全 文 ：收稿日期:2009 － 10 － 15
作者简介:贝京(1976 －)，男，学士，工程师，从事精细化工、
天然植物研究与色谱分析
doi:10. 3969 / j. issn. 1006 － 9690. 2010. 03. 013
高效液相色谱法测定蒲公英提取物中咖啡酸含量
贝 京1，于光福2
(1.江苏省生产力促进中心，江苏 南京 210042;2.南京逐陆医药科技有限公司，江苏 南京 210061)
摘 要 建立了一种高效液相色谱法测定蒲公英提取物中咖啡酸的含量。色谱柱为 DiamonsilTM(钻石)C18(4. 6
mm × 150 mm，5 μm)，流动相为甲醇 －磷酸盐缓冲液(1. 56 g磷酸二氢钠 /1 000 mL水，磷酸调节 pH值 3. 8 ～ 4. 0)
(体积比为 23∶77);检测波长为 323 nm，柱温为 40 ℃。研究结果表明:线性范围为 2. 44 ～ 14. 64 mg /L，回归方程为
y = 41 742x + 2 287. 9 相关系数为 R2 = 0. 999 6，加标平均回收率为 97. 5%。本方法具有灵敏度高、重现性好、准确
度高、操作简便等特点。
关键词 高效液相色谱法;蒲公英提取物;咖啡酸
中图分类号:R284. 1 文献标识码:A 文章编号:1006 － 9690(2010)03 － 0054 － 03
Determination of Coffeic acid in Extract of Herba Taraxaci by
High Performance Liquid Chromatographic Method
Bei Jing1，Yu Guangfu2
(1. Productivity Centre of Jiangsu Province，Nanjing 210042，China;2. Nanjing Zhulu Pharmaceutical
Technology Co.，Ltd，Nanjing 210042，China)
Abstract A high performance liquid chromatographic cethod has been developed for determination of
coffeic acid in extract of herba taraxaci. The chromatographic conditions were as follows:DiamonsilTM C18
(4. 6 mm ×150 mm，5 μm)with methol H3PO4(1. 56 g NaH2PO4 /1 000 mL water，pH3. 8 － 4. 0)buff-
er(23∶77，volume)as mobile phase and detector at 323 nm. The calibration curve showed good linearity
(R2 = 0. 999 6). And the averae recovery of the method was 97. 5% . Sensitive，reproducible and accu-
rate，this method is particularly suitable for determination of coffeic acid in extract of herba taraxaci.
Key words high performance liquid chromatography;extract of herba taraxaci;coffeic acid
蒲公英为菊科植物蒲公英 Taraxacum mongoli-
cum Hand. － Mazz.、碱地蒲公英 Taraxacum sinicum
Kitag.或同属数种植物的干燥全草。春至秋季花初
开时采挖，除去杂质，洗净，晒干。产于山西、河北、
江苏、山东及东北各地。蒲公英中含咖啡酸、蒲公英
甾醇(Taraxasterol)、蒲公英萜醇(Taraxerol)、蒲公英
素(Taracation)、β －谷甾醇、豆甾醇、黄酮类、皂苷、
挥发油、胆碱、菊糖和果胶等。其中咖啡酸具有广谱
