全 文 ：华西药学杂志WCJ· PS　2008, 23(6)：692 ～ 694 　　
＊药品检验＊
基金项目:湖北省自然科学基金资助项目(2006ABA204);湖北省科技攻关计划项目(2005AA301C06)
作者简介:袁丁(1964-),男 ,博士 ,副教授 ,从事天然药物的研究工作。 E-mail:yxyyd@ctgu.edu.cn
＊通讯作者(Correspondentauthor), E-mail:hym0811@163.com
竹节参中总皂苷和三萜苷元齐墩果酸的测定
袁　丁 ,何毓敏＊ ,鲁科明 ,张长城
(三峡大学医学院 ,湖北 宜昌 443002)
摘要:目的　建立竹节参中总皂苷和齐墩果酸的含量测定方法。方法　以人参皂苷 Re为对照品 ,采用香草醛 -高氯酸比色
法测定竹节参中总皂苷的含量;HPLC测定其三萜苷元齐墩果酸 , 色谱条件为 YMC-packC18 -AQ色谱柱(250 mm×4.6 mm,
5 μm), 流动相为甲醇 -水 -冰醋酸 -三乙胺(90：10：0.04：0.02), 检测波长为 210 nm。结果　测定了湖北五峰 、恩施以及
四川峨嵋地区竹节参样品中总皂苷和齐墩果酸的含量。结论　所建方法均符合含量测定的要求 , 可分别作为测定竹节参中
总皂苷和齐墩果酸含量的方法。
关键词:竹节参;总皂苷;齐墩果酸;高效液相色谱;比色法
中图分类号:R917　 文献标识码:A　 　文章编号:1006-0103(2008)06-0692-03
DeterminationoftotalsaponinsandoleanolicacidintraditionalChinesemedicineRhizoma
PanacisJaponici
YUANDing, HEYu-min＊ , LUKe-ming, ZHANGChang-cheng
(MedicalScienceCollegeofChinaThreeGorgesUniversity, Yichang443002, China)
Abstract:OBJECTIVE　ToestablishmethodsfordeterminationoftotalsaponinsandoleanolicacidinRhizomaPanacisJaponici.
METHODS　Vanilin-HClO
4
colorimetricmethodwasdevelopedtodeterminethecontentoftotalsaponinsandanewHPLCmethod
wasestablishedfordeterminationofoleanolicacid.InthesystemofHPLC, aYMC-packODS-AQcolumn(250 mm×4.6 mm, 5
μm)wasusedwithamixtureofmethanol-water-glacialaceticacid-triethylamine(90：10：0.04：0.02)asthemobilephase
anddetectedat210nm.RESULTS　HPLCmethodwasfoundtobesimpleandaccuratewithaveragerecoveryof98.16% andRSDof
2.04%(n=9).TheestablishedcolorimetricdeterminationoftotalsaponinsinRhizomaPanacisJaponiciwasalsoinvestigatedand
provedtogiveanaccurateresultcoincidentalwiththatoftheHPLCresults.Theaveragerecoverywas98.27% withRSDof2.92%.
Severalrealsamplesweredeterminedbythetwomethodsandtheresultsweresatisfied.CONCLUSION　Itseemedthatbothmethods
canbeusedreliablyforthequalitycontrolofRhizomaPanacisJaponici.
