全 文 ：收稿日期:2007-11-21
基金项目:甘肃省教育厅资助项目(0509-02);西部资源环
境化学重点实验室科研资助项目(xz0603)。
作者简介:林　敏(1967-), 女 , 甘肃张掖人 , 副教授 , 主要
从事基础化学教学工作 , 研究方向:天然产物有效
成分提取与分析。
苦苣菜提取液对亚硝基及·OH清除活性的研究
林　敏 ,安红钢 ,白俊杰 ,李　丽 ,闫宇翎
(西部资源环境化学重点实验室 , 河西学院化学系 ,甘肃 张掖 734000)
摘　要　利用分光光度法研究了苦苣菜水提液对亚硝基和羟基自由基的清除活性以及影响清除亚硝基的因素。
结果表明:浸提液对 NO2 -和由 Fenton反应产生的·OH均有很强的清除作用 , 且在一定浓度范围内随浓度的增大
而增强。在一定条件下 , 提取液对亚硝基和·OH的最大清除率分别可达 75.68%和 100%。
关键词　苦苣菜;亚硝基;·OH自由基;清除
中图分类号:R285　　　文献标识码:A　　　文章编号:1006-9690(2008)04-0053-02
StudyonScavengingActivityoftheWaterExtractofSonchusoleraceus
toNitrosoandHydroxylFreeRadicals
LinMin, AnHonggang, BaiJunjie, LiLi, YanYuling
(KeyLaboratoryofResourcesandEnvironmentChemistryofWestChina,
DepartmentofChemistry, HexiUniversity, Zhangye734000 , China)
Abstract　Byspectrophotometry, thescavengingofthewaterextractofSonchusoleraceustonitrosoand
hydrorxylfreeradicalswasstudied.Atthesametime, theefectingfactsofthewaterextractofSonchus
oleraceustonitrosowerestudied.TheresultshowedthatthewaterextractofSonchusoleraceushadvery
strongscavengingefectsonthenitrosoandhydrorxylfreeradicalsgeneratingfromFentonreactions.The
scavengingefectsbecamestrongerwiththeinceasingoftheconcentrationofinacertainconcentration
range.ThemaximumscavengingrateofNO-2 and·OHwere75.68% and100% respectivelyinthecer-
tainconditions.
Keywords　Sonchusoleraceus;nitroso;hydroxylfreeradical;scavenge
　　苦苣菜(SonchusoleraceusL.)系菊科(Composi-
tae)1 ～ 2年生的草本植物 ,分布于我国南北方 ,大多数
具有药用价值 ,也可食用。苦苣菜在民间被作为药材
使用。味苦 ,性寒 ,具有清热解毒 ,凉血止血等作用。
主治肠炎 、痢疾 、黄疸 、咽喉肿痛 、吐血、尿血等症[ 1-2] 。
在致癌物中 , 亚硝胺和·OH自由基是最令人关
注的一类化学致癌物 ,它们能引起人体和动物的多
种恶性肿瘤 、心血管疾病 、肺气肿 、衰老等等 [ 3 -4] 。
从防癌抗癌角度考虑 ,可以采取清除亚硝胺前体或
羟基自由基来达到防癌目的 。本研究以此为出发
点 ,研究苦苣菜提取物清除亚硝酸盐和·OH自由基
的效果。
1　材料与仪器
1.1　材料
苦苣菜。采自张掖市田间地埂;阴干粉碎备用。
1.2　仪器与药品
722S分光光度计 ,宜兴市仪器仪表总厂;LD4-
2A型台式离心机 ,北京医疗器械厂;数显电子恒温水
浴锅 ,北京医疗器械厂;FA1004电子天平 ,上海精密
科学仪器有限公司天平仪器厂;高速粉碎机。亚硝酸
钠 、甲基紫 、柠檬酸三钠 、盐酸 、水杨酸 、硫酸亚铁 、双
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第 27卷第 4期
2008年 8月 　　　　　　　　　　　　　 中 国 野 生 植 物 资 源ChineseWildPlantResources　　　　　　　　　　 　Vol.27 No.4Aug.2008
氧水均为分析纯及以上 ,实验用水为 2次蒸馏水。
2　试验方法
2.1　标准曲线的建立
用文献 [ 5]的方法略加改进测定亚硝酸根含量 ,
准确量取 0, 0.5 , 1.0, 1.5, 2.0, 2.5, 3.0, 4.0, 4.5
mL的 5mg/LNaNO2 于 9个 25容量瓶中 ,各加入
5mL95%的乙醇 , 5mLpH=2的柠檬酸三钠 -盐酸
缓冲液 , 1.5mL5 ×10-4mol/L的甲基紫 ,定容后静
置 15min,于 560 nm处测吸光度 ,用最小二乘法得
亚硝基浓度与 A的回归方程为:y=1.884 612x+
0.016 659 16, r=0.999 1
2.2　样品处理
称取一定量的苦苣菜样品 ,于 250mL的烧杯中
加蒸馏水 100 mL置于水浴锅中 80℃水浴 10 min,
用 3 000 r/min离心 10min,取清液备用 。
2.3　亚硝基清除率的测定
准确量取 5 mg/LNaNO2 2份各 4 mL,置于 25
mL容量瓶中 ,其中 1份加入一定量的提取液 ,摇匀
