全 文 ：广西热作科技 一九九O 年第二期 (总35 期 )
余甘子果汁和粉末阻断
大鼠体内N 一硝亚基脯氨酸合成
梁 学 军
( 北京医科大学营养与食品 卫生学教研室 )
提要 本文报导余甘子果汁 、 余甘子果粉末对体 内N 一亚峭基脯 氛 酸 ( N P R O )
合成的饵断效果 。 研 究时 象为 14 只雄性W i s t ar 大鼠 , 以 自身对照分期观察 。 大 鼠
实验表明 , 余甘子果汁 、 余甘子粉末 可 阵 断 体 内N P R O 合 成 , 胆 断 率 分 别为
10 。呱 、 96 . 29 肠 , 且效果优 于同浓度维生素 C溶液 。
关健词 余甘子 : N 一亚琦基 化合物 ; N 一亚梢基脯氛酸
N 一亚硝基化合物是一类强致癌物 ,与人
类肿瘤的发生有密切的关系 。 N 一亚硝基化 合
物同自然界中其他致癌物的区别在 于 , N 一亚
硝基化合物的致癌作用并不一定与外源形成
的物质分子从外界环境进入机体 有 关 。 N -
亚硝基化合物可以从来自外界的前体或机体
本身的前体 (即可由其前体物质 , 如食物中
含有胺类 、 亚硝酸盐及硝酸盐 ) 进行体内合
成 。 人体内主要合成N一亚硝基化合物 的 部
位是胃内 〔1〕 , 所以研究出一些能够用来抑
制体内产生 N 一亚硝基化合物的抑 制 剂就成
了一个非常迫切的间题 , N 一亚 硝 基化合物
抑制剂被看作是抗癌因素 。
可阻断N 一亚硝基化合物合成 的 物质中
最早报导的是维生素 C ( V C ) , 当 其分子
浓度二倍于亚硝酸盐时可完全阻断 , 在体内
及食品中皆能阻断 。 其他阻断物质还有维生
素 E , 多酚类物质也有不 同程 度 的 阻 断 作
用 阁 . 最近几年来本教研室宋圃菊等发现
了我国特产野果刺梨 、 称猴桃 等 对 N 一亚硝
基化合物合成有抑制作用 氏 4〕 。
余甘子又名牛甘子 、 油甘子 , 是亚热带
地区特产灌木果树 , 广泛分布于我国福建 、
广东 、 广西 、 云南等地 。 余甘子 果 实 富 含
V C 和其他营养物质 。 1 9 8 7年以来本教 研室
研究了云南产地余甘子果汁阻断 N 一 亚硝 基
半刘毅玲同志参加本实验部分工作 ,在此表示感谢 ,
化合物体内 、 体外合成的作用 , 证明了余甘
子果汁阻断 N 一亚硝基化合物 合 成效果优于
同 浓 度vc 低 6〕 。 在此研究基础上 , 我们
进一步研究了广西余甘子果汁和云南余甘子
果粉末的体内阻断N 一亚硝基化合物合 成 作
用 .
材料和方法
一 、 材料
1
、 余甘子果汁 。 由广西田东县酱酒厂
提供 。 将鲜余甘子果洗净晾干 、 去核压榨而
得 , V C含量26 5二 g / 1 0 m l .
2
、 余甘子果粉末 。 由云南昆明市轻工
研究所提供 , 为微黄色粉末 , V C的含 量 为
2 8 5 2
.
