全 文 ：[基金项目] 甘肃省教育厅基金(编号:0606B-06)　[ 作者简介] 赵磊 , 女 ,教授 , 硕士生导师 , 电话:0931-8765394 , E-maill:lucklei zhao@126.
com
·科技简报 ·
高效液相色谱-二极管阵列检测法测定
金沙绢毛菊中木犀草素和木犀草素-7-
O-β-D-葡萄糖苷的含量
赵磊1 ,夏鹏飞1 ,张艳2 ,余晓晖1 ,罗鹏1 　(1.甘肃中医
学院 ,甘肃 兰州 730000;2.西安市中医医院 , 陕西 西安
710001)
[ 摘要] 　目的:建立金沙绢毛菊中木犀草素和木犀草素-7-O-
β-D-葡萄糖苷的含量测定方法。方法:采用 H PLC-DAD 法 ,
色谱柱为 Zorbax-Eclipse XDB-C18柱(4.6 mm ×250 mm , 5
μm),流动相为甲醇-0.5%磷酸水溶液(0 ～ 9 min 为 48∶52 ,
流速 0.7 m L·min -1 ;9 ～ 25 min 为 65∶35 , 流速 0.8 mL·
min-1), 检测波长 360 nm , 柱温为 30 ℃, 进样量为 10 μL。
结果:木犀草素的回归方程为 Y = 4 576 X +3.886 7 , r=
0.999 9(n=5), 木犀草素-7-O-β-D-葡萄糖苷的回归方程为 Y
=4 527.2X+1.14 , r=0.999 9(n=5), 木犀草素和木犀草
素-7-O-β-D-葡萄糖苷的线性范围为 0.027 2 ～ 0.272 0 μg 。
结论:测定方法简便易行 , 准确可靠 , 结果稳定 , 重复性好 ,有
助于金沙绢毛菊的质量评价。
[ 关键词] 　金沙绢毛菊;木犀草素;木犀草素-7-O-β-D-葡萄
糖苷;高效液相色谱-二极管阵列检测法(HPLC-DAD);含量
测定
[ 中图分类号] R927　　[ 文献标识码] A　　[ 文章编号] 1001-5213
(2011)06-0511-03
　　金沙绢毛菊 Soroseris gillii (S.Moore)Stebb.系菊科
绢毛苣属植物 , 为多年生草本 , 主要分布在青海 、四川等
地[ 1] 。金沙绢毛菊全草入药 , 作为一种较常用的藏药 , 具有
清热解毒的功效 ,可解救食物中毒及其引起的发烧 , 还可治
疗头疮和四肢黄水病等。至今为止 , 国内外对金沙绢毛菊的
化学成分研究很少 ,吕建炜[ 2]等从金沙绢毛菊的乙醇提取物
中分离得到降香萜醇乙酸酯 、α-香树脂醇 、β-香树脂醇等 6 个
三萜类化合物。赵磊[ 3] 等对金沙绢毛菊的乙醇提取物进行
了进一步研究 ,从中分离得到黄酮类化合物木犀草素和木犀
草素-7-O-β-D-葡萄糖苷及甾醇类 、三萜类等共 7 个化合物。
木犀草素具有抗菌 、抗炎 、抗氧化 、抗肿瘤等活性[ 4] ,黄酮类
化合物木犀草素-7-O-β-D-葡萄糖苷具有明显的抗氧化损伤
能力[ 5-6] ,由此可见这两种黄酮类化合物的药理活性与民间
用药功效基本相符合。因此 ,以木犀草素和木犀草素-7-O-β-
D-葡萄糖苷作为指标性成分进行测定具有代表性。
1　材料
植物药材采自青海省循化县 ,经兰州大学药学院药用植
物教研室赵汝能教授鉴定为菊科绢毛苣属植物金沙绢毛菊
Soroseris gi llii(S.Moore)Stebb.的全草。 高效液相色谱仪
Ag illent 1200(美国安捷伦公司);Zo rbax-Eclipse XDB-C18色
谱柱(4.6 mm×250 mm , 5 μm);二极管阵列检测器(DAD);
木犀草素对照品和木犀草素-7-O-β-D-葡萄糖苷对照品(由本
实验室从金沙绢毛菊植物中分离所得 , 结构数据见文献[ 3] 。
归一化法测得其纯度大于 99%);甲醇为色谱纯;水为纯净
水;其他试剂均为分析纯。
2　方法与结果
2.1　测定波长的选择　使用二极管阵列检测器(DAD)对木
犀草素和木犀草素-7-O-β-D-葡萄糖苷在波长 200 ～ 380 nm