抗菌作用，直接影响蒲公英作为药材的疗效。喷雾
剂、口服液等制剂中咖啡酸的测定方法已有报
道［1 － 2］，蒲公英药材咖啡酸的测定仅中国药典有所
规定［3］，但提取、测定方法各不相同。我们参考文
献报道，结合工作实际情况，建立了一种高效液相色
谱法测定蒲公英提取物中咖啡酸的含量。本方法具
有灵敏度高、重现性好、准确度高、操作简便等特点。
1 材料与方法
1. 1 仪器和试剂
仪器:LC －10AT型高效液相色谱仪、SPD － 10A
紫外检测器、柱温箱 HT － 230A(日本岛津公司)，
N2000 工作站(浙江大学)。
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第 29 卷第 3 期
2010 年 6 月
中 国 野 生 植 物 资 源
Chinese Wild Plant Resources
Vol. 29 No. 3
Jun. 2010
试剂:甲醇为色谱纯(上海振兴化工一厂);磷
酸二氢钠、磷酸、盐酸、乙酸乙酯均为分析纯、水为重
蒸馏水、咖啡酸对照品(中国药品生物制品检定所
供 编号 110885 － 200102)、蒲公英提取物(南京逐
陆医药科技有限公司制备)。
1. 2 色谱条件
色谱柱:DiamonsilTM (钻石)C18 (4. 6 mm ×
150 mm 5μm)，理论板数按咖啡酸峰计算应不低于
3 000，柱温 40 ℃;动相:以甲醇 －磷酸盐缓冲液(取
磷酸二氢钠 1. 56 g，加水使溶解成 1 000 mL，再加
1%磷酸溶液调节 pH值 3. 8 ～ 4. 0，即得)(体积比为
23∶77);流速:1 mL /min;检测波长:323 nm。
1. 3 实验方法
对照品储备液制备:精密称取在 110 ℃干燥至
恒重的咖啡酸对照品 12. 2 mg，置 100 mL 容量瓶
中，用甲醇溶解并定容至刻度，摇匀，作为咖啡酸对
照品储备液。
供试品溶液制备:
方法 1:精密称取蒲公英提取物 0. 1 g，加水
4 mL，稀盐酸 2 滴，摇匀，用乙酸乙酯提取 3 次，每次
10 mL，合并乙酸乙酯溶液，挥干，残渣用甲醇溶解，
转移至 25 mL量瓶中，加甲醇稀释并定容至刻度，摇
匀，滤过，取续滤液备分析用。
方法 2:精密称取蒲公英提取物 0. 1 g，置 25 mL
量瓶中，加入 5%甲酸的甲醇溶液并稀释定容至刻
度，摇匀，滤过，取续滤液，备分析用。
2 结果与讨论
2. 1 系统适应性试验
取 1. 3 节中咖啡酸对照品储备液 5 mL，置
50 mL量瓶中，加甲醇稀释并定容至刻度，摇匀，按
1. 2 节色谱条件进样 20 μL，结果本品理论板数按咖
啡酸峰计算为 1 568. 267，其中 HPLC图见附图 1。
2. 2 线性关系试验
分别精密量取 1. 3 节中咖啡酸对照品储备液溶
液 1. 0、2. 0、3. 0、4. 0、5. 0、6. 0 mL 置于 50 mL 量瓶
中，加甲醇至刻度，摇匀，制成系列浓度的标准溶液，
按 1. 2 节色谱条件分别进样 20 μL，记录峰面积，检
测结果见表 1。以浓度为横坐标，以峰面积为纵坐
标，进行一元线性回归，得回归方程:y = 41 742x +
图 1 咖啡酸系统适应性试验色谱图
2 287. 9，R2 = 0. 999 6 含量测定标准曲线图见图 2，
结果表明:本品在 2. 44 ～ 14. 64 mg /L范围内咖啡酸
浓度与色谱峰面积线形关系良好。
表 1 标准曲线绘制结果(n = 6)
浓度(mg /L) 2. 44 4. 88 7. 32 9. 76 12. 20 14. 64
峰面积(A) 105719 200284 310687 410776 515759 609373
图 2 咖啡酸标准曲线图
2. 3 供试品溶液制备方法的选择
分别精密吸取 1. 3 节中方法 1、方法 2 两种方
法制备的试供品溶液各 20 μL，按 1. 2 节色谱条件
注入色谱系统分析，试验结果见图 3 和图 4。由图 3
和图 4 试验结果表明，方法 1 制备的供试品溶液，咖
啡酸主峰与其他峰具有较好的分离度(分离度 >
1. 5)，方法 2 制备的供试品溶液，咖啡酸主峰与其
他峰不仅分离度较差，而且杂质峰较多，影响定量分
