全 文 ：Chinese Journal of New Drugs 2013，22(13)
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中国新药杂志 2013 年第 22 卷第 13 期
［基金项目］ 新疆维吾尔自治区科技支撑计划( 201133127)
［作者简介］ 常军民，男，博士，教授，主要从事天然药物分析研究。
联系电话: ( 0991) 4366620，E-mail: cjmcjn2471@ sohu． com。
·实验研究·
高效液相色谱-质谱法同时测定天山花楸枝叶及果实中
苦杏仁苷和金丝桃苷的含量
常军民1，向 阳2，孟 磊3，张 倩1，何家伟1，王 岩1
(1 新疆医科大学 1 药学院，2 一附院检验科，3 分析测试中心，乌鲁木齐 830011)
［摘要］ 目的:建立同时测定天山花楸枝叶及果实中苦杏仁苷和金丝桃苷含量的高效液相色谱-质谱分
析方法。方法:样品经乙醚回流脱脂、甲醇回流提取后，经 Hypersil BDS C18(150 mm × 4． 6 mm，5 μm)色谱
柱，以乙腈-0． 1%甲酸为流动相，在流速为 0． 8 mL·min －1条件下分离，采用电喷雾离子源(ESI)，负离子扫
描，选择性离子(SIM)检测。结果:苦杏仁苷在 1． 26 ～ 37． 8 μg·mL －1，金丝桃苷在 1． 216 ～ 36． 48 μg·mL －1范
围内具有良好的线性关系，相关系数分别为 0． 999 6 和 0． 999 8;苦杏仁苷和金丝桃苷的检出限分别为 0． 01
和 0． 004 μg·mL －1，定量限分别为 0． 033 和 0． 015 μg·mL －1;回收率分别为 98． 0% ～ 102． 8%和 98． 9% ～
102． 0%;相对标准偏差(ＲSD)均小于 2%。结论:本方法灵敏、快速、专属性强，可以用于天山花楸中苦杏仁
苷和金丝桃苷的检测。
［关键词］ 高效液相色谱-质谱;天山花楸;苦杏仁苷;金丝桃苷
［中图分类号］ Ｒ927． 2 ［文献标志码］ A ［文章编号］ 1003 － 3734(2013)13 － 1578 － 05
Determination of amygdalin and hyperoside in branches，leaves and
fruits of Sorbus tianschanica Ｒupr． by HPLC-MS
CHANG Jun-min1，XIANG Yang2，MENG Lei3，ZHANG Qian1，HE Jia-wei1，WANG Yan1
(1 College of Pharmacy，2 First Affiliated Hospital，3 Analytical and Testing Center，
Xinjiang Medical University，Urumqi 830011，China)
［Abstract］ Objective:To develop a high performance liquid chromatography-mass spectrometry(HPLC-
MS)method for determination of amygdalin and hyperoside in the branches，leaves and fruits of Sorbus tianschanica
Ｒupr． Methods:After being degreased by refluxing process with diethyl ether and extracted with methanol，the sam-
ple solutions were separated on a Hypersil BDS C18 column(150 mm ×4． 6 mm，5 μm)eluted with mobile phase of
acetonitrile-water containing 0． 1% foemic acid at a flow rate of 0． 8 mL·min －1，then the separated components were
detected by MS detector with electrospray ionization(ESI) ，negative scan mode and selected ion monitoring(SIM)
