全 文 ：［收稿日期］ 20101019(002)
［基金项目］ 科技部“十一五”支撑专项(2006BA106A12-13);
云南省重大专项(［2007］1718)
［通讯作者］ * 张金渝，Tel:0871-8060003，13888872457，E-mail:
Jyzhang2008@ 126． com
不同产地野生滇龙胆中主要裂环烯醚萜类成分的含量比较
沈涛1，2，金航1，杨涛1，杨美权1，杨维泽1，王元忠1，张金渝1，2*
(1. 云南省农业科学院药用植物研究所，昆明 650223;2. 云南大学生命科学学院，昆明 650091)
［摘要］ 目的:采用高效液相色谱法测定不同产地野生滇龙胆中龙胆苦苷、獐牙菜苦苷及獐牙菜苷的含量。方法:岛津
Shim-pack VP-ODS 柱(4. 6 mm × 150 mm，5 μm)，流动相甲醇-水(30∶ 70)，流速 1. 0 mL·min － 1，龙胆苦苷检测波长 270 nm，獐牙
菜苦苷及獐牙菜苷检测波长 245 nm，柱温 25 ℃。结果:龙胆苦苷、獐牙菜苦苷、獐牙菜苷的线性范围为 0. 4 ～ 2 mg·L － 1;相关系
数分别为 0. 999 7，0. 999 6，0. 998 7;回收率分别为 100. 04% (RSD 1. 49%)，98. 48% (RSD 1. 67%)，98. 46% (RSD 1. 15%)结
论:用本法测定不同产地野生滇龙胆中 3 种成分含量，方法可行，结果可靠，为野生滇龙胆资源的开发与利用提供资料。
［关键词］ 高效液相色谱法;滇龙胆;龙胆苦苷;獐牙菜苦苷;獐牙菜苷
［中图分类号］ R284. 1 ［文献标识码］ A ［文章编号］ 1005-9903(2011)13-0070-04
Comparison of Content of Secoiridoids in Wild
Gentiana rigescens from Different Places
SHEN Tao1，2，JIN Hang1，YANG Tao1，YANG Mei-quan1，YANG Wei-ze2，WANG Yuan-zhong2，ZHANG Jin-yu1，2*
(1. Institute of Medicinal Plant，Yunnan Academy of Agricultural Sciences，Kunming 650223，China;
2. College of Life Science，Yunnan University，Kunming 650091，China)
［Abstract］ Objective:To develop an HPLC method for determining the content of gentiopicroside，
swertiamarin and sweroside in wild Gentiana rigescens． Method:Column was Shim-pack VP-ODS(4. 6 mm ×
150 mm，5 μm)． The mobile phase consisted of CH3OH and water(30∶ 70)． Flow rate was 1. 0 mL·min
－ 1 at 25 ℃ ．
Detecting wavelength of gentiopicroside was at 270 nm while swertiamarin and sweroside were detected at 245 nm．
Result:The linear rang of calibration curve was 0. 4-2 g·L － 1 with the relation coefficient of 0. 999 7，0. 999 6 and
0. 998 7 respectively． The average recovery of three active constituents was 100. 04%(RSD 1. 49%)，98. 48%(RSD