析，故采用方法 1 乙酸乙酯提取法处理试供样品，制
备供试品溶液。
图 3 方法 1 供试品制备液色谱分离效果图谱
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第 3 期 贝 京，等:高效液相色谱法测定蒲公英提取物中咖啡酸含量
图 4 方法 2 供试品制备液色谱分离效果图谱
表 2 咖啡酸含量测定进样精密度试验考察结果(n = 6)
序号 1 2 3 4 5 6
峰面积(A) 450914 451581 448193 451143 451068 449938
平均峰面积(A) 450473
RSD(%) 0. 28
2. 4 样品进样精密度试验
取蒲公英提取物咖啡酸含量测定项下的供试品
溶液，按 1. 2 节色谱条件进样 20 μL，平行操作 6
次，考察其进样精密度试验，结果见表 2。试验结果
表明，本品咖啡酸含量测定法进样精密度试验较好。
2. 5 溶液稳定性试验
按 1. 3 节方法 1 制备蒲公英提取物试样液和
1. 2 节色谱条件，分别于 0、2、4、6、8 h 进行测定，结
果见表 3。试验结果表明，本品咖啡酸含量测定供
试品溶液在放置 8 h内稳定。
表 3 溶液稳定性试验测定结果
样品 放置时间(h) 峰面积 RSD(%)
050215
0 450914
2 449938
4 455229
6 453746
8 452521
0. 47
2. 6 回收率试验
准确称取 0. 1 g已知咖啡酸含量的蒲公英提取
物 5 份，分别加入咖啡酸对照品溶液(398 μmg /mL)
1 mL，按 1. 3 节方法 1 制备样品试样液和 1. 2 节色
谱条件，测定并计算计算咖啡酸平均回收率为
97. 5%，相对标准偏差(RSD)为 1. 4%，结果见表 4。
结果表明，本测定方法准确度良好。
表 4 提取物中咖啡酸的加样回收率试验结果
样品
样品中咖啡
酸量(μg)
加入咖啡酸对
照品量(μg)
咖啡酸检
出量(μg)
回收率 平均值 RSD%
1 392. 8 398. 0 765. 5 96. 8
2 401. 1 398. 0 763. 9 95. 6
3 399. 3 398. 0 786. 9 98. 7
4 406. 6 398. 0 794. 1 98. 7
5 403. 5 398. 0 781. 5 97. 5
97. 5 1. 4
2. 7 重复性试验
分别精密称取 0. 1 g蒲公英提取物 6 份，按 1. 3
节方法 1 制备试样液和 1. 2 节色谱条件，分别测定
咖啡酸含量，考察其重复性，结果见表 5。
表 5 提取物中咖啡酸含量的重复性试验结果
序号 峰面积
峰面积
平均值
含量
(mg /g)
平均含量
(mg /g)
RSD
(%)
1 450782. 094451643. 813 451213 3. 98
2 457786. 875450331. 75 454059. 3 4. 00
3 450991. 938450608. 406 450800. 2 3. 97
4 450095. 125452594. 563 451344. 8 3. 98
5 450138. 563451225. 219 450681. 9 3. 97
6 452259. 781451082. 906 451671. 3 3. 98
3. 98 0. 28
3 结 论
本方法采用高效液相色谱法测定蒲公英提取物
咖啡酸的含量，具有灵敏度高、重现性好、准确度高、
操作简便等特点，能有效的控制蒲公英提取物质量。
参考文献:
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定［J］.辽宁中医杂志，2004，31(2):159.
［2］ 魏云兰，徐 杰. HPLC 法测定炎灵口服液中咖啡酸的含量
［J］.中医药信息，2004(2):56 － 57.
［3］ 国家药典委员会. 中华人民共和国药典(一部)［S］. 北京:化
学工业出版社，2005:244 － 245.
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中 国 野 生 植 物 资 源 第 29 卷