全 文 ：MAPKs)级联是细胞内重要的信号转导系统 , 细胞运用这一系统
可将胞外刺激信号传递给胞核 ,从而参与细胞增殖 、分化 、转化及
凋亡等一系列生理 、病理过程。 P38MAPK通路是 MAPKs级联系
统中的重要一支 , 其表达和活性的变化可有效调节和阻断关键的
信号通路 , 调节细胞凋亡 [ 3 , 4] 。本实验采用免疫组化法检测了不
同浓度 β -榄香烯作用下 , 胃癌 BAC823细胞内 P-P38MAPK的
表达情况。实验结果显示 , 各药物处理组 P-P38MAPK的表达
均强于空白对照组(P<0.01)。 且随药物浓度的增加 , P-
P38MAPK的表达亦增强。由 P38MAPK的活化情况说明 β -榄
香烯在作用于 BAC823细胞时可激活胞内的 P38MAPK通路 , 且
此激活作用随药物浓度的增加而增强。由此我们推测 β -榄香
烯在诱导肿瘤细胞凋亡的过程 , 很可能与 P38MAPK通路的参与
有关。但 P38MAPK通路在 β -榄香烯诱导肿瘤细胞 BAC823凋
亡的过程中是否确实起到了促凋亡调控作用 , 对其他 MAPK通
路的影响如何 , P38MAPK通路与 β -榄香烯的抗耐药性间有的
有没有关系 ,对细胞凋亡与细胞阻滞周期是否同时起作用等问题
还有待于进一步深入的研究与证实。
参考文献:
[ 1 ] 　花文峰 ,蔡绍晖.β -榄香烯抗肿瘤作用的基础与临床研究 [ J].中
药材 , 2006, 29(1):93.
[ 2 ] 　邹丽娟 ,李　杰 ,于丽敏 ,等.β -榄香烯抗癌作用与诱发肿瘤细胞
凋亡的研究 [ J] .大连医科大学学报 , 1998, 20(2):9.
[ 3 ] 　章必成 ,杜光祖.P38MAPK在细胞凋亡中的作用 [ J].华南国防医
学杂志 , 2002, 16(1):22.
[ 4 ] 　梁先敏 ,杨克敌.Caspase和JNK/SAPK、P38MAPK与细胞凋亡 [ J] .
国外医学·卫生学分册 , 2008, 35(1):5.
收稿日期:2009-09-20;　修订日期:2010-03-28
基金项目:国家自然科学基金(No.20872148);
云南省中药现代化研究项目(No.2002Y-6);
云南省技术创新人才培养对象第九批项目(No.2009CI107)
作者简介:来国防(1973-),男(汉族),河南柘城人 ,现任云南省食品药品
检验所副主任药师 ,博士学位 ,主要从事中草药活性成分及中药质量标准
研究工作.
＊通讯作者简介:王易芬(1974-), 女(汉族),四川合江人 , 现任中国科学
院昆明植物研究所副研究员 ,硕士研究生导师 ,博士学位 , 主要从事中草
药活性成分及中药质量标准研究工作.