mode． Ｒesults:The calibration curves showed good linearity within concentrations of 1． 26 ～ 37． 8 μg·mL －1 for a-
mygdalin and 1． 216 ～ 36． 48 μg·mL －1 for hyperoside，the correlation coefficients were 0． 999 6 and 0． 999 8，re-
spectively;the detection limits were 0． 01 and 0． 004 μg·mL －1，the limits of quantization were 0． 033 and 0． 015
μg·mL －1，and the average recoveries were 98． 0% ～102． 8% and 98． 9% ～102． 0%，respectively． The ＲSD val-
ues were less than 2% ． Conclusion:The method is sensitive，rapid and selective，and can be used for the determi-
nation of amygdalin and hyperoside in Sorbus tianschanica Ｒupr．
［Key words］ HPLC-MS;Sorbus tianschanica Ｒupr．;amygdalin;hyperoside
天山花楸 Sorbus tianschanica Ｒupr．系蔷薇科花 楸属植物［1］，为维吾尔和哈萨克族民间习用药材，
常以嫩枝叶、果实入药，具有清热利肺、补脾生津、止
咳等功效。相关文献表明［2 － 3］:天山花楸水煮醇沉
液具有显著的镇咳、祛痰、平喘作用;天山花楸醇提
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物具有一定的镇咳、平喘作用，能松弛豚鼠支气管平
滑肌，能对抗乙酰胆碱和组胺引起的平滑肌收缩反
应。黄酮类化合物及氰苷类化合物为天山花楸的主
要有效成分。苦杏仁苷为氰苷类化合物，具有止
咳、祛痰、平喘等药理活性;金丝桃苷为黄酮类化
合物，具有解痉、镇咳、抗炎等作用［4］。为有效地
控制天山花楸药材及其制剂的质量，建立苦杏仁
苷、金丝桃苷等有效成分的含量测定方法是十分
重要的。
目前，检测天山花楸枝叶或果实中苦杏仁苷、金
丝桃苷等有效成分的方法主要有高效液相色谱法、
毛细管电泳法［5 － 9］，但这些方法存在灵敏度低、选择
性差的缺点，检测结果差异较大。而液相色谱质谱
联用技术具有灵敏度高、选择性强等特点，近几年广
泛应用于天然药物中有效成分检测方法的研究
中［10 － 12］。为了准确获得天山花楸枝叶和果实中苦
杏仁苷和金丝桃苷的含量，本实验采用高效液相色
谱-质谱法的 SIM方式对不同产地、不同采收时间的
天山花楸枝叶及果实样品的苦杏仁苷、金丝桃苷同
时进行定量测试，具有较高的选择性和灵敏度。
材 料
Agilent 1100 series LC /MSD:含四元高压梯度泵
G1311A、紫外检测器及质谱检测器(配大气压化学
源和电喷雾离子源) ，Chemstation 色谱工作站(美国
安捷伦公司) ;Sartorius AG BS110S 电子天平(北京
赛多利斯天平有限公司) ;Milli Q 纯水仪(Milli-
pore公司)。
天山花楸枝叶与果实采自新疆呼图壁林场、南
山林场、阜康林场，并经新疆医科大学药学院生药 /
天药教研室帕丽达教授鉴定。金丝桃苷对照品(供
含量测定，中国食品药品检定研究院，批号:111521-
200303) ;苦杏仁苷对照品(供含量测定，中国食品
药品检定研究院，批号:110820-200403)。乙腈
(Merck，色谱纯) ;甲醇(sigma-aldrich，色谱纯) ;无
水甲酸(天津市光复精细化工研究所色谱纯)。
方法与结果
1 标准溶液的配制
取苦杏仁苷对照品适量，精密称定，用色谱甲醇
溶解并稀释至刻度，摇匀，制成含有苦杏仁苷 630
μg·mL －1的溶液，即得。取金丝桃苷对照品适量，精
密称定，用色谱甲醇溶解并稀释至刻度，摇匀，制成
含有金丝桃苷 608 μg·mL －1的溶液。
精密量取上述 2 个对照品溶液各 2． 0 mL，置同
一 10 mL的棕色量瓶内，用色谱甲醇稀释至刻度，摇
匀，即得对照品混合溶液。(每 1 mL 含苦杏仁苷
126 μg、金丝桃苷 121． 6 μg)。