进行扫描 ,发现在 360 nm 处有最大吸收 , 因此选定 360 nm
为检测波长 ,采用紫外检测器进行检测。
2.2　色谱条件　色谱柱:Zo rbax-Eclipse XDB-C18(4.6 mm
×250 mm , 5 μm);流动相:甲醇-0.5%磷酸水溶液(0 ～ 9 min
为 48∶52 ,流速0.7 mL·min -1 ;9 ～ 25 min 为 65∶35 ,流速0.8
mL·min -1);检测波长:360 nm;柱温:30 ℃;进样量:10 μL ,
木犀草素和木犀草素-7-O-β-D-葡萄糖苷理论塔板数不低于
3 000。在此条件下 , 混合对照品溶液和供试品溶液的液相
色谱图见图 1 , 图 2。2.3　溶液的制备
2.3.1　混合对照品溶液的制备　精密称取木犀草素和木犀
草素-7-O-β-D-葡萄糖苷对照品各1.7 mg , 置 25 mL 量瓶中 ,
加甲醇溶解并定容至刻度 ,摇匀 , 精密吸取 10 m L 至 25 mL
·511·中国医院药学杂志 2011年第 31卷第 6期 Chin H osp Pharm J , 2011 Mar , Vol 31 , No.06
量瓶中 ,并用甲醇定容至刻度 , 配制成质量浓度为 0.027 2
mg·mL-1的混合对照品溶液。
2.3.2　供试品溶液的制备　取样品粗粉约 1.0 g , 精密称
定 ,置 50 mL 具塞的三角瓶中 ,精密加入 50%乙醇 20 m L ,浸
泡 12 h , 超声提取 30 min , 抽滤 ,提取 2 次 , 合并 2 次的滤液 ,
蒸干溶剂加甲醇溶解并定容至 50 m L ,过0.45μm 微孔滤膜 ,
取续滤液制得供试品溶液。
2.4　线性关系的考察　精密吸取上述混合对照品溶液 1 , 2 ,
4 , 8 , 10μL , 依次进样 ,按上述色谱条件测定峰面积 ,以峰面积
积分值(Y)为纵坐标 ,进样量(X)为横坐标 ,得木犀草素的回归
方程为:Y =4 576X +3.886 7 , r=0.999 9 ,木犀草素-7-O-β-D-
葡萄糖苷的回归方程为:Y =4 527.2X+1.14 , r=0.999 9;木
犀草素和木犀草素-7-O-β-D-葡萄糖苷进样量在 0.027 2 ～
0.272 0μg范围内与峰面积积分值间呈良好的线性关系。
2.5　精密度试验　精密吸取同一混合对照品溶液 4 μL ,按
“ 2.2”项下色谱条件注入液相色谱仪 , 连续进样 6 次 , 测定木
犀草素和木犀草素-7-O-β-D-葡萄糖苷峰面积积分值 ,结果木
犀草素的 RSD 为 1.15%(n=6), 木犀草素-7-O-β-D-葡萄糖
苷的 RSD为1.25%(n=6), 表明仪器精密度良好。
2.6　稳定性试验　精密吸取同一供试品溶液 10 μL , 分别在
放置 0 , 2 , 4 , 6 , 8 , 10 h 后 , 按“ 2.2”项下色谱条件注入液相色
谱仪 ,测定木犀草素和木犀草素-7-O-β-D-葡萄糖苷峰面积积
分值 ,结果木犀草素的 RSD为1.07%(n=6), 木犀草素-7-O-
β-D-葡萄糖苷的 RSD 为0.79%(n=6), 表明供试品溶液在
10 h 内稳定。
2.7　重复性试验　取同一样品粗粉约1.0 g , 精密称定 , 共
取 6 份 ,按“2.3.2”项方法制备供试品溶液 , 分别精密吸取 6
份供试品溶液 10 μL ,再按“2.2”项下色谱条件注入液相色谱
仪 ,测定木犀草素和木犀草素-7-O-β-D-葡萄糖苷峰面积积分
值 ,计算含量 , 结果木犀草素的 RSD 为 1.18%(n=6), 木犀
草素-7-O-β-D-葡萄糖苷的 RSD为1.26%(n=6)。
2.8　加样回收率试验　分别精密称定木犀草素对照品4.0
mg和木犀草素-7-O-β-D-葡萄糖苷对照品3.0 mg , 置 50 mL
量瓶中加甲醇溶解 ,并稀释至刻度 , 配制成混合对照品溶液。
取已知含量(木犀草素0.83 mg·g -1和木犀草素-7-O-β-D-葡