反应 10min,两份都加入 5mL95%的乙醇 , 5mLpH
=2的柠檬酸三钠 -盐酸缓冲液 , 1.5 mL5 ×10-4
mol/L的甲基紫 ,定容后静置 15 min,于 560 nm处
测吸光度。加入一定量的苦苣菜提取液 ,测定的吸
光度为 A1 ,没加苦苣菜提取液 ,测定的吸光度为 A0。
清除率 =(A0 -A1)/A0 ×100%
2.4　对·OH自由基的清除作用 [ 6-7]
在 25 mL容量瓶中依次加入 5 mL2 mmol/L
FeSO4 , 5 mL6 mmol/LH2O2混合均匀 ,用 6mmol/L
水杨酸定容 ,在 36 ～ 37 ℃恒温水浴中反应 15 min
后 ,在 510 min处测定吸光度 A0加入一定量的苦苣
菜提取液 ,测定的吸光度为 A1
清除率 =(A0 -A1)A0 ×100%
3　结果与讨论
3.1　苦苣菜对亚硝基最佳清除条件试验
设置提取温度 ,提取液用量 , 作用时间 3大因
素 ,将数份苦苣菜干样按 2.2节方法处理。
2.1.1　提取温度对清除率的影响
分别取 2.5g试样 ,加 100mL水 ,在不同温度下水
浴 10min,抽虑液中加 pH=2盐酸 , 3 000r/min离心 10
min,取上清液 7mL测其清除率结果见表 1:
表 1　不同提取温度对清除率的影响
提取温度 /℃ 40 50 60 70 80 90 沸水
清除率 /% 38.88 42.95 43.4 47.5 56.13 52.59 49.85
　　由上表可知随温度升高 ,清除率增加 , 80℃的提
取液清除率最好。继续提高浸提温度清除率下降幅
度不大 ,沸水浴中清除率仍达 50%。
3.1.2　提取液用量对清除率的影响
分别取 2.5 g试样 ,加 100mL水 ,在 80 ℃下水
浴 10 min,抽虑液中 pH=2盐酸 , 3 000 r/min离心
10 min,取不同量上清液测其清除率 ,结果见表 2:
表 2　提取液用量对清除率的影响
试样用量 /mL 5 6 7 8
清除率 /% 39.78 43.88 58.18 33.88
　　由上表可知随提取液用量增加 ,清除率提高.但
加入量从 8 mL起提取率降低 ,原因有待进一步研
究。
3.1.3　反应时间对清除率的影响
取 7 mL提取液于 25容量瓶中 ,加入一定量 5
μg/LNaNO2 ,分别反应不同时间后 ,再测其清除率 ,
结果见表 3:
表 3　反应时间对清除率的影响
反应时间 /min 5 10 15 20 25
清除率 /% 46.83 57.05 75.68 68.4 65
　　由表可见 ,提取液与亚硝基反应 15 min时效果
最好 。
3.1.4　Vc对亚硝基的清除率
准确量取一定体积 0.2%的维生素 C于容量瓶
中 ,加入 5μg/mL的亚硝基 4mL,静置 15 min,再加
入 5 mL95%的乙醇 , 5 mLpH=2的柠檬酸三钠 -
盐酸缓冲液 , 1.5 mL5×10-4mol/L的甲基紫 ,定容
后静置 10 min,于 560 nm处测吸光度.结果见表 4:
表 4　维生素 C对亚硝基的清除率
Vc用量 /mL 0 1 2 3 4 5
清除率 /% 0.0 55.7 68.4 72.1 86.3 91.6
　　维生素 C用量增加 ,清除率增大 ,但无线性关
系。 0.4 mg/mL的 VC能使 0.8 μg/mL的亚硝基的
清除率达到 90%以上 。 (下转第 58页)
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　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　中 国 野 生 植 物 资 源　　　　　　　　　　　　　　　　第 27卷
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(上接第 54页)
3.2　·OH自由基的清除作用
3.2.1　提取液对 ·OH自由基的清除作用
在 Fenlon体系中加入一定浓度的提取液(物料
比 1∶10)在 36 ～ 37 ℃恒温水浴反应 15min, 510 nm
处测吸光度 A1 ,试样空白测 A0(以同温度为对照)。
随着试样用量的增加清除率增强 。当试样浓度为
0.6g/mL(单位体积中含有的样品干重量)时几乎
完全清除体系中的·OH自由基 。
表 5　提取液对· OH自由基的清除作用
试样用量 /mL 1 2 3 4 5 6
清除率 /% 59.7 72.3 78.5 83.2 89.4 99.7
3.2.2　Vc对· OH自由基的清除作用
用 0.2%的 VC代替试样按上法测对·OH自由
基的清除 ,结果如下表:
表 6　Vc用量对·OH自由基的清除率
Vc用量 /mL 0 1 2 3 4 5
清除率 /% 0.00 13.02 33.96 90.00 98.57 100.0
　　结果表明维生素 C用量增加 ,对羟基自由基清
除率增大 ,当 Vc浓度达 4 mg/mL时几乎完全清除
体系中的·OH自由基 。
4　结　论
(1)苦苣菜对亚硝基有一定的清除能力 ,对
0.8 μg/mL亚硝基的清除率达 75%需要大约 175mg
的苦苣菜(干物质)。
(2)苦苣菜的最佳清除条件为料液比为 1∶40,
80 ℃水浴 10min,室温反应 15 min,清除率最大为
75.68%。
(3)苦苣菜对羟基自由基有很强的清除作用;
0.6 g/mL(单位体积中含有的样品干重量)的苦苣
菜提取液与 4 mg/mL维生素 C对羟基自由基的清
除率一致 ,达 100%。
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