全 文 ：收稿日期:2004 11 08
作者简介:彭缨(1972 ), 女(满族), 山东兖州人 , 博士 , 从事中药分析工作 , Tel.024 23986766;宋少江(1970 ), 男
(汉族),辽宁沈阳人 , 副教授 ,从事中药及天然产物活性成分及质量控制研究 , Tel.024 23986510 , E mail songsj99@
yahoo.com.cn。
文章编号:1006 2858(2006)08 0518 03
抱茎苦荬菜药材中木犀草素 7 O β D
吡喃葡萄糖苷的分离与含量测定
彭　缨1 ,张　梅2 , 宋少江2
(1.沈阳药科大学 药学院 ,辽宁 沈阳 110016;　2.沈阳药科大学 中药学院 ,辽宁 沈阳 110016)
摘要:目的 建立分离 、测定抱茎苦荬菜药材中木犀草素 7 O β D 葡萄糖苷的方法。方法 采用醇
提取 、氯仿萃取与硅胶柱分离等手段来分离木犀草素 7 O β D 葡萄糖苷;采用RP HPLC 法进行
含量测定 ,色谱条件为:Diamonsin C18(250 mm×4.6 mm , 5 μm)色谱柱 , 以质量分数为 0.2%的磷
酸溶液 甲醇(体积比为 67∶33)为流动相 , 检测波长为 260 nm ,流速为 0.8 m L·min-1 。结果 木犀
草素 7 O β D 葡萄糖苷质量浓度在 4.80 ～ 24.0 mg·L-1内线性关系良好(r=0.999 7 , n =5), 平
均回收率为 99.4%,相对标准差(RSD)为 0.97%。结论 本法适合测定抱茎苦荬菜药材中木犀草
素 7 O β D 葡萄糖苷的含量。
关键词:抱茎苦荬菜;木犀草素 7 O β D 吡喃葡萄糖苷;高效液相色谱法;含量测定
中图分类号:R 284.1;R 917　　　文献标识码:A
　　抱茎苦荬菜(Ixeris sonchi folia(Bge.)Hance)
为菊科(Composi tae)苦荬菜属(I xeris)植物 ,别名
为苦碟子 、满天星等 ,盛产于我国东北 、华北等地。
《内蒙古中草药》记载 ,抱茎苦荬菜味苦 、辛 ,具清
热解毒 、排毒 、止痛之功效[ 1] 。民间主要用于治
疗阑尾炎 、扁桃体炎 、无名肿痛等症 。在以往的质
量标准中只有测定腺苷的含量 ,但其中重要的有
效成分黄酮类却没有准确可靠的含量测定方法 ,
本文作者从药材中分离得到了木犀草素 7 O β
D 葡萄糖苷这一代表性的黄酮类成分 ,并建立了
木犀草素 7 O β D 葡萄糖苷含量测定的高效液
相色谱方法。
Fig.1　Structure of luteolin-7-O-β-D-glucopyranoside
1　仪器与材料
高效液相色谱系统(PE Nelson LC 295紫外
检测器 ,PE Nelson色谱数据处理机 ,美国 PE 公
司)。甲醇 、氯仿(色谱纯 ,山东禹王化学试剂厂),
磷酸(纯度质量分数 85%, 山东禹王化学试剂
厂)。抱茎苦荬菜(样品由作者采于国内各产地),
由沈阳药科大学路金才副教授鉴定 。
2　方法与结果
2.1　木犀草素 7 O β D 吡喃葡萄糖苷的分离
鉴定
取抱茎苦荬菜药材 ,用体积分数为 70%的乙
醇回流提取 3次(2.0 、1.5 、1.0 h),用氯仿萃取 3
次 ,合并萃取液后回收氯仿得干浸膏 ,将浸膏与约
2倍量的硅胶拌样后 ,上样于硅胶柱 ,用氯仿-甲
醇梯度洗脱 ,在氯仿 甲醇(体积比为 20∶1)洗脱
液中有黄色结晶析出 ,将结晶收集 ,干燥 ,即得。
所得样品为黄色颗粒 , mp 253 ～ 255 ℃,Mg HCl
反应阳性 ,Molish 反应阳性 ,酸水解检出葡萄糖 ,
说明该化合物为黄酮苷类化合物。
样品的1H NMR、13C NMR谱数据如下:在
1
H NMR谱中 , δ13.0(1H , s)示黄酮母核5 OH;
较低场的 ABX 系统中的 3个质子 δ:7.44(1H ,
dd , J =8.1 , 2.1 Hz)、7.42(1H , d , J =2.1 Hz)、
6.91(1H , d , J =8.1 Hz)说明 B 环为 3′, 4′二取
代 ,较高场的 2个质子 δ6.45(1H , brs)和 6.79
(1H , brs)分别为 A 环的 6 , 8 位质子 。δ5.07
(1H , d , J =7.5 Hz)说明葡萄糖为 β 构型。在
第 23 卷 第 8期
2 0 0 6 年 8 月
沈　阳　药　科　大　学　学　报
Journal of Shenyang Pharmaceutical University
Vol.23 　No.8
Aug.2006 p.518
