全 文 ：第 25卷第 3期
2006年 5月 　　　　　　　　　
分析测试学报
FENXI CESH I XUEBAO(Journal of In strum en talAnalysis)　　　　　　　　　
V ol. 25 No. 3
109～ 111
高效液相色谱法测定迷迭香超临界提取物中的
鼠尾草酸和鼠尾草酚
吕岱竹 , 王明月 , 袁宏球 , 陈雪华
(华南热带农业科学院　分析测试中心 , 海南　海口　571101)
摘　要:采用 HPLC法测定了迷迭香超临界提取物(SFE)中的鼠尾草酸与鼠尾草酚。 SFE样品用甲醇超声提取 ,
以 C
18
为固定相 , 乙腈 -水为流动相 , 在 285 nm 检测波长下 , 用外标法进行定性定量分析 , 鼠尾草酸与鼠尾草
酚校正曲线的线性范围分别为 0.1 ～ 50 m g /L与 0.5 ～ 50 m g /L, 相关系数分别为 0. 999 8与 0.999 6, 检出限分
别为 0.1和 0. 8 m g /L, 平均回收率分别为 98%和 95%。本方法快速准确 , 分离效果好。
关键词:高效液相色谱法;鼠尾草酸;鼠尾草酚;迷迭香
中图分类号:O657. 72　　文献标识码:A　　文章编号:1004 - 4957(2006)03 -0109 - 03
Determ ination of Carnosic Acid and Carnoso l in Supe rcritica l F luid Ex tract
o f Rosemary by H igh Perform ance Liqu id Chromatography
LÜD ai-zhu, WANG M ing-yue, YUAN Hong-qiu, CHEN Xue-hua
(Ana lysis and Testing Center of Ch inese Academ y o f T rop ic Ag ricu lture Sc ience, H aikou　571101, Ch ina)
Abstract:A method for the dete rm ination of carnosic acid and carnoso l in supercritical f luid ex tract
(SFE) of Rosem ary by HPLC was deve loped. The SFE samplew as extrac ted w ith 100mL o fmethanol
in an u ltrason ic ba th at room temperature fo r 30m in. A fter filte ring w ith themembrane(0.5μm), the
liqu id w as ana lyzed by HPLC using Nova pak C18(150 mm ×3.9 mm) as the stationa ry phase and
0.01mo l /mL ace tonitrile - w a ter(52 ∶48 by vo lume) as the mob ile phase at a flow ra te o f 0.8
mL /m in. The de tec ted w ave leng th w as 285 nm. The linear ranges of the ca libration cu rves fo r ca rson ic
acid and carnoso lw ere 0.1 - 50 mg /L and 0.5 - 50 mg /L, respective ly, the co rrelation coe fficients
w e re 0.999 8 and 0.999 6, respec tively, the detection lim its w ere 0.1 and 0.8 mg /L, respective ly,
and the average recoveries we re 98% and 95%, respective ly.