s g m g / 1 0 0克 。
3
、
W i
s t a r雄性健康大 白 鼠 1 4只 , 体
重为2 25 . 30 士 25 . 9克 。 由我校动物部提供 。
4
、 余甘子果汁 、 余甘子果粉末溶液临
用时用 P H 3 . 2柠檬酸 、 磷酸氢 二 钠 缓 冲 液
( 以下简称缓冲液 )稀释 , 每m l内含 V C Z . 12
m g
, 标准 V C溶液 ( A R 、 北京医药 采购供
应站 ) 用缓冲液配成 , 每m l含 V C 2 . 12 m g 。
亚硝 酸 钠 ( N a N O Z ) ( A R 、 北京红星化
工厂 ) , L 一脯氨酸 ( L 一 P r o) (纸 层 析 、
中国科学院东方仪器设备公司生化部 ) 均用
缓冲液配 成。 . 08 M溶 液 。 N 一亚 硝基脯氨酸
( N P RO ) 和 N 一亚硝基呱可酸 ( N IP c ) 标
准品均由国际癌瘤研究机构 ( I A R C )婚送 ,
用无水乙醇配成 40 功 g / m lo 其他试剂均 为
分析纯 。 ’ 交犯 砂扩 ” 恕 呱 `
一 蓉 、 一 2。肠氨基磺酸钱八 . 息M硫酸溶 液
( A s )
, 取 s o m zr s M浓杯2性也 4加水室5 0住
m l
, 称取 1 0 克氨基磺 酸 胺 溶于 5 0 m l l . 8
M H 、 5 0 `
。 : 了 一 ’ 「
、
6
、 一 重氮甲院 , 按文献方法料备 , 即用
甲胺丫 腺素和N a N O Z合成N , 亚 硝 基 甲基
脉 . 制备重氮甲烷 时 , 在 含有 20 现 16 0 响的
K O H溶 派 , 40 m l乙醇及 1 20 爪 1乙醚的圆底
烧瓶中加入 2 克 干 燥的 N 一亚硝基甲基脉 ,
轻轻摇动使之产生气泡并出规黄色 , 临用时
配制 。
7
、 仪器 。 ’ 旋转 蒸 发 仪 , 多F Q月型 、
天津市第` 玻璃厂出品 ;气相色谱仪 ( G c ) 、
S P 一 23 0 5型 , 北京分析仪器厂出 ’ 品 ; 热 能分
析仪 ( T E A ) 5 43 型 , 美国热电子公司出品 。
二 、 方法 `
1 9 81 年。 。 涌 m a建立了一种能 直 接反
映体内嵘化的方法 〔月 , 为定量研究阻断体内N 一亚硝基化合物合成提供 了 模型 。 本
文采用此方法 , 用G C一 T E A联用 , 测定大
鼠经口摄入L 一 P r 。 和 N a N O Z ;摄 入 L 一 P r “ 、
N a N O
Z和阻断剂后 , 2 4小时尿中排出的并经
过处理的拘P R O 甲醋 , 定量地反体体内合成
N P R O的情况 。
l
、 大鼠体内亚硝化
, _
_
_ 雄性大鼠巩只二 以 _自身为对照 , 分 5 期
收集24 小时尿 , 各期间隔 48 小时 , 除 ( 1 )期
为无处理本底尿外 , 其它 4 期分班为 : ( 2 ) 、
0
.
o s M N
a
N O
: 和 o . o 8 M L 一 P r o各 o . s m l ;
( 3 ) 0
.
o 8 M N a N O
Z和 o . o 8 M L 一 P r o 各
0
.
