全 文 ：HPLC法测定新疆鼠尾草三萜有效部位中熊果酸的含量＊
陈婷婷＊＊, 热娜·卡斯木＊＊＊
(新疆医科大学药学院天药/生药教研室 , 新疆　乌鲁木齐　830011)
摘要:目的:建立新疆鼠尾草以三萜为有效部位的熊果酸含量的高效液相色谱检测方法 。方法:采用高效液
相色谱法(H PLC 法)检测浸膏中熊果酸的含量 ,色谱柱为Water s Symme try C18 柱(4.6 mm×250 mm , 5 μm), 流
动相为甲醇—水—冰乙酸—三乙胺(85∶15∶0.03∶0.06)∶甲醇=70∶30 , 流速 0.8 ml/ min ,检测波长 210 nm , 柱
温 30℃。结果:H PLC 法测得熊果酸的线性范围为Y =447 684X -7 680 (r =0.999 9), 平均回收率为 98.84%,
RSD=1.69%(n =6)。结论:H PLC 法测定熊果酸含量 , 操作简便 , 灵敏度高 , 重现性好 , 可为新疆鼠尾草以三萜
为有效部位的质量控制提供一定的依据。
关键词:高效液相色谱法;新疆鼠尾草;熊果酸;含量测定
中图分类号:Q949.777.6;R927.2　　文献标识码:A　　文章编号:1009-5551(2008)04-0394-02
The determination of Ursolic Acid in Salvia deser ta Schang by HPLC
CHEN Ting-ting , Rena·Kasimu
(Department of Phy tochemistry P harmacognosy , Pharmacy Col lege , X inj iang Med ical Universi ty ,
Urumqi 830011 , China)
Abstract:Objective:To establish new me thods for the determinat ion of ursolic acid in Salv ia deserta
S chang.Methods:High perfo rmance liquid chromatog raphy detection (HPLC)was used , using Waters
Symmetry C18 co lumn(4.6 mm ×250 mm , 5μm), methano l-water-acetic acid glacial-t riethy lamine (85∶
15∶0.03∶0.06)∶Methanol=70∶30 as mobile phase wi th flowing rate 0.8 m l/min and detected at 210
nm .Results:The linear range of ursolic acid w as 0.204 ～ 2.040μg(r =1.000 0), and the average recover-
y w as 98.84%, RSD=1.69%(n =6).Conclusion:This method is simple , accurate and reproducible.It
pro vides a basis fo r the quali ty evaluat ion of to tal t ri terpenes as effect ex t racts in Salv ia deserta Schang.
Key words:high perfo rmance liquid chroma tog raphy (HPLC);Salvia deserta Schang;ursolic acid
　　新疆鼠尾草(Salvia deserta Schang)为唇形科
(Labiatae)鼠尾草属植物 。我国鼠尾草属植物大多
数以根入药作丹参用[ 1] 。新疆鼠尾草在新疆有广泛
的分布 ,在民间全草用药 ,用于清热解毒 、抗菌消炎
等。在新疆鼠尾草地上部分的基础研究中 ,发现三
萜酸为其主要成分之一 ,其中以熊果酸(Ursolic
Acid)和齐墩果酸(O leanolic Acid)含量明显占优
势。有关研究报道熊果酸和齐墩果酸的药理作用主
要为保肝护肝 、抗炎抗菌抗病毒 、抗氧化 、抗癌等作
用[ 2 , 3] 。本实验以新疆鼠尾草地上部分甲醇提取的
浸膏为对象 ,经过简单的富集步骤 ,得到熊果酸高含
量的三萜有效部位 ,旨在建立新疆鼠尾草中熊果酸
的高效液相色谱(HPLC)定量检测方法 ,为新疆鼠
尾草三萜有效部位的质量控制提供了一定的依据 。
1　仪器与试药
岛津 LC-20A 型液相色谱系统(LCSolution
(Ver.1.21)系统色谱工作站 , SPD-M20A 紫外检
测器 , CTO-20AC型柱温箱);Sartorius BS110S 电
子天平(北京)。熊果酸对照品(批号 110742-
200516)购自中国药品生物制品检定所;甲醇(色谱
纯),水(市售纯净水),其它试剂均为分析纯 ,富含熊
果酸的三萜有效部位为自制品。
2　方法与结果
2.1　色谱条件　色谱柱为 Waters Symme try C18
柱(4.6 mm ×250 mm ,5 μm);流动相为甲醇—水—
冰乙酸 —三乙胺(85∶15∶0.03∶0.06)∶甲醇=70
∶30 ,配好后经微孔滤膜抽滤 ,超声波脱气;流速0.8
m l/min;检测波长 210 nm;柱温 30℃。熊果酸对照
品和新疆鼠尾草有效部位的 HPLC图 ,见图 1 。
2.2　对照品溶液和提取物溶液的制备　精密称取
熊果酸对照品 5.1 mg ,加甲醇定容到 25 ml ,制成
0.204 mg/ml对照品溶液。将新疆鼠尾草地上部分