1. 67%)and 98. 46%(RSD 1. 15%)． Conclusion:The method is accurate and can supply basis for the exploitation
and utilization of Gentiana rigescens resources．
［Key words］ HPLC;Gentiana rigescens;gentiopicroside;swertiamarin;sweroside
滇龙胆 Gentiana rigescens 为龙胆科药用植物。
是传统中药龙胆的重要植物来源，为《中国药典》所
收录［1］。裂环烯醚萜类(secoiridoids)是龙胆科药用
植物的特征性成分。龙胆苦苷(gentiopicroside)、獐
牙菜苦苷(swertiamarin)、獐牙菜苷(sweroside)3 种
裂环烯醚萜类是滇龙胆的主要活性物质［2］。该类物
质具有保肝，健胃，镇痛，抗病毒，促进细胞分裂，加
快伤口愈合等多种功效［3-4］。滇龙胆是云南的道地
药材，是多种中成药的主要原料，需求量逐年增加。
目前野生滇龙胆仍为滇龙胆药材的主要来源［4］。滇
龙胆在云南分布较广，由于各产地自然环境不同，其
药材质量也会有所差别。本实验采用超声波提取
法，利用高效液相色谱测定云南曲靖、昆明、玉溪、楚
雄、文山的 10 批野生滇龙胆中龙胆苦苷、獐牙菜苦
苷、獐牙菜苷 3 种成分的含量，依据测定结果对药材
进行聚类分析，为野生滇龙胆资源开发利用及质量
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第 17 卷第 13 期
2011 年 7 月
中国实验方剂学杂志
Chinese Journal of Experimental Traditional Medical Formulae
Vol． 17，No． 13
Jul．，2011
标准的完善提供参考。
1 材料
LC-10 ATVP 高效液相色谱仪日本岛津，包括
LC-10AT VP 泵，7725i 手动进样器，SPD-M10A VP
二级阵列检测器(190-800 nm);SY3200-T 超声波清
洗仪(上海声源超声波仪器设备有限公司);1 /10 万
电子分析天平(美国奥豪斯)。
供定 量 测 试 用 的 对 照 品 龙 胆 苦 苷 (批 号
110770-201013)，獐 牙 菜 苦 苷 (批 号 110785-
200203)，獐牙菜苷(批号 111742-200501)均购自中
国药品生物制品检定所。甲醇为色谱纯(Fisher 公
司);其他试剂均为分析纯。
样品于 2009 年 11 月份采自云南昆明、玉溪、楚
雄、文山野生滇龙胆产区，取全株，50 ℃烘干，粉碎
过 100 目筛待用。
2 方法
2. 1 色谱条件 色谱柱为岛津 Shim-pack VP-ODS
液相色谱柱(4. 6 mm × 150 mm，5 μm)，流动相甲醇-
水(30∶ 70)，流速 1. 0 mL·min － 1，进样量 10 μL，柱
温 25 ℃，龙胆苦苷检测波长 270 nm，獐牙菜苦苷及
獐牙菜苷检测波长 245 nm(图 1)。
A. 270 nm;B. 245 nm;C. 270 nm 供试品;D. 245 nm 供试品;
1. 龙胆苦苷;2. 樟牙菜苦苷;3. 樟牙莱苷
图 1 滇龙胆中 3 种成分 HPLC
2. 2 对照品溶液的制备 分别精密称取龙胆苦苷、
獐牙菜苦苷、獐牙菜苷对照品各 10 mg 置于 10 mL
量瓶中加适量甲醇定容，摇匀，配制成 1 g·L － 1的对
照品溶液。
2. 3 供试溶液的制备 精密称取滇龙胆粉末 0. 4 g
放入具塞试管中，每次加入 5 mL 甲醇，超声提取
30 min(重复 3 次)，合并提取液，浓缩并转移至
10 mL量瓶中用甲醇定容，0. 45 μm 过滤，备用。
2. 4 线性关系考察 精密吸取 1 g·L － 1龙胆苦苷、
獐牙菜苦苷、獐牙菜苷对照品溶液 0. 2，0. 3，0. 4，
