全 文 ： Drug Evaluation Research 第 35 卷 第 3 期 2012 年 6 月

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HPLC 法测定还阳参药材中绿原酸
李小贝，贺石麟，彭照琪，倪 艳*
山西省中医药研究院，山西 太原 030012
摘 要：目的 建立高效液相色谱法测定还阳参药材中绿原酸的方法。方法 采用 Sino Chrom DDS-BP 色谱柱（250 mm×
4.6 mm，5 μm），流动相为乙腈-0.4%磷酸水溶液（13∶87），体积流量 1.0 mL/min，检测波长 327 nm，柱温 25 ℃。结果 绿
原酸进样量在 0.046～0.644 μg 与峰面积呈良好的线性关系（r＝1），样品平均加样回收率为 101.9%，RSD 值为 1.22%（n＝6）；
检出限和定量限分别为 0.01 ng 和 0.04 ng。结论 此方法简便、准确、重复性好，可用于还阳参药材的质量控制。
关键词：还阳参；绿原酸；高效液相色谱法；定量测定
中图分类号：R927.2 文献标志码：A 文章编号：1674 - 6376 (2012) 03 - 0194 - 03
Determination of chlorogenic acid in Crepis turczaninowii by HPLC
LI Xiao-bei, HE Shi-lin, PENG Zhao-qi, NI Yan
Shanxi Institute of Traditional Chinese Medicine, Taiyuan 030012, China
Abstract: Objective To establish a method of HPLC for the determination of chlorogenic acid in the herbs of Crepis turczaninowii.
Methods The samples were separated on a Sino Chrom DDS-BP column (250 mm × 4.6 mm, 5 μm) with the mobile phase of
acetonitrile-0.4% phosphoric acid (13:87). The flow rate was 1.0 mL/min; The detection wavelength was set at 327 nm; And column
temperature was 25 ℃. Results There was a good linear relationship between the chlorogenic acid and peak area in the range of
0.046—0.644 μg (r = 1). The average recovery rate was 101.9%, and RSD was 1.22% (n = 6). Conclusion The method is simple,
accurate, and highly reproductive, and could be used for the quality control of the herbs of C. turczaninowii.
Key words: Crepis turczaninowii C. A. Mey.; chlorogenic acid; HPLC; determination

还阳参为菊科植物屠还阳参Crepis turczaninowii
C. A. Mey. 的干燥全草，味苦、性微寒，具有益气、
止嗽平喘、清热降火之功效，用于治疗慢性支气管
炎、肺结核等疾病[1]。其含有甾醇类成分，包括伪
蒲公英甾醇乙酸酯、β-谷甾醇等，此外，还含有多
糖类、有机酸类、环烯醚萜类等成分[2]，其中有机
酸以绿原酸为主。绿原酸广泛存在于菊科植物及自
然界其他植物中，具有抗菌消炎、抗病毒等生物活
性[3]，是本品清热解毒功效的物质基础之一，因此
本实验以绿原酸为指标，建立还阳参药材 HPLC 测
定方法，为其质量控制标准的建立提供科学依据。
1 仪器与试药
1.1 仪器
Agilent 1100 series 高效液相色谱仪（G1322A 排
气阀、G1311A 泵、G1313A 柱温箱、G1315B 紫外
检测器、G1328A Man. Inj、Sino Chrom DDS-BP 色谱
柱、Agilent 1100 化学工作站），戴安高效液相色谱仪
（包括 UltiMate 3000RS 泵、UltiMate 3000RS 自动
进样器、UltiMate 3000RS 柱箱、UltiMate 3000RS 可
变波长检测器、Acclaim120 C18 色谱柱（250 mm×
4.6 mm，5 μm）、ChromeleonTM工作站）；KQ3200DB
数控超声波清洗器（昆山市超声仪器有限公司），
BP211D 电子分析天平（德国赛多利斯）。
1.2 试药
绿原酸对照品（质量分数≥98%，中国食品药
品检定研究院，批号 110753-200413），甲醇（分析
纯），磷酸（分析纯），乙腈（一级色谱纯），超纯水；
还阳参药材经山西省药品检验所高天爱主任药师鉴