云南不同产地滇龙胆中龙胆苦苷的含量测定
来国防1 , 2 ,程　宾 2 ,罗士德 1 ,王易芬1＊
(1.云南省食品药品检验所 ,云南 昆明　650011;　
2.中国科学院昆明植物研究所 ,植物化学与植物资源持续利用国家重点实验室 ,云南 昆明　650204)
摘要:目的 建立 HPLC法测定云南不同产地滇龙胆中龙胆苦苷的方法。方法 色谱柱为 WatersSunfireRP18(250 mm×
4.6mm, 5 μm)柱 ,流动相为甲醇 -水溶液(20∶80),柱温 35℃,体积流量 1.0ml/min,检测波长 270nm。结果 龙胆苦苷
在 0.077 4 ～ 1.160 4mg(r=0.999 8)线性关系良好 , 平均回收率为 98.8%(RSD =1.86%, n=9), 检测 10批样品其
龙胆苦苷的含量在 2.75% ～ 4.87%之间。结论 该方法简便快速 、准确 , 可为评价滇龙胆药材质量提供依据。
关键词:高效液相色谱法;　滇龙胆;　龙胆苦苷
DOI标识:doi:10.3969 /j.issn.1008-0805.2010.08.009
中图分类号:R284.2　　文献标识码:A　　文章编号:1008-0805(2010)08-1867-02
DeterminationofGentiopicrosideinthePlantofGentianarigescensfrom DifferentRe-
gionsinYunnanProvincebyHPLC
LAIGuo-fang1, 2 , CHENGBin2 , LUOShi-de1 , WANGYi-fen1＊
(1.YunnanInstituteforFoodandDrugsControl, Kunming650011, China;2.StateKeyLaboratoryofPhyto-
chemistryandPlantResourcesinWestChina, KunmingInstituteofBotany, ChineseAcademyofSciences, Kun-
ming650204, China)
Abstract:ObjectiveToestablishthemethodofthegentiopicrosideintheplantofGentianarigescensfromdifferentregionsin
YunnanprovincebyHPLC.MethodsTheWatresSunfireC18(4.6mm×250mm, 5μm)wasused, withmixtureliquidofmetha-nolandwater(20:80)asmobilephase.Thedetectionwavelengthwas270 nm, thecolumntemperaturewas35℃, andtheflow
ratewas1.0ml/min.ResultsGentiopicrosideshowedagoodlinearrelationshipwithintherangeof0.0774 ～ 1.1604 mg(r=
0.9998), therecoveryratewas98.8%, andRSDwas1.86%(n=9).ThegentiopicrosidecontentofGentianarigescensin10
diferentregionswaswithintherangeof2.75% ～ 4.87%.ConclusionThemethodissimpleandaccurate, andcanbeusedtoi-
dentifyandevaluatethequalityofGentianarigescens.
Keywords:HPLC;　Gentianarigescen;　Gentiopicroside
　　龙胆为常用中药 , 《中国药典 》收载龙胆 Gentianascabra Bge., 条叶龙胆 G.manshuricaKitag., 三花龙胆 G.triflora
Pal1.或坚龙胆 G.rigescensFranch.的干燥根及根茎 , 前 3种
习称 “龙胆” , 后一种习称 “坚龙胆 ” 。坚龙胆主产云南又称为
滇龙胆 。滇龙胆含多种化学成分 , 如环烯醚萜类 , 生物碱类 ,
挥发油类等 , 其中环烯醚萜类是其特征性成分 , 其功效有清肝
火 、除湿热 、健胃等 [ 1] 。为充分利用云南丰富的龙胆药材资
源 , 本实验以龙胆苦苷为指标成分 , 采用 HPLC法测定了采自
云南不同地区的 10份滇龙胆样品 , 为评价滇龙胆药材质量提
供一定的科学依据 。
1　材料
1.1　样品来源 实验所用滇龙胆样品 , 经中国科学院昆明植物研
究所罗士德研究员鉴定 , 为龙胆科滇龙胆 G.rigescensFranch.的
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LISHIZHENMEDICINEANDMATERIAMEDICARESEARCH2010VOL.21NO.8 时珍国医国药 2010年第 21卷第 8期
