全 文 ：2.2　不同浓度的正丁醇提取物对结核杆菌生长的影响 正丁醇
提取物用 50%乙醇配制成 12mg· ml-1的供试药液 ,再用生理盐
水以 2倍稀释法制成 1∶1, 1∶2, 1∶4, 1∶8, 1∶16等 5个浓度 ,
按上述方法制备不同浓度含药培养基 ,同时设不含药液之空白对
照管。分别接种结核杆菌标准株和临床分离菌株 ,每株结核菌和
每个药物浓度均各设 3个复管。结果见表 2。
表 2　正丁醇提取物对结核杆菌的抑菌作用
浓度
C/mg· ml-1
第 3周
H37RV
1 　2 　3
临床菌株
1 　2　　 3　
第 4周
H37RV
1 　 2 　 3
临床菌株
1 　2　　3　
第 5周
H37RV
1 　2 　 3
临床菌株
1 　 2　　 3　
第 6周
H37RV
1 　 2 　3
临床菌株
1 　2　　3　
2 - - - - - - - - - - - - - - - - - - - - - - - -
1 - - - - - - - - - - - - - - - - - - - - - - - -
0.5 - - - - - - - - + - - - - + - - + - - + + +
0.25 - - - - - - - + + - - + + + ++ + + ++ ++ ++ ++ +
0.125 - - + 　 ＊ + + ++ ＊ + ++ ++ ＊ ++ +++++ ＊
空白对照 + + + + + ++ ++ ++ ++ ++ ++ ++ ++ +++++++ ++ +++ +++++++++++++++ +++
　　“ -”未见菌落生长;“ +”有个别菌落;“ ++”有少量菌落;“ +++”菌落数较多;＊未做
　　由表 2可知 , 葎草的正丁醇提取物对结核分枝杆菌标准株
H37 RV及临床分离的敏感菌株都具有较明显的抗菌作用 , 粗提
物的 MIC为 125μg· ml-1 , 高浓度时 1 mg· ml-1 , 第 6周也未
发现菌落 , 对结核分枝杆菌有较强的抑制或杀灭作用。
3　讨论
上述实验研究结果表明 ,葎草的提取物中以正丁醇萃取物的
抗结核分枝杆菌作用最强 ,且有明显的剂量 -效应关系 , 粗提物
在 1 mg· ml-1就能完全抑制结核分枝杆菌的生长。 0.125 μg·
ml-1时 , 在早期也有抑制作用。但本实验所用药物还是粗提物 ,
有待于进一步分离追踪有效成分。此外 , 由于时间关系 , 耐药菌
株事先未做活化培养 ,效果不理想而未收入本文 , 还需进一步验
证。葎草是一种常用中草药 ,大剂量应用也未见毒副作用。而且
分布广泛 , 资源丰富 ,是一种很有希望的抗结核中草药 ,值得进一
步研究开发。
参考文献:
[ 1 ] 　尹海波 ,王　颖 ,郑太坤 ,等.中国葎草属植物的研究进展 [ J].辽宁
中医学院学报 , 2001, 3(1):60.
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作用 [ J] .中国中药杂志 , 2001, 26(12):867.
收稿日期:2007-04-02;　修订日期:2007-04-10
基金项目:新疆建设兵团科技攻关计划医药卫生专项资金资助项目(No.2006GG52)
作者简介:张　芹(1973-),女(汉族),河北邢台人 ,现为石河子大学药学院在读硕士研究生 ,主要从事药物分析与药效学研究工作.
＊通讯作者简介:唐　辉(1967-),女(汉族),重庆人 ,现任新疆特种植物药资源省部共建教育部重点实验室教授 ,博士学位 ,主要从事天然药物分析及
新药研究工作.