甲醇提取的浸膏用乙酸乙酯萃取 ,干燥后用石油醚
溶解 ,过滤 ,取滤饼 ,即得富含熊果酸的三萜有效部
394 新疆医科大学学报　JOURNAL OF XINJIANG MEDICAL UNIVERSITY　2008 Apr., 31(4)
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基金项目:国家“十一五”科技支撑计划项目(300243)
作者简介:陈婷婷(1983-),女 ,硕士研究生 ,研究方向:新疆优势资源开发研究。
通讯作者:热娜·卡斯木 ,教授 ,博士生导师 , Em ail:renakasimu@vip.sina.com 。
位。称取有效部位 ,精密称定 ,甲醇溶解后转移至容
量瓶 ,甲醇定容至刻度 ,用微孔滤膜(0.45 μm)滤
过 ,取续滤液 ,即得提取物溶液 。
2.3　线性关系的考察　精密进样 0.204 mg/ml熊
果酸对照品溶液 2 、4 、8 、10 、15 、20μl ,以峰面积为纵
坐标(Y), 熊果酸的质量(μg)为横坐标(X),进行
线性回归 ,得回归方程为:Y =447 684X -7 680 , r
=0.999 9(n =6),线性范围为 0.408 ～ 4.080 μg 。
2.4　精密度考察　取熊果酸对照品溶液 10 μl ,连续
进样 6次 ,按上述色谱条件测定峰面积 ,精密度相对
标准偏差 RSD为 0.51%,表明仪器精密度良好。
2.5　稳定性试验　精密称取有效部位 0.030 0 g ,
甲醇溶解后定容至 50 ml 容量瓶 ,微孔滤膜(0.45
μm)滤过 ,分别在 0 、2 、4 、6 、8 h 进样 10 μl测定 ,以
峰面积计算 , RSD为 0.27%,表明样品溶液在 8 h
内稳定。
2.6　重复性考察　称取有效部位约 0.03 g ,共 6
份 ,甲醇溶解后定容至 50 ml 容量瓶 ,微孔滤膜
(0.45μm)滤过 ,按上述色谱条件各进样 10 μl测定
峰面积 , RSD为 1.11%,表明本方法重复性符合分
析要求。
2.7　加样回收率试验　精密称取有效部位 6份 ,分
别精确加入对照品溶液 1.00 ml ,甲醇溶解后定容
至 25 ml容量瓶 ,微孔滤膜(0.45 μm)滤过 ,进样 10
μl测定峰面积 ,计算回收率。结果熊果酸的平均加
样回收率为98.80%, RSD=1.71%,表明分析方法
准确 ,见表 1 。
表 1　熊果酸加样回收率(n=6)
编号 样品取样量(mg)
样品中含
量(mg)
对照品加
入量(mg)
测得量
(mg)
回收率
(%)
平均回收
率(%)
RSD
(%)
1 10.2 3.318 0.204 3.518 99.89
2 10.1 3.285 0.204 3.395 97.31
3 10.1 3.285 0.204 3.525 101.03
98.80 1.71
4 9.8 3.186 0.204 3.322 97.99
5 9.6 3.122 0.204 3.218 96.75
6 10.0 3.253 0.204 3.450 99.80
2.8　样品含量测定 精密吸取提取物溶液 10 μl进
样 ,按上述色谱条件 ,用外标法计算熊果酸的含量 ,
测得结果表明富含熊果酸的三萜有效部位中熊果酸
的含量为 32.53%, RSD=0.40%(n =6)。
3　结论
3.1　甲醇—水的流动相优于甲醇—乙腈 —水 ,添加
剂为冰醋酸-三乙胺对 UA 、OA 的分离度高于添加
剂为磷酸的流动相[ 4] ,故初步选定以甲醇 —水 —冰
乙酸—三乙胺作为流动相。其中 ,甲醇-水有 85∶
15和 90∶10 共 2 种[ 5 , 6] ,本实验选择前者 ,在预实
验中发现色谱图不够理想 ,最终采用甲醇 —水 —冰
乙酸—三乙胺(85∶15∶0.03∶0.06)∶甲醇=70∶
30 ,接近甲醇 —水 —冰乙酸 —三乙胺(90∶10∶0.03
∶0.06),提示后者分离熊果酸效果也较好 。加入少
量冰醋酸可以创造弱酸性环境 ,利于 2种酸的分离;
加入少量三乙胺有利于改变峰形 ,提高分离度[ 5] 。
3.2 　实验中采用全波长扫描 , 观察了 206 、210 、
215 、220 nm 共 4个波长扫描的情况 ,发现 206 nm
和 210 nm 的灵敏度高 ,215 nm 和 220 nm 的基线比
较稳 ,综合考虑 ,选择波长为 210 nm 。
3.3　本实验参考文献[ 7]按照不同的进样体积进样
等浓度的标准品溶液 ,操作简便 ,且减少操作引起的
误差 ,以峰面积对熊果酸的质量进行线性回归 ,绘制
的标准曲线相关系数 r =0.999 9 。
3.4　在前期对浸膏进行柱层析中发现熊果酸的含
量高于齐墩果酸 ,通过 HPLC 色谱图可以看到相同
量的样品中 ,熊果酸的峰面积明显高于齐墩果酸。
且实验中有效分离了齐墩果酸的峰和熊果酸的峰 ,
既使得熊果酸的含量测定更为精确(排出了齐墩果
酸的干扰),又建立了同时测定熊果酸和齐墩果酸的
色谱方法 ,为以后同时测定两者的含量奠定了实验
基础。
3.5　本实验建立了新疆鼠尾草以三萜为有效部位
的熊果酸含量测定的 HPLC 方法。经方法学考察 ,
该方法符合《中国药典》中有关质量标准建立的要
求[ 8] ,具有快速灵敏 、准确可靠 、简便易行 、重现性好
等优点 ,可用于控制新疆鼠尾草三萜有效部位中熊
果酸的含量 。
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[ 收稿日期:2007-10-15]
395新疆医科大学学报　JOURNAL OF XINJIANG MEDICAL UNIVERSITY　2008 Apr., 31(4)