Keywords:RhizomaPanacisJaponici;Totalsaponins;Oleanolicacid;HPLC;Colorimetry
CLCnumber:R917　　　 Documentcode:A　 　ArticleID:1006-0103(2008)06-0692-03
　　竹节参别名竹节三七 、竹节人参 、白三七等 ,为
五加 科 人 参 属 植 物 竹 节 参 Panaxjaponicus
C.A.Mey.的干燥根茎 ,具有滋补强壮 、散淤止痛 、
止血祛痰等功效 ,临床上常用于治疗病后虚弱 、劳嗽
咯血 、跌扑损伤等 [ 1] 。其化学成分以皂苷类为主 ,
苷元主要为齐墩果酸 [ 2] 。竹节参总皂苷具有抗炎 、
抗氧化 、降血糖以及抗肿瘤等药理活性 [ 3, 4] ,齐墩果
酸亦表现出类似的药理作用 ,因此 ,测定两者的含量
可以在一定程度上反映药材的质量。对竹节参中齐
墩果酸的含量测定未见文献报道。作者采用比色法
测定了竹节参中总皂苷的含量 ,并首次采用 HPLC
法测定了竹节参中齐墩果酸的含量 。经方法学验
证 ,具有准确度高 、重复性好的特点。
1　实验部分
1.1　仪器与试药
Waters2690型高效液相色谱仪(美国 Waters);
UV-3010型紫外 -可见分光光度计(日本日立);
WFZUV-2100型紫外可见分光光度计 [尤尼柯(上
海)仪器有限公司 ] ;KQ-250B型超声波清洗器(昆
山市超声仪器有限公司)。齐墩果酸对照品(批号:
110709-200304)、人参皂苷 Re对照品 (批号:
110754-200421)(中国药品生物制品检定所);竹
节参药材购于湖北五峰 、恩施及四川峨嵋地区中药
材收购站 ,经宜昌市药检所中药室鉴定 ,均为正品竹
节参 PanaxjaponicusC.A.Mey.的根茎;甲醇为色
DOI :10.13375/j.cnki.wcjps.2008.06.022
谱纯;其余试剂为分析纯;水为双蒸水 。
1.2　总皂苷的含量测定
1.2.1　溶液的制备　取 1.0 g竹节参药材粉末(过
4号筛),精密称定 ,置索氏提取器中 ,加 200 ml乙
醚 ,加热回流 1h,弃乙醚液 ,药渣挥去乙醚 ,置索氏
提取器中 ,加 200ml甲醇 ,加热提取至甲醇无色;取
甲醇提取液挥干 ,残渣用 30 ml水分次转移至分液
漏斗中 ,用水饱和的正丁醇振摇提取(20 ml×5),
合并正丁醇提取液 , 用正丁醇饱和的水洗涤
(30ml×2),合并正丁醇提取液 ,蒸干 ,残渣加甲醇
溶解并转移至 25 ml量瓶中 ,加甲醇定容 ,即得样品
溶液。精密称取人参皂苷 Re对照品适量 ,置 10 ml
量瓶中 ,用甲醇制成 1.3 mg·ml-1的对照品溶液 。
1.2.2　最大吸收波长的确定 　精密吸取 50 μl
“ 1.2.1”项的人参皂苷 Re对照品溶液和 40μl竹节
参样品溶液 ,分别置 10ml具塞试管中 ,水浴挥干溶
剂 ,分别精密加入 0.2 ml新配制的 5%香草醛 -冰
醋酸溶液 、0.8 ml高氯酸 ,加塞 ,摇匀 ,于 60℃水浴
中加热 15 min,取出 ,置冰水浴中冷却 3 min,分别精
密加入 5.0ml冰醋酸 ,摇匀 ,于 400 ～ 700 nm扫描 。
图 1结果表明 ,人参皂苷 Re对照品溶液和竹节参样
品溶液显色后的吸收光谱基本一致 ,约在 552nm处
有最大吸收 ,故选择 552 nm作为测定波长。
图 1　竹节参样品溶液(1)及对照品溶液(2)显色液的吸收光谱
Fig1　Visibleabsorptionspectraofsampleinmethanolsolution(1)
andcontrolsolution(2)
1.2.3　标准曲线的制备　分别精密吸取 30、50、
70、90、110、130 μl“1.2.1”项的人参皂苷 Re对照
品溶液 ,分别置 10 ml具塞试管中 ,水浴挥干溶剂 。
按 “1.2.2”项下方法操作 ,随行试剂为空白 ,于 552
nm处测定吸光度 。以吸光度对浓度进行线性回归 ,
得回归方程为:A=0.019C-0.006(r=0.9998)。
结果表明 ,人参皂苷 Re6.50 ～ 28.17 μg·ml-1与吸
光度的线性关系良好 。
1.2.4　精密度与稳定性试验 　精密吸取 40 μl