干燥根及根茎 , 其植物标本存放于中国科学院昆明植物研究所。
1.2 　仪器与试药 美国 Waters2695高效液相色谱仪及其配套
工作站 , DAD检测器检测 , 甲醇为色谱纯(美国 Fisher公司), 水
为二次蒸馏水 , 0.45μm针式微孔滤膜 , 其他试剂均为分析纯 ,龙
胆苦苷对照品由中国药品生物制品检定所提供 , 批号:110770 -
200510,供含量测定用。
2 　方法与结果
2.1　色谱条件 色谱柱为 WatersSunfireRP18(4.6 mm×250mm,
5 μm);流动相为甲醇 -水溶液(20∶80), 柱温 35℃, 体积流量
1.0 ml/min, 检测波长 270 nm。
2.2　对照品溶液的制备 精密称取龙胆苦苷对照品 9.67 mg置
入 25ml容量瓶中 , 加甲醇超声溶解 ,定容至刻度 ,即得。
2.3 　供试品溶液的制备 取滇龙胆干燥的根粉碎后过 4号筛 ,
取约 0.5 g,精密称定 , 置具塞锥形瓶中 , 精密加甲醇 25 ml, 称定
重量 , 超声处理(功率 250 W, 频率 20 kHz)15 min,放冷 , 再称定
重量 , 用甲醇补足减失的重量 , 混匀 ,滤过 , 取续滤液 ,即得。
2.4　线性关系考察 精密吸取龙胆苦苷对照品溶液 2, 5, 10, 15,
20, 30μl注入液相色谱仪进行测定。 以峰面积(Y)对进样浓度
(X)进行回归处理 ,得到龙胆苦苷回归方程为:Y= 12 887 230X
– 147 037.8(r=0.999 8), 线性范围为 0.077 4 ～ 1.160 4 mg/
ml。见图 1 ～ 2。
图 1　龙胆苦苷对照品
图 2　滇龙胆样品
2.5 　精密度实验 精密吸取对照品溶液 10 μl, 连续进样 5次 ,
测定龙胆苦苷峰面积 , 结果其 RSD为 1.40%,表明仪器的精密度
良好。
2.6 　重复性实验 取同一样品 , 按 “ 2.3”项下的方法平行制备 6
份供试品溶液 , 进行测定 , 计算龙胆苦苷质量分数 , RSD为
1.36%,表明该条件重复性良好。
2.7　稳定性实验 将同一样品已制备好的供试品溶液在室温下
放置 0, 2, 4, 6, 8, 10h后分别进样 10μl进行测定 , 计算龙胆苦苷
质量分数 , RSD为 1.43%,表明在本实验条件下供试品溶液在室
温下放置 10 h内基本稳定。
2.8　回收率实验 取云南(通海)滇龙胆样品粉末 9份各约
0.25 g, 精密称定 ,分别按其质量分数的 80%, 100%, 120%精密
加入龙胆苦苷对照品适量 , 按 “ 2.3”项下的方法制备供试品溶
液 , 进行测定 ,计算加样回收率 ,结果平均加样回收率为 98.8%,
RSD为 1.86%, 表明本法回收率较好。
2.9 　样品测定 取云南 10个不同地域的滇龙胆样品的根 , 按
“ 2.3”项下的方法制备供试品溶液 , 进行测定 , 以外标法计算龙
胆苦苷的质量分数。结果见表 1。
表 1　云南不同地域滇龙胆中龙胆苦苷的测定结果
编号 产地 龙胆苦苷(%)
1 嘎洒 4.87
2 墨江 3.03
3 石屏 3.86
4 新平 3.79
5 玉溪洛和 4.34
6 玉溪小石桥 4.00
7 通海 2.75
8 玉溪秧草塘 2.85
9 大理 3.62
10 普洱 3.57
　　n=2
3 　讨论
3.1 　提取条件的考察 以龙胆苦苷为指标 , 采用正交实验考察
了药材粒度 、提取溶剂 、溶剂用量 、提取方法等因素对实验结果的
影响 , 结果表明提取溶剂 、加热回流对试验结果有显著影响 ,其余
因素影响甚微 ,优选出的最佳提取条件为药材粉碎成中粉 ,加 50
倍量的甲醇超声处理 15 min。
3.2 　检测波长的选择 参考《中国药典》 2005年版 Ⅰ部龙胆药
材含量测定项下的检测波长为 270 nm, 故本实验检测波长仍选
用 270 nm。
3.3 　流动相的考察 根据文献报道 [ 2～ 4] , 目前测定龙胆苦苷是
HPLC方法 , 所采用流动相系统有甲醇 -水 , 乙腈 -水 , 甲醇 -
0.4%磷酸溶液等 ,再根据具体的仪器及色谱柱调节流动相比例 ,
本实验参照《中国药典》 2005年版Ⅰ部龙胆药材含量测定项下流
动相系统 ,即:甲醇 -水 , 并在此基础上进行适当调节 , 最终选择
甲醇 -水(20∶80)。
参考文献:
[ 1 ] 　吴征镒 ,周太炎 ,肖培根 , 等.新华本草纲要 , 第 2册 [ M] .上海:上
海科学技术出版社 , 1991:392.
[ 2 ] 　国家药典委员会.中国药典 , Ⅰ 部 [ S] .北京:化学工业出版社 ,
2005:64.
[ 3 ] 　吴志平 ,张发成 ,毛志英.HPLC法测定骨刺消痛胶囊中龙胆苦苷的
含量 [ J] .药学与临床研究 , 2008, 16(5):408.
[ 4 ] 　俞桂新 , 王峥涛 ,董婷霞 , 等.龙胆药材中龙胆苦苷的含量测定
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