5 0 1
,及 3 m l V e (即 0 . 3 6 一M ) ; ( 4 ) -
O
_
0 8 M N a N O
: 和 o . o s M L 一 P r o 各 0 . 5 , 1
灌胃后单独置放代飞谢笼中 , 用装有 2 ` IA 、 S
的聚乙烯小瓶收集尿液 , 3 小时 后 放入饲
漓犷趣 2娜时后皎集尿液 , 测定夕P R o 。
2
、 尿中N P RO 含量测定分析
取 2 0垃 1尿样 , 加 入 4 0 0移9 N P I C ( 内
标 ) 和 S m 1A S液 , 用 30 m l醋 酚 乙 酷 萃 取
,
3 次 , 合并萃取液 , 经无水硫酸铭脱水后 , ·
用旋转蒸发仪蒸千溶剂 (浴百温 60 ’ C ) 。用 3
m l乙醚溶解残余物 , 用重氮 甲烷处 理 后 ,
将 N P R O衍生物为其甲酷 , 氮气浓 缩 后 『在
G c 一 T E A 上侧定 、 用标准N P R O 经 同 样
处理后作定性定量参照 。
G C一 T E A条件 : 色谱 柱为Z m x 3 m m
不锈钢 柱 , 充填 徐 10 呢 C a r b。 , a xZ O M 的
6 0一 5 0目 e o v o m o s o v o w 。 氢气为 载 气 ,
’ 流速 25 m l / 分 夕 柱温 1 90 O C , 汽 化 室 温 度
. 为 2 1 0 ’ C , 热界 室 温 度 50 ` C , 界 面温 度
2 0 0
’
C
, 在此条件下 , N p R O与 N p I C 分离
良好 , 无其他千扰峰 。
3
、 样品丫C测定 , 用 2 . 6一二氯酚靛酚
· 法 。
及 3 , 4余 ,甘子 一果 汁 一 (内含琴C o
( ” ) 。 . “ 8 丫、 翼娜色扣.0 08 初 王矛比 _各
。方润岌3 磷纷书舞粉求摺1液之硬内含竿。
声。 M ) ; -
主二护r 已
36 M )
。大鼠在灌胃前停食过夜 (不停水) ,
实 ·验 结 果
经不同处理后大鼠 2 4小时尿中N P R O各
期排泄量见表 。 不给任何受试物时大鼠尿中
N P R O 排 泄量平均为 2 . 5 5” 爪 o1 , 此为本底
「 值 。 给 两 种 前 体 物L 一 P r 。和 N a N 。 。后 ,
P R O排泄量平均为 9 6 . 75 o m 成 . , 明显 高于
本底值 , 为本底的38 倍 , 差异有 极 显 著性
’
( P < 0
.
0 1 )
`
, 说明摄入 L 一 P r 。 、 N a N O :
一 两种前体物后体内有亚硝化 反应 存在 , . 用
、
V C 作阻断荆后 , N P R O排泄飞量为 15 . 2 2 ” m 一
ol
, 与同时给两种前体物而未加 阻 断剂 比
较 , 差异有显 著 性 ( F < 0 . 。。 1 ) , 阻断率 为
8 6
.
5 5肠 。 分别以余甘子果汁和余甘 子某粉
末作阻断剂后 , 尿中N P R O排泄量 分 别 为
乳四郊贝川 、氏妞” , 成 , 已低于或接 近 平底水
平 , 蜷简时始礴种前体物而未加阻斯 剂 比
较 , 差异有极显著性 心P炙仇。0 1 ) 「一 粗断率
分别为 l那肺 、 9 5 .习7 肠一 , 与 标准V C比较 ,
9
差异有显著性 (P<。 . 0日 , 阻断效果优于 同溶度 V C 。
表 给予不同受试物 14 只大鼠 24 小时尿液 N 一亚硝基胶红酸排出一 ( n m 。约
一 ’ { ’ 一 ` J一 ~ ” 一 ’二” _ _ 、 _ ” , 、 _ ’ . l 三’ .l :三` ’ 二云一 ’ 一 ’一川 ’ . l~ ’ ~ ’一} “ 头 ` 朋 举 , 父 、 、。
无处理本底 N O万十 L一 P r。
鼠号·
( 1 ) ( 2 )
N O落+ L一 P r o
+ V C
( 3 、
N O
:
+ L一 P r o
+ 余甘子果 汁
( 4 )
N O万+ L一 P r o
+ 余甘子果粉 末
( 5 )
1 …5一 2 2 4 . 68 1 3 . 9 1 2 . 0
2
.
7 3
痕量
2
.
5 2
4
.
2 5
2
.
0 7
1
.
1 8
5
_
6 7
八U. .1QUU
:
1
.
0 3
4 2 0
1 0
.
4 4
1 6
.
6 0
5
`
9 8
0 9 5 15
.
8 6
1 5
.
16
27
.
9 4
5
,
7 6
4
.
3 1
3
.
8 9
2
.
1 9
4
.
0 5
2
.
1 4
1
.
0 7
歇 7 6
2
.
4 8
1
_
6 8
4
.
3 7
6
.
7 0
7
.
7 6
9
.
9 8
3
.
5 8
9
.
2 1
8
.
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2 7 4
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.
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.
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.
1 5
7 7
.
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n甘行`OUnJ
.
5
.