Key words:HPLC;Carno sic;Carnoso l;Rosemary
迷迭香 (Rosmarinus officinalis L. )中的鼠尾草酸 、 鼠尾草酚可有效抑制油脂的过氧化物形成和多烯
脂肪酸的分解 , 从而延长了油脂的货架期 。鼠尾草酸 、 鼠尾草酚作为一种天然的抗氧化剂已被广泛用
于保健食品 , 药品和化妆品等领域 [ 1] 。
目前国内尚未有对迷迭香中的鼠尾草酸 、 鼠尾草酚的报道 。国外对鼠尾草酸 、 鼠尾草酚的测定 ,
主要采取液相色谱 -质谱联用和高效液相色谱法 [ 2 -3] 。高效液相色谱主要采用梯度洗脱法 , 分析时间
长达 50 m in[ 3] 。本方法采用反相液相色谱配合紫外检测器 , 以乙腈 -水为流动相 , 等度洗脱 , 在 12
m in内将鼠尾草酸 、 鼠尾草酚分离出来 , 操作简便 、 分离效果好 、 灵敏度高 。用此方法测定迷迭香超
临界液体抽提物中的鼠尾草酸 、鼠尾草酚 , 取得了满意效果 。
1　实验部分
1.1　试剂与原料
W ate rs高效液相色谱仪 , 配 490E紫外检测器 、 510泵 、 717+自动进样器 、 WDL-95色谱工作站 ,
KD浓缩器。
　　甲醇 、 冰醋酸均为分析纯试剂 (广州化学试剂厂产品 )、 高效液相色谱中使用的甲醇为色谱纯 (上
海生化化工助剂厂产品), 水为超纯水 , 鼠尾草酸 、鼠尾草酚为对照品 (S igma公司 , 纯度大于 98%)。
收稿日期: 2005 - 05 - 17;修回日期:2005 - 07 -20
作者简介:吕岱竹(1972 -), 女 , 湖北武汉人 , 工程师 , Tel: 0898 - 66895007, E -m ai l: ldz162000@ yahoo. com
分析测试学报 第 25卷
　　样品:迷迭香原料经粉碎机粉碎到粒度小于 1mm , 以超临界 CO2夹带剂在不同条件下处理所得的
超临界抽提物。
1.2　实验方法
1.2.1　色谱条件　流动相:52%(φ)乙腈 - 10 mmo l /L冰乙酸;采用等度洗脱 , 流速为 0.8mL /m in;
色谱柱:Nova pak C18柱(150mm ×3.9 mm);柱温:室温;波长:285 nm;灵敏度:0.5 AUFS。
1.2.2　样品处理　精密称取 0.5 g样品 , 加入甲醇 25 mL, 超声提取 30m in后 , 用甲醇定容 50 mL,
根据含量高低稀释成上机液 , 过 0.45 μm微孔滤膜 , 按上述色谱条件进样分析。
2　结果与讨论
2.1　检测波长的确定
对鼠尾草酸及鼠尾草酚标准溶液进行高速紫外扫描 , 鼠尾草酸在 218、 285 nm有 1个弱吸收峰 ,
在 331 nm有 1个强吸收峰;鼠尾草酚在 285 nm有 1个强吸收峰 , 在 218、 329 nm有 1个弱吸收峰。在
285 nm处 , 样品谱图中杂质干扰较少 , 因此选用 285 nm作为检测波长。
2.2　流动相的选择
2.2.1　流动相中有机溶剂的选择　采用甲醇 -水 、乙腈 -水溶液等几种不同的体系来实现分离 。由
于样品为天然产物 , 基质复杂 , 杂峰多 , 经过多次实验证明 , 选用乙腈做流动相 , 柱效高 , 分离效果
好 。根据乙腈 -水不同配比下 , 样品中鼠尾草酸及鼠尾草酚的峰形及与其它杂峰的分离度 , 确定乙腈
和水比例为 52∶48。
图 1　流动相中未加入冰乙酸(A)及加入冰乙酸(B)
的标准谱图
F ig.1　Chrom atogram s o f a standard so lu tion w ith HAc
in them obile phase(A) and w ithou tHA c in the m ob ile
phase(B)
1. carnoso l;2. carnosic acid
2.2.2　流动相中冰乙酸浓度的选择　鼠尾草酸
带有 1个羧基 , 加入冰乙酸 , 体系的 pH下降 ,
抑制了鼠尾草酸在流动相中的电离 , 可减少鼠尾
草酸的拖尾现象 。实验表明:流动相不使用冰乙
酸时 , 色谱峰存在明显的拖尾现象。加入冰乙酸
后 , 各峰形较尖锐且易于分离(见图 1)。冰乙酸
浓度在 4 ～ 10 mmo l /L之间时 , 随着冰乙酸的浓
度增加 , 峰对称性好 , 峰形锐 。而冰乙酸在 10
～ 12 mmo l /L范围内 , 峰形和分离效果基本相
似 。因此 , 选择流动相中冰乙酸的浓度为 10
mmo l /L。
2. 3　测定方法的验证
2.3.1　工作曲线的线性范围和检出限　取系列浓度的鼠尾草酸 、 鼠尾草酚标准溶液 , 按上述色谱条
件进样 , 以峰面积 y为纵坐标 , 质量浓度 ρ(g /L)为横坐标绘制标准曲线 。以 2倍信噪比计算检出限 。
