全 文 ：第 3 0 卷 内 蒙 ,古 石 油 化 工 1 9
反相高效液相色谱测定中华苦莫菜中的木犀草素
程春萍` ,任秀莲 ` , 2 , 魏琦峰 `
l(
. 内蒙古科技大 学化 学化工学 院 , 内蒙古 包头 01 4 0 30 ; 2 . 中南 大学化学化工学 院 , 长沙 湖南 41 0 0 8 3)
摘 要 : 目的 : 建立中华苦 英菜 中木犀草素含量的测 定方法 。 方法 盐析法 消除植物多酚的 干
扰 ;反相高效液相色谱法测 定 : C l : 为 固 定相 ; 甲醉一 水一 醋酸 ( 52 , 47 . 6 , 0 . 4 v/ v ; p H 一 4 . 0) 为流
动相 ;检测 波长 2 5 4n m ;柱温 25 C 。 结果 : 木犀草素与其它物质得到 了基线分 离 。 结 论 : 该方 法为天
然植物 中木犀草素的开发提供 了简便 、 灵敏 、 准确 的刚定方法 。
关键词 : 木犀草素 ; 中华苦英菜 ;反相 高效液相色谱
苦英菜为菊科败酱属植物 , 俗称苦菜 , 是一种
食 用野菜 , 全国 各地均有分布 。 李时珍 《本草纲
目 》载 , , 久服 可 轻身健体 、 耐饥耐寒 。 全草可 以人
药 ,具有清热解毒 , 解痉镇痛凉血消肿等功效 ,用
于治疗肺痈 、 乳痈 、 痢疾肠炎等多种疾病 lj[ 。 现代
医疗实践证明苦菜可用 于 治疗无名肿痛 、 乳痈疮
肿 、 肝炎 、 肺热咳嗽等 。 该属植物的化学成分较为
复杂 , 含有黄酮 、 三 菇 、 街醇 、 倍半菇 、 香豆素等化
合物川 。 木犀草素 ( L ut eo h n) 是黄酮之一 。 作为中
华苦英菜中的药用有效成分 .2[ 3〕 ,有关药理及临床
实验结果表明木犀草素在体 内具有抗菌 、 抗病毒
及降低血脂和 胆固醇 的作用闭 , 国内外学者对该
属植物的研究主要集 中在化学成分和药理作用
上 , 到 目前为止 , 未见中华苦英菜中木犀草素含量
的报道 。
苦英菜中植物多酚的存在干扰木犀草素的准
确测定 。本文采用盐析法消除植物多酚的干扰 , 克
服了现有柱层析分离富集木犀草素工艺流程长的
缺点 , 并用反相高效液相色谱法测定木犀草素的
含量 , 以便为苦英菜中木犀草素的开发提供检测
方法 和基础数据 。
1 仪器与药品
中华苦英菜 , 2 0 0 2 年春季采摘于 湖南湘西 和
内蒙古包头 ; 乙醇 , 氯化钠 , 乙 醚 , 甲 醇均为分析
纯 ; 木 犀 草 素 标 准 品 , 购 买 于 S电m a 公 司
( S w i t z e r l a n d ) ; 7 5 6 M C U V 分光光度计 , 上海精
密 科 学 仪 器 公 司 ; B T 8 1 0 0 H P L C 一 p u m p ,
B IO T R O N IK ; B T 8 2 0 0 H P L C U V / V IS D e t e e
-
t o r
,
B IO T R O N I K ; C 一 R 3 A C H R O M A T O P A C ,
B IO T R O N IK
。
2 实验方法与结果
2
.
1 色谱条件
色 谱 柱 : N U C L E O S l l J 1 2 0 一 S C 、 8柱 ( 4 . 6
m m 1
.
d
.
X 2 0 Om m
,
5拼m , G e r m a n y ) ;
流动相 : 甲醇一水一醋酸 ( 5 2 : 4 7 . 6 : 0 . 4 v/
v ; p H 一 .4 0 ) , 以微孔 滤膜过 滤并经超声 脱气处
理 ; 检测波长 2 5 4 n m , 灵敏度 0 . 08 A U F S ; 进样量
1 0拼 l , 流速 0 . s m l /m i n ;柱温 2 5℃ 。
2
.