收稿日期：2012-02-18
基金项目：山西省中药材、中药饮片地方标准研究项目（2011024A）
作者简介：李小贝（1987—），女，湖北襄阳人，在读硕士研究生，研究方向为中药的药效物质基础及制剂的现代化研究。
Tel: 15698413465 E-mail: myfaverbeibei@163.com
*通讯作者 倪 艳（1965—），女，山西五寨人，主任药师，学士学位，主要从事中药的药效物质基础及制剂的现代化研究。
Tel: (0351)4668028 E-mail: niyan_01@hotmail.com
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定为菊科植物屠还阳参 Crepisturczaninowii C. A.
Mey. 的干燥全草。药材来源见表 1。
表 1 药材来源
Table 1 Sources of herbs of C. turczaninowii
编号 批号 采集地 采集时间
CT-1 20110801 山西山阴玉井镇 2011 年 08 月
CT-2 20110901 山西山阴玉井镇 2011 年 09 月
CT-3 20110902 山西山阴玉井镇 2011 年 09 月
CT-4 20110701 山西山阴吴马营乡 2011 年 07 月
CT-5 20110802 山西山阴吴马营乡 2011 年 08 月
CT-6 20110702 山西山阴下喇叭乡 2011 年 07 月
CT-7 20110803 山西山阴下喇叭乡 2011 年 08 月
CT-8 20110903 山西沁源鱼儿泉乡 2011 年 09 月
CT-9 20110904 内蒙古察右中旗科布尔镇 2011 年 09 月
CT-10 20111001 内蒙古察右中旗广益隆镇 2011 年 10 月

2 方法与结果
2.1 波长的选择
利用 HPLC 进行全波长扫描，在 327 nm 波长
下绿原酸峰面积积分值最大，即测得绿原酸量最高，
故选择 327 nm 作为 HPLC 测定绿原酸的检测波长。
2.2 色谱条件
Sino Chrom DDS-BP 色谱柱（250 mm×4.6
mm，5 μm）；流动相为乙腈-0.4%磷酸水溶液（13∶
87）；体积流量 1.0 mL/min；检测波长 327 nm；柱
温 25 ℃。理论塔板数应不低于 12 000。
2.3 对照品溶液的制备
取绿原酸对照品 1.0 mg，精密称定，置于 25 mL
棕色量瓶，加入 50%甲醇溶解并稀释至刻度，摇匀，
制得 40 μg/mL 对照品的溶液。
2.4 供试品溶液的制备
取药材粗粉 0.5 g，精密称定，精密加入 50%甲
醇 50 mL，称定质量，超声提取 30 min，放冷再称
定质量，用 50%甲醇补足减失的质量，滤过，取续
滤液，即得。
2.5 专属性试验
分别测定对照品和供试品，结果在对照品色谱
峰相应保留时间处无干扰，表明供试品溶液中的其
他成分对测定结果无影响，结果见图 1。
2.6 线性范围的考察及其标准曲线的绘制
精密吸取对照品溶液 2、4、6、10、14、18 μL，
分别注入液相色谱仪。按上述色谱条件测定峰面积。
以对照品的进样量为横坐标，峰面积为纵坐标绘制
标准曲线，得回归方程 Y＝3 885.7X－0.184 2，r＝1，
结果表明，绿原酸进样量在 0.046～0.644 μg 与峰面
积呈良好的线性关系。

*-绿原酸
*- chlorogenic acid
图 1 绿原酸对照品（A）和还阳参药材（B）的 HPLC 图
Fig. 1 HPLC chromatograms of chlorogenic acid reference
substance (A) and herbs of C. turczaninowii (B)
2.7 精密度试验
精密吸取对照品溶液 10 μL，按上述色谱条件
重复进样 6 次，绿原酸峰面积值 RSD 为 0.22%
（n＝6），表明仪器的精密度良好。
2.8 重复性试验
取同一份样品 6 份，按上述方法测定，绿原酸
平均质量分数 RSD 为 1.14%（n＝6），表明本方法
重复性良好。
2.9 稳定性试验
取同一份供试品溶液，分别于 0、2、4、6、8、
10 h 进样 10 μL，测得绿原酸的平均峰面积值 RSD
为 0.22%（n＝6），表明供试品溶液至少在 10 h 内
稳定。
2.10 加样回收率试验
取同一批已测定样品 6 份，每份 0.25 g，精密
称定，分别加入绿原酸对照品溶液适量，按“2.4”
项下方法制备供试品溶液，按上述色谱条件进行测
定，结果平均回收率为 101.9%，RSD 为 1.22%（n＝
6），表明该方法准确度好。
2.11 样品测定
取 10 个批次不同产地还阳参药材样品，按照上
述方法制备供试品溶液，依照已确定的色谱条件测
定，按峰面积值计算样品中绿原酸的质量分数。结
果还阳参药材中绿原酸质量分数为 0.072 8%～
0.265 4%，平均值为 0.134 8%。结果见表 2。