萄糖苷0.60 mg·g-1)的样品粗粉约 0.5 g , 精密称定 , 共取 6
份 ,分别精密吸入混合对照品溶液 5 m L , 按“ 2.3.2”项方法
制备供试品溶液 ,按“ 2.2”项下色谱条件进样测定含量 ,计算
回收率。结果见表 1 , 表 2。
表 1　木犀草素的加样回收率试验结果
Tab 1　Results of the r ecovery in luteolin
样品
编号
取样量
/ g
已知样品
含量/mg
对照品加
入量/mg
测得量
/mg
回收率
/ %
平均回
收率/%
RSD
/ %
1 0.5010 0.42 0.4 0.82 100.0
2 0.5006 0.42 0.4 0.83 102.5
3 0.5002 0.42 0.4 0.83 102.5
4 0.5006 0.42 0.4 0.81 97.5
5 0.5001 0.42 0.4 0.82 100.0
6 0.5004 0.42 0.4 0.82 100.0
100.4 1.87
2.9　样品的测定　分别取样品粗粉约1.0 g ,共取 3 份 ,精密
称定 ,按“2.3.2”项方法制备供试品溶液 , 分别精密吸取 3 份
供试品溶液 10 μL , 按“ 2.2”项下色谱条件注入液相色谱仪 ,
计算含量。结果见表 3 , 表 4。
表 2　木犀草素-7-O-β-D-葡萄糖苷的加样回收率试验结果
Tab 2　Results of the recovery in luteolin-7-O-β-D-g luco side
样品
编号
取样量
/ g
已知样品
含量/mg
对照品加
入量/mg
测得量
/mg
回收率
/ %
平均回
收率/ %
RSD
/ %
1 0.5010 0.30 0.3 0.59 96.7
2 0.5006 0.30 0.3 0.60 100.0
3 0.5002 0.30 0.3 0.59 96.7
4 0.5006 0.30 0.3 0.60 100.0
5 0.5001 0.30 0.3 0.60 100.0
6 0.5004 0.30 0.3 0.60 100.0
98.9 1.72
表3　木犀草素和木犀草素-7-O-β-D-葡萄糖苷的含量测定结
果
Tab 3　Determina tion of luteo lin and luteolin-7-O-β-D-gluco-
side
取样量
/ g
木犀草素 木犀草素-7-O-β-D-葡萄糖苷
含量
/mg·g -1
平均值
/mg·g -1
RSD
%
含量
/mg·g -1
平均值
/mg·g -1
RSD
%
1.0003 0.83 0.60
1.0001 0.82 0.83 1.20 0.60 0.60 0.97
1.0001 0.84 0.59
3　讨论
选用金沙绢毛菊中活性成分木犀草素和木犀草素-7-O-
β-D-葡萄糖苷的含量为评价指标 , 采用 H PLC-DAD 法测定
木犀草素-7-O-β-D-葡萄糖苷和木犀草素的含量 , 结果取得满
意效果。
实验曾考察了不同色谱条件梯度洗脱:(1)0 ～ 10 min 甲
醇-0.5%磷酸水溶液(48∶52), 流速 0.7 mL·min -1 ;10 ～ 13
min 甲醇-0.5%磷酸水溶液(52∶48), 流速0.7 mL·min -1 ;13
～ 25 min 甲醇-0.5%磷酸水溶液(52∶48);(2)0 ～ 10 min 甲
醇-0.5%磷酸水溶液(48∶52), 流速 0.7 mL·min -1 ;10 ～ 13
min 甲醇-0.5%磷酸水溶液(55∶45), 流速0.7 mL·min -1 ;13
～ 25 min 甲醇-0.5%磷酸水溶液(55∶45);(3)0 ～ 10 min 甲
醇-0.5%磷酸水溶液(48∶52), 流速 0.7 mL·min -1 ;10 ～ 25
min 甲醇-0.5%磷酸水溶液(55∶45), 流速 0.8 mL·min -1 ;