0. 5，0. 6，0. 7，0. 8，0. 9，1. 0 mL 分别置于 5 mL 量瓶
中用甲醇定容至刻度［5］。分别吸取 10 μL 进样。以
峰面积为纵坐标(Y)，溶液浓度为横坐标(X)做标准
曲线，计算回归方程，龙胆苦苷为 Y = 1 986 934. 5
X － 495 519. 9(r = 0. 999 7);獐牙菜苦苷为 Y =
1. 39 × 105X － 5. 79 × 105(r = 0. 999 6);獐牙菜苦苷
为 Y = 1. 82 × 106X － 1. 14 × 106(r = 0. 998 7)。结果
表明龙胆苦苷、獐牙菜苦苷、獐牙菜苷在 0. 4 ～ 2 mg·
L － 1与峰面积线性关系良好。
2. 5 精密度试验 分别精密吸取 1. 6 g·L － 1的龙胆
苦苷、獐牙菜苦苷、獐牙菜苷对照品溶液在上诉色谱
条件下测定各对照品色谱峰峰面积，龙胆苦苷 RSD:
0. 53%(n = 6)。獐牙菜苦苷、獐牙菜苷 RSD 分别为
0. 81%，0. 78%(n = 6)，表明仪器精密度良好。
2. 6 稳定性试验 称取样品粉末 0. 4 g 按照 2. 3 项
方法制备样品溶液，在 0，2，4，6，8 h 进样，测定獐牙
菜苦苷、獐牙菜苷峰面积;并计算 RSD 分别为
1. 91%，1. 35%，1. 74%(n = 5)。表明样品溶液在 8
h 内稳定。
2. 7 重复性试验 精密称取 6 份 0. 4 g 样品粉末，按
2. 3 项方法制备样品溶液。测定龙胆苦苷、獐牙菜苦
苷、獐牙菜苷峰面积，并计算 RSD 分别为 2. 17%，
2. 31%，1. 91%(n = 6)，表明方法重现性良好。
2. 8 加样回收率 精密称取已知含量的样品(文山
新寨坡)粉末 0. 2 g 共 6 份。每份精确加龙胆苦苷 2
mg、獐牙菜苦苷 0. 2 mg、獐牙菜苷对照品各 0. 2 mg，
按 2. 3 项制备方法制备供试品溶液。在上述色谱条
件下测定龙胆苦苷及獐牙菜苦苷、獐牙菜苷的含量。
结果表明龙胆苦苷回收率为 100. 04%、獐牙菜苦苷回
收率为 98. 09%、獐牙菜苷回收率为 97. 72%。RSD 分
别为 1. 49%，1. 45%，1. 41%(n = 6)。结果见表 1。
2. 9 样品测定 分别将 10 批不同产地的滇龙胆样品
按照 2. 3 项的方法进行处理，测定并计算龙胆苦苷、獐
牙菜苦苷、獐牙菜苷的质量分数，结果见图 1及表 2。
·17·
沈涛，等:不同产地野生滇龙胆中主要裂环烯醚萜类成分的含量比较
表 1 回收率试验(n = 6)
有效成分 No． 样品量 / g 样品含量 /mg 测定值 /mg 回收率 /% 平均值 /% RSD /%
龙胆苦苷 1 0. 201 4. 147 6. 131 99. 21 100. 04 1. 49
2 0. 212 4. 361 6. 396 101. 77
3 0. 204 4. 194 6. 203 100. 46
4 0. 211 4. 340 6. 293 97. 63
5 0. 224 4. 617 6. 641 101. 21
6 0. 210 4. 328 6. 327 99. 93
獐牙菜苦苷 1 0. 200 0. 200 0. 403 98. 45 98. 09 1. 45
2 0. 223 0. 223 0. 427 97. 99
3 0. 202 0. 202 0. 402 100. 12
4 0. 202 0. 202 0. 404 98. 87
5 0. 202 0. 202 0. 408 97. 03
6 0. 203 0. 203 0. 412 96. 06
獐牙菜苷 1 0. 216 0. 302 0. 507 97. 48 97. 72 1. 41
2 0. 204 0. 286 0. 494 96. 03
3 0. 212 0. 297 0. 501 98. 07
4 0. 205 0. 287 0. 494 96. 86
5 0. 205 0. 287 0. 492 97. 76