A
B
0 2 4 6 8 10 12 14
0 2 4 6 8 10 12 14

t / min
*
*
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表 2 样品测定结果
Table 2 Determination of chlorogenic acid
序 号 质量分数/%
CT-1 0.072 8
CT-2 0.073 3
CT-3 0.075 5
CT-4 0.142 3
CT-5 0.144 1
CT-6 0.080 5
CT-7 0.080 5
CT-8 0.265 4
CT-9 0.207 3
CT-10 0.205 9

2.12 耐用性
本实验考察了实验条件的耐用性，在相同的实验条
件下用不同的仪器，对相同的样品进行了分析。
色谱条件一：安捷伦液相色谱仪：Sino Chrom
ODS-BP 色谱柱（250 mm×4.6 mm，5 μm），流动相
为乙腈-0.4%磷酸水溶液（13∶87），体积流量 1.0
mL/min，检测波长327 nm，柱温25 ℃，进样量10 μL。
色谱条件二：戴安液相色谱仪：Acclaim120 C18
色谱柱（250 mm×4.6 mm，5 μm），流动相为乙腈-
0.4%磷酸水溶液（13∶87），体积流量 1.0 mL/min，
检测波长 327 nm，柱温 25 ℃，进样量 10 μL。
结果显示两种条件下测量结果基本无差别，质
量分数分别为 0.073 3%和 0.071 9%，说明该方法耐
用性较好。
2.13 检出限和定量限
取供试品溶液逐级稀释后，按照上述色谱条件
进样测定。以 S/N＝3 求得绿原酸的检出限为 0.01
ng；以 S/N＝10 求得绿原酸的定量限为 0.04 ng。
3 讨论
还阳参为我国民间习用药材，尚未收入国家和
地方标准。本实验对其进行了系统研究，首次建立
了 HPLC 测定方法，并对其进行了方法学考察，得
出该方法简单可行、灵敏度高、重现性好、准确度
高，并使用安捷伦和戴安两种液相色谱仪进行了测
定，色谱峰和分离度均良好，测定结果不受影响，
说明本方法耐用性好，可用于还阳参药材的质量控
制，为其质量标准的建立提供了科学依据及其纳入
地方标准奠定基础。
本实验对流动相进行了考察。参考《中国药典》
2010 年版一部金银花绿原酸的定量测定法，以乙
腈-0.4%磷酸（13∶87）作为流动相[4]，以此为基础
对流动相的组成比例进行了调整，分别以乙腈-0.4%
磷酸（13∶87）、乙腈-0.4%磷酸（12∶88）、乙腈-0.4%
磷酸（11∶89）为流动相进行了测定，结果表明流
动相比例为乙腈-0.4%磷酸（13∶87）时，绿原酸出
峰最快，且峰形较好，和样品中其他组分峰可达基
线分离，最后确定以乙腈-0.4%磷酸（13∶87）作为
流动相。
实验结果显示，CT-1、CT-2、CT-3、CT-6、CT-7
批次的样品绿原酸质量分数均较低，CT-8、CT-9、
CT-10 批次的样品绿原酸质量分数较高，其中 CT-8
最高（0.265 4%），可能与样品采集时间和产地有关。
不同产地的药材性状有所差别，内蒙产的还阳参根
部较其他产地还阳参的根部发达，长治产还阳参生长
环境比较肥沃，叶片肥大，这可能是导致 CT-8、CT-9、
CT-10 3 个批次还阳参绿原酸较 CT-1、CT-2、CT-3、
CT-6、CT-7 批次样品绿原酸质量分数高的原因。
参考文献
[1] 江苏新医学院. 中药大辞典 [M]. 上册. 上海: 上海人
民出版社, 1977.
[2] 倪 艳, 卢方晋, 郝旭亮, 等. 还阳参化学成分的研究
[J]. 中国中医药信息杂志, 2007, 14(4): 51-52.
[3] 张鞍灵, 马 琼, 高锦明, 等. 绿原酸及其类似物与生
物活性 [J]. 中草药, 2001, 32(2): 173-175.
[4] 中国药典 [S]. 一部. 2010.