“ 1.2.1”项的竹节参样品溶液 ,共 5份 ,分别置具塞
试管中 ,按 “1.2.2”项的方法操作 ,于 552 nm处测
定吸光度 ,其 RSD=1.09%(n=5)。
精密吸取 40 μl“1.2.1”项的竹节参样品溶液 ,
按 “1.2.2”项的方法操作 ,每隔 5min测定 1次样品
显色液在 552 nm处的吸光度 ,共 14次 , 计算 , 其
RSD=1.24%,表明竹节参样品溶液显色后 65 min
内稳定。
1.2.5　重复性与回收率试验　精密称取同一批竹
节参药材粉末 5份 ,分别按 “1.2.1” “1.2.2”项的方
法操作 ,在 552 nm处测定吸光度并计算含量。样品
中总皂苷的平均含量为 163.25 mg·g-1 , RSD=
2.64%(n=5),表明方法重复性良好 。
取 0.5 g已知总皂苷含量(163.25 mg·g-1)的
竹节参药材粉末 ,共 6份 ,称定后分别加入人参皂苷
Re对照品适量 ,混匀后按 “ 1.2.1” “ 1.2.2”项的方
法操作 ,测定 552 nm处的吸光度并计算含量。其回
收率分别为 101.25%、96.02%、96.21%、101.57%、
96.31%、98.27%, 平均回收率为 98.27%, RSD=
2.92%(n=6)。
1.2.6　样品的测定　取不同产地的竹节参药材粉
末 ,分别按 “ 1.2.1”项的方法制备成样品溶液 。精
密吸取 40 μl,分别置具塞试管中 ,按 “ 1.2.2”项的
方法操作 ,于 552 nm处测定吸光度 ,由标准曲线方
程计算样品中总皂苷的含量(表 1)。
表 1　竹节参样品的含量测定结果(mg·g-1 , n=3)
Table1　Quantitativeanalysisresultsofthesamples(mg·g-1 , n=3)
BatchNo. Habitat Oleanolicacid Totalsaponin
05051501 Enshi, Hubei 64.36 163.25
05051502 Enshi, Hubei 63.21 161.55
05051701 Wufeng, Hubei 65.26 164.83
05051702 Wufeng, Hubei 64.07 163.21
06041101 Emei, Sichuan 59.12 150.53
1.3　齐墩果酸的含量测定
1.3.1　色谱条件　色谱柱为 YMC-packC18 -AQ
柱(250mm×4.6 mm, 5 μm);流动相为甲醇 -水 -
冰醋酸 -三乙胺(90：10：0.04：0.02);检测波长
为 210 nm;流速为 1.0 ml·min-1;柱温为 30℃。在
此色谱条件下 ,竹节参样品溶液中齐墩果酸与其他
组分能达到基线分离 ,色谱图见图 2。
图 2　对照品(A)和样品(B)溶液的 HPLC图谱
Fig2　HPLCchromatogramsofcontrolsolution(A)andsample
solution(B)
1.3.2　标准曲线的制备　精密称取齐墩果酸对照品
适量置 10ml量瓶中 ,用甲醇制成 1.18mg·ml-1的对
693第 6期 袁　丁 ,等。竹节参中总皂苷和三萜苷元齐墩果酸的测定 　　　
照品溶液 。分别精密吸取 4、6、8、10、15、20 μl此溶
液 ,按 “1.3.1”项的色谱条件进样测定。以峰面积对
进样量进行线性回归 ,得回归方程为:Y=4.443×
10
5X+1.705×105(r=0.9999),线性范围为 4.72 ～
23.60μg。
1.3.3　溶液的制备　取 1.0 g竹节参药材粉末(过
4号筛),精密称定 ,置具塞锥形瓶中 ,精密加入 50
ml甲醇 ,称定重量 ,超声处理 (250 W、 50 kHz)40
min,再称定重量 ,用甲醇补足减失的重量 ,摇匀 ,过
滤;精密量取续滤液 10 ml,回收溶剂至干 ,残渣加
20 ml25%盐酸 、25 ml氯仿 ,加热水解 1 h,水解物
用氯仿振摇提取(25 ml×2),合并提取液 ,回收溶剂
至干 ,残渣加甲醇溶解并转移至 10ml量瓶中 ,加甲
醇定容 ,过滤 ,续滤液即为样品溶液。
1.3.4　精密度与稳定性试验 　精密吸取 10 μl齐
墩果酸对照品溶液(1.18 mg·ml-1),在 “ 1.3.1”项
