酸平均加样回收率为 98. 55%，RSD 为 1. 04%，精密度、稳定性良好。本方法可靠性高，
分离度、准确性、重复性好，适用于滇桂艾纳香片中原儿茶酸的含量测定。
关键词:高效液相色谱法;滇桂艾纳香片;原儿茶酸
中图分类号:R917 文献标识码:A 文章编号:1001 － 9677(2012)19 － 0099 － 03
作者简介:黄园 (1980 －) ，男，工程师，主要从事药物开发和研究。
HPLC Determination of Protocatochuic Acid in Diangui ainaxiang Pian
HUANG Yuan，LIAO Hou － zhi，LIANG Yue － zhao，LIANG Xia，PANG Ji －mei，LIAO Jiu －ming
(Guangxi Boke Pharmaceutical Company Ltd. ，Guangxi Nanning 530007，China)
Abstract:To develop an HPLC method for determination of protocatochuic acid in Diangui ainaxiang Pian，Shimad-
zu VP － ODS (4. 6 mm × 150 mm，5 μm)was used as chromatographic column. The mobile phase was a mixture of
methanol － 1% acetic acid (10∶90) ，the flow － rate was 1 mL · min －1. The detector wavelength was 256 nm. The re-
sults showed that the calibration curve was linear over the range of 0. 041 ～ 0. 329 μg for protocatochuic acid (r =
0. 9999) ，the average recovery of protocatochuic acid was 98. 55%. The precision and stability were fine. The proposed
method may be used in the quantitative analysis of protocatochuic acid in Diangui ainaxiang Pian with high reliability，
separation，accuracy，repeatability
Key words:HPLC;Diangui ainaxiang Pian;Protocatochuic Acid
滇桂艾纳香片为妇血康颗粒改剂型而来，由滇桂艾纳香经
提取精制而成，具有活血化瘀，止血调经的功效，用于瘀血阻
滞所致月经过多，经期过长，产后恶露不绝等症。妇血康颗粒
收载于《中成药地方标准上升国家标准》 (妇女分册)［1］，标
准中采用高效液相色谱法测定滇桂艾纳香中原儿茶酸的含量。
另外，高效液相色谱法测定妇血康颗粒或滇桂艾纳香中原儿茶
酸的含量尚有不少报道［2 － 10］。故参考上述方法，对本品中的原
儿茶酸进行了含量测定研究。结果表明，分离效果良好，线
性、稳定性、重现性、回收率等方法学考察均符合含量测定的
要求，可用于滇桂艾纳香片的质量控制。
1 仪器与试药
日本岛津 LC － 10ATvp 高效液相色谱仪，日本岛津 SPD －
10Avp紫外检测器，日本岛津公司;梅特勒 －托利多 AB265 － S
电子分析天平，梅特勒 －托利多集团;日本岛津 UV2450 型紫
外可见分光光度计，日本岛津公司。
原儿茶酸化学对照品 (批号:110809 － 200503) ，购于中
国食品药品检定研究院;滇桂艾纳香片 (批号:120301) ，广
西博科药业有限公司;甲醇为色谱纯，水为自制超纯水，冰醋
酸 (分析纯)。
2 色谱条件及系统适用性
色谱柱为岛津 VP － ODS (4. 6 mm × 150 mm，5 μm) ;流动
相为甲醇 － 1%冰醋酸溶液 (7∶93) ，流速:1. 0 mL /min;柱
温为室温;检测波长 256 nm;进样量为 20 μL。理论板数按原
儿茶酸峰计算应不低于 5000。
3 对照品及供试品溶液的配制
3. 1 对照品溶液的制备
取原儿茶酸对照品适量，精密称定，加 50%甲醇制成每
1 mL 含原儿茶酸 8 μg的溶液，即得。
3. 2 供试品溶液的制备
取本品，除去薄膜衣片，精密称定，研细，取 0. 6 g，精密称