2 样品溶液的制备
准确称取 3 . 0 0 09 经干燥粉碎的中华苦英菜 ,
以固 液比 1 : 15 的 7 0 % 乙醇在 85 ℃水浴条件下
回流提取 2 次 , 每次 Zh 。 合并两次提取液 ,减压浓
缩至浆状 , 趁热加人到 50 m l l m ol I/ 碑 的 N a CI 热
溶液中 , 放置过夜阁 。 过滤除去植物多酚 。 所得滤
液 , 用乙醚充分萃取 , 相 比 1 , 1 。 乙醚萃取液减压
浓缩至干 ,流动相定容至 2 5m l , 制成样 品溶液 。
3 结果与讨论
.3 1 检测波长的选择
用 7 5 6M C U V 分光光度计 在 1 9 0 一 4 5 o n m
波长 范围 内测定木犀草素 甲醇溶液的 吸 收光谱 。
在 2 5 4 n m , 3 5 o n m 有最大吸收峰 , 与 文献值完全
一 致川 。 本文选用 2 5 4 n m 为检测波长 。
3
.
2 流动相的选择
3
.
2
.
1 甲醇比例对保留值的影 响
随着流动相中甲醇体积分数的增加 , 流动相
洗脱能力增强 。 当 甲醇体积分 数在 40 %一 60 %
2 0 反相 高效液相 色谱测 定中华苦英菜中的木犀草素 第 3 0 卷
时 , 木 犀草素与其它物质均有较好的分离度 ,如果
继续增大 甲醇的 比例 , 木犀草素的 k 值减小 ,木
犀草素 的保 留时间降 至 10 m in 以下 , 分离 度降
低 ,因此 ,影响 了木犀草素的准确测定 。 当甲醇一
水降至 4 0 : 60 时 , 流动相洗脱能力减弱 , 木犀草
素的 k’ 值升高 , 保留时 间延长 , 峰扩展严重 , 无法
准确测定 。 因此 , 选定 甲醇与水 的体积分数为 52
: 4 7
.
6 的混合溶液为流动相 。 但该二元体系存在
的基线漂移现象降低了测定的准确度 , 为此 ,需在
流动相中加人缓冲剂解决该问题 。
3
.
2
.
2 醋酸对保留值的影响
在选定 2 5 4 n m 波长下 ,采用甲醇一水二元体
系 , 调整二者配 比直至 甲醇 , 水 一 5 2 ` 4 7 . 6 时 ,
与干扰成分得到完全分离 ,但有拖尾现象 。 木犀草
素属弱 酸性四轻基黄酮类化合物 , 通过醋酸调节
流动相 的 p H 一 4一 5 ,增加 了木犀草素在固定相上
的保 留时 间 , 有效地防止 了峰扩展现象 , 改善了峰
形 , 解 决了色谱峰拖尾 问题 J
3
.
2
.
3 流动相流速对保 留值的影响
在 3 . 2 . 1 和 3 . 2 . 2 流动相条件下 , 调节流动
相的流速为 0 . 6 , 0 . 7 , 0 . 8 , 0 . 9 , 1 . 0 m l廿 / m i n 分别
进行实验 , 结果表明 : 减慢流速分析周期增长 , 能
得到较好的分离效果 ,但流速过慢 (低于 0 . 5 m l , /
m in ) 时 , 发生峰扩展现象 , 影响检测结果的准确
性 。 流速过快 (超过 1 . 0 m L /m in) 时 ,熊果酸与其
它物质没有完全分开 , 导致分离效果变差 。 最佳流
速为 O 、 s m I J / m in , 既可 以保证熊果酸与其它物
质 良好的分离效果 ,又无峰扩展现象 ,保证了分析
结果的准确性 。
.3 2
.
4 工作曲线
准确称取木犀草素标准品 , 流动相溶解 ,配制
成 0 . 0 3 , 0 . 0 6 , 0 . 0 9 , 0 . 1 2 和 0 . 1 5 m g / m l 的木犀
草素标准系列 ,在 2 . 4 色谱条件下每次进样 10川 ,
以峰面积 A 对质量 M 进行线性回 归 , 得到回 归
方程为 :
A = 4 1 5 3 6材 一 2 7 6 3 4 R Z = 0 . 9 9 4 4
木犀草素在 3 K l o 一 `一 1 5 只 1 0 一 诵m g / m l 范围
内呈 良好线性关系 。
3
.
3 样品分析
3
.
3
.
1 样品谱图
在 2 . 1 色谱条件 下 , 进样 1 0拼L , 得到样品色
谱图 , 见图 1。
图 1 样品色谱图
F i g l
,
C h r o m a to g ar m O f s a m Pl e
3
.
2
.