DOI :10.14066/j.cnki.cn21-1349/r.2006.08.011
13C NMR谱中 ,苷元部分给出 15 个碳信号 ,与文
献木犀草素的碳谱数据比较 ,确定苷元为木犀草
素 ,而苷元的 C 7位向高场位移 0.9 ,而 C 6 ,C 8
和C 10分别向低场位移 0.9 、1.2和 1.6 ,从而说
明葡萄糖连接在 C 7位上。该化合物的1H NMR
和13C NMR数据与文献[ 2 , 3] 中木犀草素 7 O
β D 吡喃葡萄糖苷基本一致 ,故鉴定该化合物为
木犀草素 7 O β D 吡喃葡萄糖苷(luteolin 7 O
β D glucopy ranoside)。
2.2　色谱条件
色谱柱:Diamonsin C18(250 mm ×4.6 mm ,
5μm),流动相:质量分数为 0.2%磷酸溶液 甲醇
(体积比为 67∶33),流速:0.8 mL·min-1 。理论塔
板数按木犀草素 7 O β D 葡萄糖苷计不低于
4 000 ,检测波长:260 nm 。
2.3　对照品溶液和供试品溶液的制备
精密称取木犀草素 7 O β D 葡萄糖苷适
量 ,用体积分数为 50%甲醇配制成 120 mg·L-1
的溶液 ,作为对照品溶液的贮备液 。
取抱茎苦荬菜药材粉末过 250 μm 筛 ,称取
2.0 g ,置 25 mL 量瓶中 ,加体积分数为 50%甲醇
至25 mL ,超声提取 30 min , 滤过 ,滤液定容于
25 mL 量瓶中 ,作为供试品溶液 。
2.4　专属性考察
分别精密吸取对照品溶液稀释液 、供试品溶
液各 20 μL ,注入高效液相色谱仪 ,记录色谱图 ,
由结果可知 ,供试品溶液色谱图中木犀草素 7
O β D 葡萄糖苷在保留时间 25 min有较大吸收
峰 ,且与其他峰完全分离 ,无干扰。色谱图见图
2。
Fig.2　HPLC chromatogram of luteolin-7-O-β-D-glucopyranoside of sample(A)and standard(B)
2.5　线性关系的考察
精密称取木犀草素 7 O β D 葡萄糖苷标准
品适量 ,置 25 mL 量瓶中 ,加体积分数为 50%甲
醇溶解并配制成质量浓度为 120 mg·L-1的对照
品贮备液 ,摇匀 。精密吸取上述溶液 1 、2 、3 、4 、
5 mL ,分别置于 25 mL 量瓶中 ,以体积分数为
50%的甲醇稀释并定容 ,摇匀 ,按“2.3”条下分别
精密进样分析 。以对照品质量浓度为横坐标
(ρ),对照品峰面积为纵坐标(A),绘制标准曲线。
计算得到木犀草素 7 O β D 吡喃葡萄糖苷的回
归方程式为 A =3.428×106ρ-7.778×104 ,相关
系数 r=0.999 7。线性回归曲线说明 ,在 4.8 ～
24.0 mg·L-1内呈现良好的线性关系 。
2.6　精密度试验
精密吸取对照品溶液(9.6 mg·L-1)20μL在
上述色谱条件下连续进样 5次 ,测定峰面积 ,计算
含量 , 木犀草素 7 O β D 吡喃葡萄糖苷的
RSD=2.43%。
2.7　重现性试验
按“2.3”条样品预处理方法平行提取 5份供
试样品 ,在上述色谱条件下分别进样 ,测定峰面
积 ,计算含量 ,木犀草素 7 O β D 吡喃葡萄糖苷
的 RSD=1.22%。
2.8　稳定性试验
取同批样品供试液 ,分别在 0 、2 、4 、6 、8 h 进
样 ,测定峰面积 ,计算含量 ,木犀草素 7 O β D
吡喃葡萄糖苷的 RSD =1.15%,表明供试液在
8 h 内稳定 。
2.9　回收率试验
采用加样回收率测定法。分别称取 6份已知
含量的药材(批号 200301)各 1.0 g ,分别精密加
入质量浓度为 0.120 g·L-1的木犀草素 7 O β
D 吡喃葡萄糖苷对照品溶液 1.0 、1.2 、1.4 mL ,
按供试品溶液制备方法制备加样回收率供试品溶
液。分别吸取各供试品溶液 20 μL ,测定 ,结果见
表 1。
2.10　样品测定
精密称取 3批抱茎苦荬菜药材 ,按照供试品
溶液制备方法制备样品溶液。20 μL 进样 ,在上
述色谱条件下测定 ,结果见表 2。
519第 8 期 彭　缨等:抱茎苦荬菜药材中木犀草素-7-O-β-D-吡喃葡萄糖苷的分离与含量测定　　　
Table 1　Results of the recovery test
No. madded/mg m found/mg Recovery/ % x/ % RSD/ %
1 0.120 0.119 99.2
2 0.120 0.121 100.8
3 0.144 0.142 98.6 99.4 0.97
4 0.144 0.143 99.3
5 0.168 0.164 97.6