定，置 50 mL具塞锥形瓶中，加水 30 mL、盐酸 1 mL，超声处理
10 min，滤过，滤液转移至分液漏斗中，容器及滤渣用 0. 1%盐酸
溶液 20 mL分次洗涤，洗液并入同一分液漏斗中，用乙醚振摇提
取 4次，每次 25 mL，合并乙醚液，蒸干，残渣加甲醇 10 mL使溶
解并稀释至 25 mL量瓶中，加水至刻度，摇匀，即得。
3. 3 阴性样品溶液
取辅料 (相当于本品中辅料的量) ，按上述“供试品溶液
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的制备”方法制备不含滇桂艾纳香的阴性样品溶液。
4 测定波长的选择
取上述对照品溶液用紫外可见分光光度计于 200 ～ 400 nm
范围内扫描，绘制光谱图，结果原儿茶酸在 256 nm 处有最大
吸收峰，故选择 256 nm为检测波长。
5 专属性试验
图 1 对照品色谱图
Fig. 1 Rreference substances chromatogram
图 2 滇桂艾纳香片样品色谱图
Fig. 2 Sample of Diangui ainaxiang Pian chromatogram
图 3 滇桂艾纳香阴性样品色谱图
Fig. 3 Negative sample without Herbra Blumeae Ripariae chromatogram
分别吸取对照品溶液、供试品溶液及不含滇桂艾纳香的阴
性样品溶液各 20 μL，注入液相色谱仪，绘制色谱图。结果见
图 1 ～图 3，表明其他组分对测定无干扰。
6 线性关系考察
精密称取原儿茶酸对照品 10. 28 mg，置 100 mL 量瓶中，
加甲醇溶解并稀释至刻度，摇匀，精密量取 0. 5 mL、1 mL、
2 mL、3 mL、4 mL，分别置 25 mL 量瓶中，加 50%甲醇至刻
度，摇匀，按上述色谱条件，分别进样 20 μL，测定，以峰面
积积分值 A对原儿茶酸进样量 C (μg)进行回归分析，得回归
方程:A =3. 40 × 106C － 2. 92 × 103，r = 0. 9999。表明原儿茶酸
进样量在 0. 041 ～ 0. 329 μg范围内线性关系良好。
7 精密度试验
分别精密吸取 8. 2 μg /mL的原儿茶酸对照品溶液，按上述
色谱条件，重复进样 5 次。结果原儿茶酸峰面积平均值为
551664，RSD为 0. 68%，表明仪器精密度良好。
8 稳定性试验
取供试品溶液，分别在放置 0、2、4、6、8、24 h 时，依
法测定原儿茶酸的峰面积，结果峰面积平均值为 561549，RSD
为 0. 79%，表明供试品溶液在 24 h内稳定性良好。
9 重复性试验
取同一批样品，按供试品溶液的制备方法制备 6 份供试品
溶液，依法测定，计算原儿茶酸的含量及相对标准偏差，结果
原儿茶酸的平均含量为 0. 137 mg /片，RSD 为 0. 89%，表明方
法重复性良好。
10 加样回收率试验
精密称取已测知含量的样品 (0. 137 mg/片，即 0. 341 mg/g)
0. 3 g，再精密加入 1. 03 mg /mL的原儿茶酸对照品溶液 (精密
称取原儿茶酸对照品 10. 30 mg，置 10 mL量瓶中，加甲醇使溶
解并稀释至刻度，摇匀，即得)0. 1 mL，按“供试品溶液的制
备”方法试验，平行 6 份，依法测定，计算回收率，结果原儿
茶酸的平均回收率为 98. 55%，RSD 为 1. 04%，表明方法回收
率良好。结果见表 1。
表 1 加样回收率试验
Table 1 Experiments of recovery
No. 取样量 / g 样品量 /mg 加入量 /mg 测得量 /mg 回收量 /mg 回收率 /% 平均回收率 /% RSD /%
1 0. 3071 0. 105 0. 103 0. 206 0. 101 98. 06
2 0. 2954 0. 101 0. 103 0. 201 0. 100 97. 09
3 0. 3009 0. 103 0. 103 0. 205 0. 102 99. 03
4 0. 3067 0. 105 0. 103 0. 208 0. 103 100
5 0. 3165 0. 108 0. 103 0. 209 0. 101 98. 06
6 0. 3051 0. 104 0. 103 0. 206 0. 102 99. 03
98. 55 1. 04
11 讨 论
比较了妇血康颗粒原标准的酸水提取，乙醚、乙酸乙酯回
流提取，20%甲醇超声处理提取等方法，结果本方法比原标准