高效液相色谱法测定天山花楸中的绿原酸含量
张　芹 , 李　鹏 , 唐　辉＊ , 王鲁石 , 李　乐
(新疆特种植物药资源省部共建教育部重点实验室 · 石河子大学药学院 ,新疆 石河子　832002)
摘要:目的 建立 HPLC梯度洗脱法测定天山花楸叶与果中绿原酸含量的方法。方法 采用 ZORBASODSC18(4.6mm ×
15 cm, 5 μm)色谱柱 ,甲醇 -0.02%磷酸溶液为流动相(梯度洗脱),流速为 1.0 ml· min-1 , 检测波长为 326 nm。结果
绿原酸线性范围为 3.952 ～ 19.76 μg/ml,叶中绿原酸含量 1.982% (RSD=0.58%, n=3),平均回收率为 99.42%;果中
绿原酸含量 2.259% (RSD=1.2%, n=3),平均回收率为 99.32。结论 该方法经济 、简便 、快速 、准确 、可靠 , 可用于该药
材的质量控制。
关键词:天山花楸;　绿原酸;　高效液相色谱法;　梯度洗脱
中图分类号:R284.2　　文献标识码:A　　文章编号:1008-0805(2008)01-0059-02
Determination ofChlorogenicAcid in SorbustianschanicabyHigh Performance
LiquidChromatography
ZHANGQin, LIPeng,TANGHui＊ ,WANGLu-shi,LILe
(ColegeofPharmacology, ShiheziUniversity, KeyLaboratoryofXinjiangPhytomedicineResources, Xinjiang
Shihezi, 832002, China)Abstract:ObjectiveToestablishmethodsfordeterminationofchlorogenicacidinSorbustianschanica.MethodsTheHPLC
systemconsistedofthecolumnofODSZORBASODS(4.6 mm×15cm, 5μm)columnandMeOH-0.02%H3 PO3 asthemo-bilephase.Theflowratewas1.0 ml· min-1.Thedetectionwavelengthwas326 nm.ResultsThemethodwaslinearwithinthe
rangeof3.952 ～ 19.76 μg/ml.ChlorogenicacidintheleafofS.tianschanicawas1.982%(RSD% =0.58, n=3)andtheaver-
agerecoverywas99.42%.ChlorogenicacidinthefruitofS.tianschanicawas2.259%(RSD% =1.2, n=3)andtheaverage
recoverywas99.32%.ConclusionThemethodissimple, sensitive, quickandhighlyreproductiveanditissuitableforanalysis
ofchlorogenicacidinS.tianschanica.
Keywords:Sorbustianchanica;　Chlorogenicacid;　HPLC;　Gradientelution
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LISHIZHENMEDICINEANDMATERIAMEDICARESEARCH 2008VOL.19NO.1 时珍国医国药 2008年第 19卷第 1期
　　蔷薇科 Rosaceae花楸属植物天山花楸 Sorbustianschanica,为
维吾尔和哈萨克族民间常用药材。药理实验显示 [ 1 ～ 3] , 天山花
楸枝叶兼有止咳 、平喘 、强心等多种药理功效 ,并且毒性很低。绿
原酸是天山花楸中有效成分之一 ,广泛存在于自然界 ,属于咖啡
酰奎尼酸衍生物 , 是植物体内有氧呼吸过程中经莽草酸途径产生
的一种苯丙素类化合物 ,为众多药材抗菌解毒 、消炎利胆的主要
有效成分。绿原酸除了抗氧化能力强外 , 还具有抗艾滋病毒 、抗
过敏 、抗肿瘤等功能 [ 4 ～ 7] 。由于天山花楸中的绿原酸定量研究
尚未见报道 , 为了了解天山花楸中绿原酸的含量 , 更全面 、综合地
评价这一药用植物 , 更好地控制药材质量 , 开发传统中药材的潜
力 , 我们建立了测定天山花楸叶与果中绿原酸的高效液相色谱