6 0. 211 0. 296 0. 495 100. 11
表 2 不同产地滇龙胆 3 种指标性成分的质量分数(n = 6) %
No． 产地 龙胆苦苷 獐牙菜苦苷 獐牙菜苷
1 昆明小哨 2. 10 0. 07 0. 08
2 昆明筇竹寺 1. 94 0. 03 0. 08
3 玉溪安华乡 2. 37 0. 04 0. 08
4 曲靖葵山镇 2. 51 0. 05 0. 10
5 文山二塘 2. 49 0. 07 0. 10
6 文山小街 2. 17 0. 09 0. 08
7 文山新寨坡 2. 06 0. 10 0. 14
8 楚雄水井房 2. 83 0. 08 0. 22
9 楚雄紫溪山 3. 18 0. 10 0. 12
10 楚雄太平镇 2. 64 0. 12 0. 10
2. 10 聚类分析 以表 2 数据为依据，通过 SPSS 软
件，利用欧氏平均距离法［6］对 10 个不同产地的滇龙
胆药材进行聚类分析，结果见图 2。
图 2 显示 10 个产地的滇龙胆被分成 3 个类群。
楚雄紫溪山和楚雄水井房的滇龙胆归为一类;昆明
小哨、昆明筇竹寺、文山小街、文山新寨坡的滇龙胆
图 2 不同产地滇龙胆的聚类分析
作为第二类;曲靖葵山镇、玉溪安华乡、文山二塘、楚
雄太平镇的滇龙胆归为第三类。其中龙胆苦苷含量
由高到低为第一类 ＞第三类 ＞第二类。
3 讨论
3. 1 检测波长的选择 考察不同比例甲醇和水作
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中国实验方剂学杂志
Chinese Journal of Experimental Traditional Medical Formulae
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为流动相，结果显示，甲醇和水比例为 30 ∶ 70 时样品
色谱图峰形良好。通过分析对照品色谱图发现，龙
胆苦苷在 270 nm 条件下有最大吸收值，故选取 270
nm 为龙胆苦苷的检测波长;獐牙菜苦苷和獐牙菜苷
均在 245 nm 下有最大吸收峰值，故选取 245 nm 为
两者的检测波长。
3. 2 提取条件的选取 裂环稀醚萜类物质易溶于
甲醇［7］。超声波提取简便、高效。超声提取 30 min，
重复 3 次时提取效果最好，故本次试验选用甲醇为
溶剂，超声波提取法提取滇龙胆中有效成分。
3. 3 不同产地滇龙胆质量的差异 不同产地滇龙
胆中龙胆苦苷、獐牙菜苦苷、獐牙菜苷的含量有一定
差别。楚雄紫溪山样品中龙胆苦苷含量最高，昆明
筇竹寺采集的样品中龙胆苦苷含量最低。楚雄太平
镇采集的样品中獐牙菜苦苷含量最高，昆明筇竹寺
采集的样品中獐牙菜苦苷含量最低。楚雄水井坊采
集样品中獐牙菜苷含量最高，玉溪安华乡的样品中
獐牙菜苷含量最低。结合聚类结果，分析发现来自
楚雄的滇龙胆 3 种有效成分的含量均较高。滇龙胆
常生长于疏林下，喜爱阳光充足，气候凉爽的生
境［9］。楚雄 3 个采集点年日照时数较长，平均为 2
317. 3 h。温度较凉爽，平均温度为 15. 4 ℃，其中楚
雄紫溪山和楚雄水井房的气候条件最为接近［8］，有
效成分含量较高可能与以上条件有关。
3. 4 滇龙胆入药部位探讨 滇龙胆一直以来主要
以根茎部位入药，近年研究发现滇龙胆地上部分除
含有龙胆苦苷外还含有多种有效成分［10］。各产地
滇龙胆有效成分虽有差异但全株龙胆苦苷含量均高
于《中国药典》2010 年版龙胆药材中龙胆苦苷含量
(不低于 1. 5%)，说明龙胆全株都具有药用价值。
随着药材需求量的逐年增加，野生滇龙胆资源正在
锐减。通过进一步的药理学研究，若滇龙胆能全株
入药将有利于资源的充分利用。
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［责任编辑 蔡仲德］
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沈涛，等:不同产地野生滇龙胆中主要裂环烯醚萜类成分的含量比较