(4)0～ 9 min 甲醇-0.5%磷酸水溶液(48∶52), 流速0.7 mL·
min-1 ;9～ 25 min 甲醇-0.5%磷酸水溶液(65∶35), 流速 0.8
mL·min -1 。实验结果表明色谱条件(4)即甲醇-0.5%磷酸
水溶液作为流动相进行梯度洗脱[ 0 ～ 9 min 为(48∶52),流速
0.7 m L · min -1 ;9 ～ 25 min 为(65∶35), 流速 0.8 m L·
min-1),选用Zo rbax- Eclipse XDB-C18色谱柱(4.6 mm×250
mm , 5 μm)为分析柱 ,柱温为 30 ℃, 使得木犀草素和木犀草
素-7-O-β-D-葡萄糖苷达到基线分离 , 峰形对称 , 分离度好 ,分
离时间比较合理 ,且操作方法简单 , 稳定性 、精密度 、重复性 、
加样回收率均较好 ,此方法可以用于金沙绢毛菊中木犀草素
和木犀草素-7-O-β-D-葡萄糖苷的含量测定 , 为用药的合理性
提供了一定的理论依据 ,也为其资源的合理开发和利用提供
了一定的理论基础。
参考文献:
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氧培养乳鼠心肌细胞的保护作用[ J] .中药新药与临床药理 ,
2008 , 19(4):259-261.
[ 收稿日期] 2010-07-20
[作者简介] 郑继海 ,男 ,硕士 , 副主任药师 , 电话:0373-4402410 , E-mai l:zhjh 1632000@yahoo.com.cn
慢性乙型肝炎 2种抗病毒治疗方案的
成本-效果分析
郑继海 ,王金彩 ,杨道坤　(新乡医学院第一附属医院 ,
河南 卫辉 453100)
[ 摘要] 　目的:比较 2 种抗病毒方案治疗慢性乙型肝炎的临
床疗效 ,并进行经济学评价 , 以便为临床提供一种有效 、经济
的慢性乙型肝炎治疗方案。方法:采用回顾性调查方法 ,将
接受抗病毒治疗的乙型肝炎患者 67 例分为拉米夫定(LVD)
组和恩替卡韦(ETV)组 ,分别统计 2 组患者用药 48 周时的
HBV-DNA 阴转 、H beAg 阴转和 ALT 复常情况 , 并统计用
药金额 ,利用成本-效果分析方法对 2 种方案进行抗病毒疗
效的经济学评价。结果:在 HBV-DNA 阴转率方面 , ETV 组
好于 LVD 组(P<0.05);在 HBeAg 阴转率和 ALT 复常率
方面 , 2 组差异无显著性(P>0.05);经济学方面 , LVD组和
ETV 组的成本-效果比分别是 120.1和 178.4 , 拉米夫定优于
恩替卡韦。结论:从经济学方面来看 , 拉米夫定抗 HBV 的成
本-效果比优于恩替卡韦。由于恩替卡韦在 HBV-DNA 阴转
方面优于拉米夫定 ,而且拉米夫定长期使用导致的病毒变异
较为多见 ,从而造成潜在的费用难以估计 , 其经济性值得进
一步研究。
[ 关键词] 　乙型肝炎;拉米夫定;恩替卡韦;成本-效果
[中图分类号] R969　　[ 文献标识码] B　　[ 文章编号] 1001-5213
(2011)06-0513-02
　　慢性乙型肝炎是目前一个严重的公共卫生问题 , 严重威
胁着人们的健康。近年来由于新型抗病毒药物的相继上市 ,
给该病的抗病毒治疗提供了多种选择。 但是如何优化治疗
方案 ,降低医药费用 , 节约卫生资源 , 是我们面临的一个严峻
课题。以下对我院 2008—2009 年 67 例慢性乙型肝炎患者
采用 2 种不同药物治疗方案的成本与效果进行统计分析 ,以
期为临床合理用药提供参考。
1　资料与方法
1.1　病例选择　所调查病例 67 例 , 其中男 45 例 , 女 22 例 ,
年龄 16 岁～ 50 岁 , 均确诊为慢性 HBV 感染的患者 , 且血清
HBsAg 和 HBeAg 持续阳性 6 个月以上 , HBV-DNA 阳性 ,
血清丙氨酸转氨酶(ALT)在正常值上限 2 倍以上。 失代偿