2 样品溶液制备
分别取天山花楸枝叶和果实粗粉 5 g，精密称
定，置于 2 个 250 mL 圆底烧瓶中，各加入乙醚 100
mL，35 ℃加热回流至无色，药渣挥干后，分别加入甲
醇 75 mL，40 ℃加热回流 1 h，提取 3 次，提取液过
滤、合并，浓缩，并用甲醇定容至 100 mL 量瓶中，摇
匀，即得供试品溶液。
3 色谱-质谱条件
Hypersil BDS C18色谱柱(150 mm × 4． 6 mm，
5 μm) ;流动相:乙腈-0． 1% 甲酸(15 ∶ 85) ;柱温:
25 ℃;流速:0． 8 mL·min －1;检测波长:215 nm;进样
量:10 μL。在选择性离子检测(SIM)模式下，采用
电喷雾离子(ESI)源(负离子模式) ，检测对象:苦杏
仁苷离子 m/z:456，金丝桃苷离子 m/z:463;干燥气
流量为 12 L·min －1;雾化室压力为 275． 9 kPa
(40 psi) ;干燥气温度为 350 ℃。总离子流色谱图见
图 1 ～ 3。苦杏仁苷和金丝桃苷的质谱图见图 4 和
图 5。选择性离子图谱见图 6 和图 7。
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图 7 天山花楸果实的金丝桃苷选择性离子色谱图
4 线性关系、检出限和定量限
分别精密量取上述混合对照品溶液 0． 1，0． 2，
0． 5，1，2，3 mL，分别置于 10 mL的棕色量瓶中，用甲
醇稀释至刻度，摇匀，即得。分别精密吸取 10 μL，
照上述的色谱-质谱条件下进行分析，以进样浓度对
峰面积进行线性回归，得到苦杏仁苷和金丝桃苷的回
归方程分别为:Y = 24 958X － 7 692． 3(r = 0． 999 6)和
Y =64 425X －18 974(r =0． 999 8)。结果表明，苦杏仁
苷对照品在 1． 26 ～ 37． 8 μg·mL －1、金丝桃苷对照品
1． 216 ～36． 48 μg·mL －1范围内线性良好。
采用空白样品中添加目标组分的方法，以信噪
比(S /N)≥3 和≥10 分别确定苦杏仁苷和金丝桃苷
的检出限(LOD)和定量限(LOQ) ，苦杏仁苷和金丝
桃苷的检出限分别为 0． 01 和 0． 004 μg·mL －1，定量
限分别为 0． 033 和 0． 015 μg·mL －1。
5 精密度考察
取对照品混合溶液连续进样 6 次，每次 10 μL，
以峰面积计算，得对照品苦杏仁苷和金丝桃苷的
ＲSD分别为 0． 51%和 1． 3%(n = 6)。
6 重复性
取天山花楸果实样品约 5 g，6 份，精密称定，按
照“2”项方法操作，平行制备供试品溶液，在上述的
色谱-质谱条件下进行分析，苦杏仁苷和金丝桃苷含
量的 ＲSD分别为 1． 3%和 1． 1%。
7 稳定性
取天山花楸果实供试品溶液，室温静置，分别于
0，2，4，8，12 h进样分析，进样量 10 μL。苦杏仁苷和
金丝桃苷峰面积的 ＲSD分别为 0． 99%和 1． 2%。
8 加样回收率
精密移取已测知含量的果实供试品溶液 2． 5 mL，
置 10 mL 棕色量瓶中，精密加入定量低、中、高浓度
的对照品溶液，加甲醇稀释至刻度，在上述的色谱-
质谱条件下进行分析，计算苦杏仁苷和金丝桃苷的
回收率，见表 1 和表 2。
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表 1 果实样品中苦杏仁苷加样回收率测定结果
浓度 实际量 /μg·mL －1 加入量 /μg·mL －1 测得量 /μg·mL －1 回收率 /% 平均回收率 /% ＲSD /%
低 7． 61 4 11． 66 101． 2 100． 2 1． 7
7． 61 4 11． 53 98． 0
7． 61 4 11． 62 100． 2
中 7． 61 8 15． 69 101． 0
7． 61 8 15． 64 100． 4
7． 61 8 15． 48 98． 4
高 7． 61 12 19． 95 102． 8
7． 61 12 19． 50 99． 8
7． 61 12 19． 69 100． 7
表 2 果实样品中金丝桃苷加样回收率测定结果
浓度 实际量 /μg·mL －1 加入量 /μg·mL －1 测得量 /μg·mL －1 回收率 /% 平均回收率 /% ＲSD /%
低 4． 37 2． 5 6． 86 99． 6 100． 3 1． 3