色谱条件下 ,重复进样 。齐墩果酸峰面积的 RSD=
0.77%(n=6)。
取竹节参样品溶液 ,常规保存。在 “ 1.3.1”项
色谱条件下 ,分别放置 0、2、4、6、8 h后进样 10 μl,
测定。齐墩果酸峰面积的 RSD=1.01%(n=5),表
明此样品溶液在 8 h内稳定。
1.3.5　重复性与回收率试验　精密称取同一批竹
节参药材粉末 5份 ,分别按 “ 1.3.3”项的方法制备
样品溶液 。在 “1.3.1”项的色谱条件下 ,分别进样
10 μl测定 ,计算含量 。样品中齐墩果酸的平均含量
为 64.36 mg·g-1 , RSD =1.56%(n=5),表明此方
法的重复性良好 。
取 6份 0.5 g已知齐墩果酸含量(64.36 mg·
g-1)的竹节参药材粉末 , 称定后 ,分别按标示量的
80%、100%和 120%加入齐墩果酸对照品适量 ,混
匀后按 “1.3.1”项的色谱条件测定 ,计算得齐墩果
酸的回收率 , 其平均回收率为 98.16%, RSD =
2.04%(n=6)。
1.3.6　样品的测定　取不同产地的竹节参药材粉
末 ,分别按 “1.3.3”项下方法制备成样品溶液。在
“1.3.1”项的色谱条件下 ,分别取 10 μl样品溶液和
齐墩果酸对照品溶液(1.18 mg·ml-1),进样 ,记录
峰面积 ,按外标法计算含量(表 1)。
2　讨论
2005年版《中国药典》中 ,竹节参项下尚无含量
测定项 ,其质量标准有待完善。文中以人参皂苷 Re
为指标 ,建立了以香草醛 -高氯酸比色法测定竹节
参中总皂苷含量的方法;以齐墩果酸为指标 ,建立了
HPLC法测定竹节参中三萜苷元齐墩果酸含量的方
法。测定结果表明 ,竹节参中总皂苷和三萜苷元齐
墩果酸的含量均较高 ,且两者含量呈正相关 。
由于皂苷类成分的颜色反应专属性较差[ 5, 6] ,
香草醛 -高氯酸试剂与皂苷元反应所产生的颜色受
反应温度 、反应时间等影响较大 ,因此 ,应控制反应
条件 。文中根据竹节参化学组分的性质 ,参照人参
等药材中总皂苷含量测定的方法 ,在样品的处理过
程中 ,分别用乙醚和正丁醇饱和的水除去脂溶性和
水溶性杂质 ,以减少其对比色的干扰 ,提高了测定的
灵敏度。选择对照品时发现 ,人参皂苷 Re显色后
吸光度随浓度的变化较灵敏 ,因此 ,选择人参皂苷
Re作为对照品 ,测定时严格按照操作步骤进行。方
法学考察表明 ,文中方法简单易行 ,可作为竹节参中
总皂苷的含量测定方法 。
参考文献 [ 7] ,文中用 HPLC法测定了竹节参中
齐墩果酸 。首先将水解前后的竹节参皂苷提取液进
行 HPLC色谱的对比分析 ,发现竹节参中游离型齐
墩果酸很少 , 结合型齐墩果酸占总齐墩果酸的
99%;进一步对提取条件进行考察 ,确定选择氯仿 -
25%盐酸溶剂体系对竹节参皂苷提取液进行水解后
制备样品溶液的方法。系统适用性试验中 ,选择甲
醇 -水 -冰醋酸 -三乙胺的四元流动相体系 ,既能
使齐墩果酸峰形对称 ,又能与其他组分达到基线分
离 ,符合含量测定的要求 。
参考文献:
[ 1] 　 中华人民共和国国家药典委员会 .中国药典 [ S].一部 .北
京:化学工业出版社 , 2005.93.
[ 2] 　 国家中医药管理局《中华本草 》编委会.中华本草 [ M] .第五
卷 .上海:上海科学技术出版社 , 1999.832-834.
[ 3] 　 郑虎占 ,董泽宏 ,佘靖.中药现代研究与应用 [ M] .第 6卷.北
京:学苑出版社, 1998.5627-5630.
[ 4] 　 袁丁 ,左锐 ,张长城.竹节参总皂苷抑制小鼠肿瘤生长的实验
研究 [ J] .时珍国医国药 , 2007, 18(2):277-278.
[ 5] 　 杨文志 ,于淑莲 ,娄子恒, 等.论人参总皂苷的科学定量方法
[ J] .人参研究 , 2007, 2:7-10.
[ 6] 　 蔡治纲 ,张莉伟 ,龚晓英.不同来源西洋参中人参总皂苷及人
参皂苷 Rb1含量的比较 [ J].中草药 , 2002, 33(2):121-
122.
[ 7] 　 青琳森 ,张浩 ,吕光华 ,等.HPLC测定川木通中齐墩果酸的含
量 [ J] .华西药学杂志 , 2006, 21(3):273-274.
收稿日期:2008-01
694 　 华 西 药 学 杂 志　　　 第 23卷