肝病 、有明显的心 、脑 、肾疾病和不稳定糖尿病者排除在外。
所选 67 例患者为拉米夫定(LVD)组 37 例 , 恩替卡韦(ETV)
组 30 例 , 2 组患者在接受抗病毒治疗前均未使用其他抗病毒
药物 ,在性别 、年龄 、病程方面差异均无显著性(P>0.05),
有可比性。
1.2　治疗方案　LVD组 37 例给予拉米夫定(商品名:贺普
丁 ,葛兰素史可制药有限公司)100 mg 口服 , qd;ETV 组 30
例给予恩替卡韦(商品名:博路定 ,中美上海施贵宝制药有限
公司)0.5 mg 口服 , qd。 2组患者基础保肝治疗用药相似 ,观
察用药期限为 48 周。用药前后均做 HBV-DNA、HBeAg 、
ALT 等检测。
1.3　疗效评价　根据患者治疗 48 周时的病毒学应答情况:
HBV-DNA 阴转即血清 HBV-DNA 检测不到(PCR法)或较
基线下降≥2 log 10 (拷贝/m L), 或低于检测下限[ 1] , 结合
HBeAg 阴转和肝功能 ALT 复常等指标综合评价疗效。
1.4　经济学评价　采用成本-效果方法评价 2 组患者的用
药经济性。成本包括直接成本 、间接成本和隐性成本 , 并以
货币单位量化。因本资料中接受治疗的患者所处地区及社
会环境基本相同 ,为便于计算 , 将间接成本和隐性成本视为
相同 ,只计算直接成本。直接成本是指与特定的医疗服务项
目直接相关的支出 , 包括药品费用 、治疗费用和检查费用以
及其他相关的费用。由于本资料主要评价药物的成本与疗
效 ,为使结果具有可比性 , 故略去基础治疗与检查费用 , 只计
算抗 HBV 药物以及辅助保肝药物的费用 ,比较 2 组患者的
成本-效果。
1.5　统计学处理　使用 SPSS 13.0软件对计量资料采用 t
检验 ,对计数资料采用卡方检验。
2　结果
2.1　疗效评价　LVD 组和 ETV 组患者在治疗 48 周时的
HBV-DNA 阴转率分别为43.2%和73.3%, 差异有显著性(P
<0.05);在 HBeAg 阴转率和肝功能 ALT 复常率方面差异
无显著性(P>0.05)。结果见表 1。
表 1　2组间疗效比较[ 例(%)]
Tab 1 　Comparison of cur ative effects betw een tw o g roups
[ case(%)]
组别 例数 HBV-DNA(阴转率/ %)
HBeAg
(阴转率/ %)
ALT
(复常率/ %)
LVD 组 37 16(43.2) 7(18.9) 28(75.7)
ET V 组 30 22(73.3)a 6(20.0)b 25(83.3)b
注:与 LVD 组比较 , aP<0.05 , bP>0.05
在治疗中 , 2 组患者各有 1 例出现恶心 、腹胀轻微不良反
应 ,均未影响治疗。
2.2　经济学评价　按照我院执行的河南省药品统一招标价
格:拉米夫定 100 mg×14 片 ,每盒216.2元;恩替卡韦0.5 mg
×7 片 , 每盒272.43元 ,每例患者 48 周治疗用药费用及辅助
保肝药物每例费用。结果见表 2。
表 2　2组间药品费用比较(元)
Tab 2　Comparison o f the co sts between tw o g roups(Yuan)
组别 例数 抗 HBV 成本 护肝药物成本 总药费
LVD 组 37 5 189 1 039±164 6 228±164
ET V 组 30 13 077 973±127a 14 050±127b
注:与 LVD 组比较 , aP>0.05 , bP<0.01
由表 2 可以看出 , 2 组护肝药物成本比较无显著差异(P
>0.05),但抗 HBV 药物成本 LVD组低于 ETV 组 , 2 组相
比总药品费用 LVD 组显著低于 ETV 组(P<0.01)。
由于主要的病毒学指标 HBV-DNA 阴转率有显著性差
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