方法 [ 8, 9] 。
1　仪器与试药
AgilentHP1100型高效液相色谱系统 ,配有:四元泵 , 紫外检
测器 , HP1100化学工作站;日本岛津 UV2401(PC)紫外光谱仪;
德国 SartoriusBP211D十万分之一电子分析天平;索氏抽提装置;
甲醇为色谱纯 , 水为二次重蒸水 ,其他试剂均为分析纯;天山花楸
供试品自制;绿原酸对照品由中国药品生物检定所提供。
2　方法与结果
2.1　色谱条件 色谱柱为 ZORBASODSC
18
(4.6 mm ×15 cm,
5μm)色谱柱 , 检测波长为 326 nm;柱温 35℃;流速 1.0 ml·
min-1;进样量 20 μl。流动相洗脱梯度见表 1。
表 1　流动相梯度洗脱
时间 t/min MeOHφ(%) 0.02%H3PO4φ(%)
0 30 70
6 33 67
10 100 0
12 100 0
2.2　对照品溶液和供试品溶液制备
2.2.1　绿原酸对照品溶液 称取绿原酸对照品约 20 mg, 精密称
定 , 置 100 ml棕色容量瓶中 , 甲醇溶液稀释至刻度 , 作为贮备液。
精密吸取贮备液 5 ml, 置 25 ml棕色容量瓶中 , 加甲醇溶液至刻
度 , 摇匀 ,即得对照品溶液。
2.2.2　天山花楸叶供试品 取 60 ℃常压干燥至恒重天山花楸叶
粉末约 0.5 g,各 3份 ,置索氏提取器中 , 加乙醚约 80 ml, 加热回
流至无色 , 弃去乙醚 ,药渣挥干 ,再加甲醇 80 ml,加热回流提取至
无色 , 转移至 100 ml容量瓶中 , 甲醇定容 , 即得待测天山花楸叶
供试品溶液。
2.2.3　天山花楸果供试品 取 3份 60℃常压干燥至恒重的天山
花楸果实粉末约 0.5 g,置索氏提取器中加甲醇 80 ml,加热回流
提取至无色 , 移至 100ml容量瓶中 , 甲醇定容 , 即得待测天山花
楸果供试品溶液。
2.3　线性关系考察及稳定性实验 精密移取 1.0, 2.0, 3.0, 4.0,
5.0 ml绿原酸对照品溶液 , 分别置 10 ml棕色容量瓶中 ,用 0.45
μm滤膜过滤 ,收集续滤液 , 进样量 20 μl,按上述色谱条件测定。
以峰面积 A对对照品浓度(μg/ml)进行线性回归 ,得标准曲线回
归方程:A=46.107C-59.532, r=0.999 6。绿原酸线性范围为
3.952 ～ 19.76 μg/ml。取上述对照品溶液 ,每隔 2 h按上述色谱
条件测定峰面积 , 结果表明在 12 h内基本稳定(RSD=2.8%)。
2.4　精密度实验 精密移取对照品液 2.0 ml,置 10 ml棕色容量
瓶中 , 加甲醇至刻度 ,摇匀 , 照 “ 2.3”项下进样 , 连续进样 5次 ,绿
原酸含量 RSD=2.7%。
2.5　重复性实验 精密量取已知绿原酸含量的叶与果供试品溶
液 0.8 ml,移至 10 ml棕色容量瓶中 , 甲醇定容 , 照 “ 2.3”项下进
样 , 连续进样 5次 , 叶的绿原酸含量 RSD=2.8%;果的绿原酸含
量 RSD=0.74%。
2.6　回收率实验 精密移取已知绿原酸含量的样品 0.8 ml,置 10
ml棕色容量瓶中 , 精密加入定量低 、中 、高浓度的对照品液 ,加甲
醇稀释至刻度 , 照 “ 2.3”项下操作测定。 叶:平均回收率 =
99.42%, RSD=2.1%(n=9);果:平均回收率 =99.32%, RSD=
2.4%(n=9)。
2.7　样品测定 精密量取供试品溶液 0.8 ml,移至 10 ml棕色容
量瓶中 ,甲醇定容 , 照 “ 2.3”项下进样 , 代入标准曲线 , 即得。 结
果:天山花楸叶中绿原酸的平均含量为 1.982%, RSD =0.58%
(n=3);天山花楸果中绿原酸的平均含量为 2.259%, RSD=
1.2%(n=3)。见图 1。
a-绿原酸对照品　b-天山花揪果实中绿原酸　c-天山花揪叶中绿原酸
图 1　绿原酸 HPLC色谱图
3　讨论
对照品绿原酸对其进行紫外扫描 , 绿原酸在 326 nm有较强
吸收 , 因此选择 326nm为测定波长。
曾选择甲醇 -0.02%磷酸溶液(10∶90)的等度洗脱色谱条
件 , 但绿原酸保留时间过长 , tR为 14 min, 一次检测完成约需
30min。经摸索后采用梯度洗脱 , 使待测组分绿原酸以较短时间
tR为 4.4min出峰 ,随后使洗脱梯度变大 , 流动相的极性也变大 ,
极性弱的组分快流出柱。
参考文献:
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