结果见表 1, 峰面积与样品浓度呈良好的线性关系 , 线性范围宽 , 检出限低。
表 1　鼠尾草酸 、鼠尾草酚线性范围
Tab le 1　Ana ly tica l data fo r carno sic ac id and carnoso l
C om pound
L inear regression equ at ion
(n =5)
C orre lation coef ficien t
r
Linear range
ρ/(mg L- 1)
D etect ion lim it
ρ/(mg L- 1)
C arnos ic acid(鼠尾草酸) Y = - 99 490. 8+727. 9ρ 0. 999 8 0. 1 ～ 50 0. 1
C arnosol(鼠尾草酚) Y = - 695. 6+3 665ρ 0. 999 6 0. 5 - 50 0. 8
2.3.2　精密度实验　在上述色谱条件下 , 用质量浓度分别为 0.5、 10、 100 mg /L标准溶液加入空白样
中 , 每种取 6个平行样 , 重复测定 , 鼠尾草酚的相对标准偏差为 5.2%, 鼠尾草酸的相对标准偏差为
6.8%。
2.3.3　回收率实验　准确称取样品 0.5 g, 加入鼠尾草酸 、鼠尾草酚储备液各 1 mL和 0.5 mL, 按样
品的测定方法 , 取 5次测定的平均值计算回收率。其平均回收率分别为 98%和 95%(n =5), 所得结果
列于表 2。实验结果表明该方法定量准确 , 重复性好 。
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第 3期 吕岱竹等:高效液相色谱法测定迷迭香超临界提取物中的鼠尾草酸和鼠尾草酚
表 2　鼠尾草酸 、 鼠尾草酚加标回收率
Tab le 2　Recove ry results of ca rno sic ac id and carnoso l
Com pound
Orig inal
m
O
/mg
Added
m
A
/mg
Found
m
F
/m g
Recovery
R /%
C arnos ic acid(鼠尾草酸) 93. 07 50. 00 143. 65 96
93. 07 100. 00 194. 36 100
C arnosol(鼠尾草酚) 35. 01 50. 00 83. 21 98
35. 01 100. 00 123. 06 91
2.3.4　样品测定　准确称取迷迭香超临界萃取不同时段提取物 , 按 “1.2.2” 项处理后 , 以外标法定
量测定 , 结果列于表 3, 典型样品谱图如图 2。
图 2　样品 4谱图
F ig. 2　Ch rom a tog ram of sam ple 4
表 3　样品测定结果
Table 3　Analy tical results of sam ples
Com pound
S amp le No.
1 2 3 4 5 6 7
C arnosol(鼠尾草酚) 2. 7 18. 0 9. 2 8. 3 9. 3 8. 1 3. 9
C arnosic acid(鼠尾草酸) 32. 0 16. 0 26. 0 22. 0 13. 0 28. 0 37. 0
参考文献:
[ 1] 　CARLO B, ARIANNA B, PATRIZ IA RUBIOLO. Ana lysis o f carnoso l and ca rno sic[ J] . Phy to chem Ana l, 2000, 11
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[ 2] 　CUVELLER M E, BERSET C, RICHARD H. Food antiox idant constituen ts in sage[ J] . A g ric Food Chem, 1999, 4
(42):665 -669.
[ 3] 　H IDALGO P J, UBERA J L, TENA M T, et a.l CO2 ex trac ts fo r ro sem a ry and sage[ J] . A gric Food Chem , 1998, 46:
231 -236.
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三 、征稿截止日期为 2006年 6月 15日 , 逾期不再接受。
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甘肃省化学会
2006年 4月 10日
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