2 精密度试验
在相 同色谱条件下 , 用浓度 0 . 10 m g /m l 木犀
草素分别进样 5 次 , 每次 1 0“ L ,分别测定各次的
峰面积 A , 计算结果表 明测定方法具有 良好的 重
现性 , R S D = 0 . 0 3% ( n = 5 ) 。
3
.
3
.
3 加标回收率试验
准确称取 已知含量的中华苦英菜样品 6 份 ,
每份重 2 . 8。。 g , 其中 3 份不加标样作为基样 , 按
样品分析方法进行测定 ,求得 3 次测定的平均值
作为基样含量 ;另 3 份分别加标样 0 . 8 0 m g , 同样
按样品分析方法测定 ,计算加标 回收率 ,结果见表
1
。
表 1 加标回收率测定
基样
含量 / m g
加标样
量 / m g
加标样后
测得量 / m g
加标
回收率 / %
3
.
5 0 0
.
8 0 4
.
2 9 9 8
.
7 5
3
.
5 0 0
.
8 0 4
.
2 8 9 7
.
5 0
3
.
5 0 0
.
8 0 4
.
3 4 1 0 0
.
5
3
.
3
.
4 萃取试验
除去植物多酚所得的滤液 , 以 1 : 1 乙醚分别
萃取 1 、 2 、 3 、 4 、 5 、 6 次 , 按 2 . 2 制备样品溶液后 , 再
按 2 . 1 色谱条件分析 ,样 品中木犀草素含量与萃
取次数的关系 ,结果见表 2 。
表 2 萃取实脸
萃取次数 木犀草素 含量
( m g
·
g 一 ’ )
试验结果表明 : 萃取 4 次后 , 乙 醚中的木犀草
素已经达到饱和萃取 。
第 3 0卷 内 蒙 古 石 油 化 工 2 l
3
.
3
.
5 样品分析结果
取不 同产地的苦英菜 , 按 2 . 3 的方法制备样
品溶液 , 在与标准品分析相同的色谱条件下 ,将样
品溶液进样 , 每次 l 。“ L , 测定木犀草素含量 。 同
时 , 精密称取每种样 品 0 . 25 0 09 , 按表 1精确加人
木犀草素标准品 ,按 2 . 2 的方法制备样品溶液 ,测
定其含量 ,并计算每个样品的加标 回收率 ,分析结
果列于表 3 。 从表 3 可以看出 ,不同产地的苦英菜
中木犀草素含量差别较大 , 内蒙古包头苦英菜的
木犀草素含量明显高于湖南湘西苦英菜 。
表 3 样品分析结果
合于苦英菜的测定 ;
4
.
3 苦英菜 中多 酚的存在影 响木犀草素测定的
准确度 , 本文首先通过盐析作用消除多酚的干扰 ,
然后乙 醚萃取富集 , 提高了分析精度 、 分离效果以
及检测灵敏度和木犀草素测定的准确度 ;
4
.
4 实验结果表明 : 内蒙古包头苦荚菜 中的木犀
草素含量高于湖南湘西 。 更适于作为提取木犀草
素的原料 。
〔参考文献〕
、 l夕、2 1`胜人9口厂七产lj
木犀草 素含 量
( m g / g )
湖南湘西 内蒙古包头
1
.
2 5 1
.
8 9
RS D % (
n
= 5 )
0
.
0 3 0
.
0 2
4 结论
4
.
1 在 M e 0 H 一 H 2 0 流动相中 , 醋酸的加入 , 不
仅防止 了峰扩展现象 , 改善 了样品的分离度 ,而且
缩短 了苦英菜的出峰时间 , 节约 了流动相 , 降低 了
检测成本 ;
4
.
2 木犀草素属黄酮类化合物 , 由于分子结构中
酚经基的影响 ,色谱峰严重拖尾 , 醋酸能抑制拖尾
现象 。 经选择 ,流动相中加人 0 . 4% 的冰醋酸 , 可
以得到对称的色谱峰 。 同时有效地防止基线漂移 ,
使该方法的精密度和准确度均提高 ,重现性好 ,适
〔3〕
〔4〕
〔5〕
〔6〕
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姚新生 . 天 然 药物化学 . 第 3 版 . 北京 : 人 民
出版社 , 2 0 0 1 : 1 8 5
收稿 日期 : 2 0 0 4 年 6 月 8 日
D e t e r m i n a t i o n o f l u t e o l i n i n I x e r i s s o n e h i f o l i a b y
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