7 9 3 7
.
8 7…一|日|卜`|2347568910n24
又 士
S D
阻断
* △△
`护
(肠 )
.
5 5 士 1 ` 5 5 9 6 . 7 5 士 5 9 . 9 3 1 5 . 2 2 士 4 . 3 3 2 , 么9 士 1 . 17 6 . 4 4 士 2 . 0
8 6
.
5 5 10 0 9 5
.
8 7
△ L一p r o 、 N a N O : 浓度均为。 、 08 M 灌胃
体积为。 . 5m l , 标准V C剂量为 。 . 舫M , 余 甘 子
果汁 、 余甘子果粉末中内含V C与标准V C剂量 相
同为。 . 3 6M , 灌胃体积为 3 m 卜
△△ . 阻断率〔肠 ) , X 1 0 0呱
10
丢|1
日
1陇l
门
|
匡姗陌谊|援”||日月附|飞|l甘书
”
:
月
;
以
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日阻
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队
l
渭汽|
曰搜I
nl泪|r行…
讨 论
本实验以测定大鼠2 4小时尿中 P NR O 排
泄量 , 研究大鼠摄入亚硝化前 体 物 L 一 P r 。
和 N o N O : 后在体内的亚硝化情况及 摄 入阻
断剂 V C 、 余甘子果汁和余甘子粉末 体内亚 -
硝化的作用 。 从表中结果证实 , N一亚硝 基化
合物 可在体内合成 。 V C是已知的阻断剂 ,
本实验V C 与N a N O : 摩尔比 为。 . 9 , 阻断率
为邵肠 , 与 O眺川 m a 报 导当 v c 与N a N 0 2 ,
摩尔比为 1 时 , 阻断率 为 8 1肠 接 近 〔8〕 ,
与我 们 曾报 导 的 V c 阻 断 率 为82 肠 接 近
州 。 余甘子果实 富 含 v c , 果实含 v C 约
为 0 . 6 0一 0 . 02肠 , 有 时 可 达 一 5 6肠 〔9〕 比
含 V C较多的柑桔多 1 0 倍 , 是称猴桃的3 ~ 5
倍 , 我国历来有用余甘子果治疗 坏 血 病 的
经 验 。 为了解作为 天 然 食品除含 V C成分
外 , 余甘子果其他成分对体内亚硝化合成的
影响 , 本实验将余甘子果汁和余甘子果粉末
配成含 V C浓度与标 准 V C 浓 度 相同 , 都为
0
.
3 6 M
, 观察其阻断效果 , 实验结果表明 ,
余甘子果汁与余甘子果粉末阻断效果均优于
同浓度的V C , 提示余 一甘子果汁 、 余 甘 子果
粉末除了 v C 外 , 还有其他活性成分 阻 断大
鼠体内N 一亚硝基化合物的合成 。
余甘子除含 V C外 , 还含有较 多 的多酚
类物质 , 未成熟果实含 30 一 3 5肠 , 千果亦达
14弧 田 。 多酚类化合物 对 N 一 亚硝 基化
合物的合成已有报导 〔幻 。 为排除多酚类化
合物影响 , 我们曾用明胶和醋酸 铝 作 沉 淀
剂 , 经多次沉淀除去多酚类物质后进行体外
实验 , 实验结果仍表明 , 余甘子果汁经除去
多酚类物质后 , 对 N 一亚硝基化合物合成阻
断率仍在 90 肠以上 。 提示了余甘子活性物不
在多酚类物质 , 余甘子活性物质有待进一步
研究 。
从曾报导的余甘子果汁在体内外实验结
果 〔日.的 和本次实验结果均显示出余 甘子
果对N一亚硝基化合物合成具有显著性的阻
断作用 , 可 以认为在 j 寸活 ’ 食用一定量
的余甘子果能减少胃内N 一 亚硝基化合物的
合成 , 减少其对人体的危害 。
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8
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O h s卜i m a H · e t a l · M O n i t o r i n g
o f e x e r e t e d N 一 n i t r o s a m i n o a e i d s a 3
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r o s a m i n e s a n d H u m a n C a e e r ( B a n b u 一
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