4． 37 2． 5 6． 84 98． 9
4． 37 2． 5 6． 92 102． 0
中 4． 37 5 9． 33 99． 2
4． 37 5 9． 4 100． 6
4． 37 5 9． 45 101． 6
高 4． 37 7． 5 11． 89 100． 3
4． 37 7． 5 11． 84 99． 6
4． 37 7． 5 11． 96 101． 2
9 样品的含量测定
分别取不同产地、不同采摘时期的天山花楸枝
叶和果实样品，按照“2”项方法制备供试品样品，分
别精密量取上述溶液 5 mL，置 10 mL 的棕色量瓶
内，加甲醇稀释至刻度，摇匀，过 0． 45 μm微孔滤膜，
每次进样 10 μL，记录峰面积，采用外标法计算含
量。结果见表 3 和 4。
表 3 天山花楸枝叶样品测定结果
采摘
产地
采摘
年份
苦杏仁苷的含量
/mg·g － 1
金丝桃苷的含量
/mg·g － 1
呼图壁 2007 0． 365 0． 959
呼图壁 2011 0． 327 0． 813
阜康 2011 0． 090 0． 797
南山 2011 0． 097 0． 747
表 4 天山花楸果实样品测定结果
采摘
产地
采摘
年份
苦杏仁苷的含量
/mg·g － 1
金丝桃苷的含量
/mg·g － 1
呼图壁 2007 0． 622 0． 450
呼图壁 2011 1． 470 0． 586
南山 2011 0． 953 0． 249
讨 论
1 样品前处理的选择
本实验选用加热回流提取方法和超声提取方法
对样品进行处理，发现超声提取的样品分离效果不
如加热回流提取的效果好，故本实验选用加热回流
的前处理方法。同时选择了用石油醚和乙醚进行前
处理，结果表明，乙醚脱脂效果更佳，可有效去除脂
溶性杂质，故选用乙醚进行脱脂处理。采用甲醇提
取，温度条件考察了 40，60，80 ℃，结果表明 40 ℃提
取效果更好，故采用 40 ℃提取药材。
2 色谱-质谱条件的选择
不同的流动相对样品分离效果有一定影响，本
实验比较了乙腈-水和甲醇-水为流动相对质谱信号
的影响，以甲醇-水为流动相时，质谱信号峰相对较
低，而以乙腈-水为流动相时，质谱信号峰明显提高，
峰形对称，且分离效果较好，同时考察不同浓度(0，
0． 05%，0． 1%)的甲酸对质谱信号的影响，结果表
明，0． 1%的甲酸质谱信号最强，且峰形对称性好。
本实验选择了乙腈-水加 0． 1%的甲酸溶液为流动
相。对苦杏仁苷和金丝桃苷的对照品混合液在正、
(下转第 1586 页)
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术二酮具有抗肿瘤等方面的生理活性［9 － 12］。但莪
术醇的相对含量较低，吉马酮的相对含量较高［13］，
故本实验选取吉马酮作为含量测定的指标，建立定
量校正模型。
2010 年版《中华人民共和国药典》并未给出郁
金药材的含量测定项，而高效液相色谱法的分析耗
时较长，样品的提取操作繁琐，不适用于大批量样品
的快速无损分析，故选取近红外光谱对温郁金药材
进行分析。
本实验利用近红外漫反射光谱分析了温郁金粉
末，比较了不同的光谱预处理方法对建模结果的影
响，优选并建立了温郁金中吉马酮的定量校正模型，
模型的相关系数 0． 998 65，校正均方差为 0． 006 91，
内部验证均方差为 0． 002 41。结果表明，该方法准
确、快速、无污染，可用于温郁金中吉马酮含量的快
速测定。
［ 参 考 文 献 ］
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编辑:周卓 /接受日期:
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2013 － 05 － 08
(上接第 1581 页)
负两种离子扫描模式下对比，结果表明，在负离子模
式下，峰强度大。因此，本实验选择负离子模式扫描。
3 含量结果
从所测的不同产地、不同部位药材的结果来看，
天山花楸果实中苦杏仁苷的含量较枝叶中的高，金
丝桃苷在枝叶中含量较在果实中高，不同产地之间
含量差异较大，与 HPLC法测定值比较［5 － 9］，结果均
较高。这些数据为以后制定天山花楸的质量标准提
供了依据，同时有助于对药材资源部位的综合开发
利用。
［ 参 考 文 献 ］
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编辑:周卓 /接受日期:2013 － 04 － 23