6 0.168 0.169 100.6
Table 2　Results of the content test(n=3)
No. w/ % RSD/ %
200301 0.0181 0.8
200302 0.0149 0.5
200303 0.0301 1.3
3　讨论
在测定木犀草素 7 O β D 吡喃葡萄糖苷的
含量时 ,流动相中加入磷酸与否会影响峰形 ,及各
个峰之间的分离情况的好坏 ,实验证明加入磷酸
能有效改善木犀草素 7 O β D 葡萄糖苷对照品
峰与其他峰之间的分离度 ,改善峰形。
对 3个不同产地样品的测定结果表明 ,抱茎
苦荬菜药材中木犀草素 7 O β D 葡萄糖苷的含
量差异较大 ,其中 ,抚顺产抱茎苦荬菜药材中木犀
草素 7 O β D 葡萄糖苷的含量最高 ,通化产药
材含量最低。
参考文献:
[ 1] 江苏新医学院.中药大辞典 [ M] .上海:上海人民出
版社 , 1977.1300.
[ 2] Asada H , Miyase T , Fukushima S.Sesquiterpene lac-
tones from I xeris tamagawaensis Kitam [ J] .Chem
Pharm Bull , 1984 , 32(5):1724-1728.
[ 3] Asada H , Miyase T , Fukushima S.Sesquiterpene lac-
tones from I xeris tamagawaensis Kitam II [ J] .Chem
Pharm Bull , 1984 , 32(8):3036-3042.
Separation and quantitative determination of lute-
olin-7-O-β-D-glucopyranoside in the Ixeris sonchi-
folia(Bge.)Hance
PENG Ying
1 , ZHANG Mei2 , SONG Shao-jiang2
(1.School of Pharmacy , Shenyang Pharmaceutical University , Shenyang　110016 , China;　2.School of Tra-
ditional Chinese Materia Medica ,Shenyang Pharmaceutical University , Shenyang　110016 , China)
Abstract:Objective To develop a RP-HPLC method for the determination of the content of luteolin-7-O-β-
D-glucopy ranoside in Ixeris sonchi fol ia(Bge.)Hance.Methods The luteolin-7-O-β-D-g lucopyranoside was
obtained by the ex traction w ith 70%EtOH and precipitated by the method of column chromatography.It
w as separated on a Diamonsin C18(4.6 mm×250 mm , 5μm)column w ith CH3OH-H 2O(0.2%H3PO4)(33∶
67)as the mobile phase ,The UV detective w aveleng th w as set at 260 nm , the flow rate w as 0.8 ml/min.
Results The average recovery is 99.4%, and RSD is 0.97%.The linear calibration curves are obtained in
the ranges of 4.8 ～ 24.0 mg·L -1.Conclusions The method is simple and accurate.It can be applied to the
determination of the concentration of the luteolin-7-O-β-D-glucopy ranoside.
Key words:I xeris sonchi fol ia(Bge.)Hance;luteolin-7-O-β-D-g lucopyranoside;RP-HPLC;content deter-
mination
520 　　　沈　阳　药　科　大　学　学　报 第 23卷