方法操作简便，需时短。另外，本测定方法简便可行、重复
性、准确性好，可用于滇桂艾纳香片的质量控制。
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到课堂上，在学习的过程中同学生一起讨论，指导学生根据已
掌握的知识提出问题、积极思考、解决问题，最后教师归纳总
结，从而增加师生的课堂互动性，调动学生的积极性、主动性、
独立性和创造性。同时，要特别注重学生数据处理能力的培养，
提高学生使用计算机处理数据的能力。比如，标准曲线法的教
学中，笔者会直接教会学生应用 excel 和 origin 软件处理各种测
试方法中的标准曲线数据及线性拟合，提高学生分析数据的准
确性，掌握数据处理的技巧，增强理论学习的实用性，为学生
工作以后写论文、搞科研打下良好基础。此外，教师在教学过
程中，将分析化学的前沿课题，学术上的最新研究动态或自己
的科研内容适当地融入到理论教学中，笔者已尝试以每学期 2 －
3个专题讲座的形式将这些内容介绍给学生，使教学内容既生动
丰富又切合实际，从而拓宽学生的视野，激发学生的求知欲。
3 掌握实验基本技能，注重综合能力培养
分析化学实验是分析化学课程的重要组成部分，正确和熟
练地掌握化学实验的基本操作技能，培养学生严谨的工作作风
和实事求是的科学态度，能为学生将来从事化学教学和科研等
工作打下坚实的基础。据笔者了解，目前课程设置的内容多是
一些验证性和简单应用公式的实验，对学生而言没有新奇感，
题目设计不够灵活，不易提起学生的兴趣。首先，教学内容的
安排应更加贴近药学专业，学生会觉得分析化学实验对本专业
的学习非常有用，如自来水总硬度的测定、水果中抗坏血酸 Vc
含量的测定、感冒药中乙酰氨基酚含量的测定、镇痛药中阿司
匹林含量的测定、有机磷农药的色谱法测定、氢氧化铝片中氢
氧化铝含量的测定等实验，通过这样有针对性的实验项目促进
学生分析化学知识与专业实践的有机结合，使学生产生浓厚的
专业兴趣，学以致用能力得以较大提高。其次，加强学生实践
能力和创新精神的培养，提高学生的综合素质，已成为目前我
国高等药学教育改革的主要目标［3］。在完成基础验证性实验内
容后，可酌情安排简单的设计性实验，可将其作为实验考试内
容。教师给出实验题目，鼓励学生通过查阅文献资料，学习相
关理论进行方案设计，发挥学生的主观能动性，激发其创新意
识。实验后自行完成数据处理，考察学生解决问题和数据处理
的能力，老师通过考试调动了学生做实验的积极性。
就笔者近年来的教学感受，理论教学的老师应承担一部分
实验教学任务，特别是仪器分析实验部分。教师应在有限的时
间最大限度地提高课堂效率，对于理论课上提到的工作原理，
教师应边讲解边提问，同时帮学生联系到理论课上的内容，让
学生有对抽象的工作原理有最直观的理解。教师通过演示规范
正确的操作方法，并且抽出足够的时间让学生操作、演示，让
其他学生评价。通过教师理论联系实际，学生们相互学习讨论，
提高了课程教学效果及课堂效率，使学生真正成为学习的主体。
4 改革评价方法，重视能力考察
传统的笔试方式都是在期末进行考查，导致学生平时松散
毫无压力，部分学生不愿主动学习，甚至旷课、抄作业等情况
时有发生，学生过分依赖试前突击，公式死记硬背，无法灵活
运用。在教学过程中可以尝试多样化的考核方式。如章末小考
就是比较好的形式，小考考核可安排的简而精，考查基础知识
和基本原理，随堂进行，能极大程度上提高学生自主学习的积
极性［4］。另一方面，可以结合教学内容，让学生以研究小组的
形式撰写小论文并以 PPT形式汇报，在这一过程中，既培养了
相互合作的团队意识，又能使学生的基础理论知识在很大程度
上得到加强。通过思考，学生可以把书本上的知识转化为自己
的东西，这样便形成一个良性循环，学生的创新能力自然得到
提高。药学专业的分析化学课程最终评价体系为 “章末小考、
期末闭卷、课后作业、实验报告、论文汇报”相结合的评价方
式，力求学习效果的评价更合理，更有利于学生将学习的重点
放在培养创造性思维上，既考查了学生对基本知识、基本理论
的掌握，又能锻炼和提高学生的综合能力。
21 世纪的竞争归根结底是人才的竞争，21 世纪的分析化
学已成为一门综合性结构科学，通过基础课程的学习加强学生
的综合能力培养，培养适应社会进步和发展需要、具有市场竞
争力的“专业型”、“应用型”高素质人才，给分析化学从教者
提出了新的课题。教学研究无止境，我们仍需继续总结、探
索，以提高学生专业素养和能力为目标，为培养适合社会发展
的优秀药学人才作贡献。
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