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竹节参总皂苷预处理对冠脉结扎致大鼠急性心肌缺血损伤的影响



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收稿日期: 2011-10-27
基金项目:国家自然科学基金( 31070314; 30873383)
作者简介:贺海波( 1972-) ,男,博士,讲师,主要从事中药药理学研究; Tel: 0717-6396558,E-mail: shmq0212@ 126. com。
* 通讯作者:袁丁,Tel: 0717-6397366,E-mail: yxyyd@ ctgu. edu. cn。
·药理·
竹节参总皂苷预处理对冠脉结扎致大鼠
急性心肌缺血损伤的影响
贺海波,许 佳,徐媛青,王洪武,狄国杰,李守超,孙志伟,何毓敏,张长城,袁 丁*
(三峡大学医学院,湖北 宜昌 443002)
摘要 目的:研究竹节参总皂苷预处理对冠脉结扎致大鼠急性心肌缺血损伤的影响,并初步探讨其可能的机
制。方法:实验大鼠随机分为假手术组、模型组和竹节参总皂苷组;治疗组大鼠给予竹节参总皂苷,预防性给药 7 d
后,行结扎大鼠冠状动脉术制作急性心肌缺血损伤模型,术后 12 h进行大鼠心电图和血流动力学检测,然后取血进
行血液乳酸脱氢酶( LDH) 、肌酸激酶( CK) 、超氧化物歧化酶( SOD) 、过氧化氢酶( CAT) 活性和丙二醛( MDA) 含量
分析;取心脏,分别进行心肌组织 2,3,5-氯化三苯基四氮唑染色和 HE染色。结果:竹节参总皂苷能明显改善心功
能,对抗冠脉结扎诱导的心电图 T波降低,显著降低心肌梗死面积,减少心肌缺血性损伤;降低血清中 CK、LDH 活
性和 MDA含量,增加血清中 SOD、CAT活性。结论:竹节参总皂苷对冠脉结扎致急性心肌缺血损伤具有较好的保
护作用,抗氧化损伤可能是其作用机制之一。
关键词 竹节参;总皂苷;急性心肌缺血;保护作用
中图分类号: R285. 5 文献标识码: A 文章编号: 1001-4454( 2012) 05-0744-06
Effects of Total Saponin from Panax japonicus on Acute Myocardial Ischemia Injury
Induced by Ligating Coronary Artery Left Anterior Descending Branch in Rats
HE Hai-bo,XU Jia,XU Yuan-qing,WANG Hong-wu,DI Guo-jie,LI Shou-chao,SUN Zhi-wei,HE Yu-min,YUAN Ding
( College of Medical Sciences,Three Gorges University,Yichang 443002,China)
Abstract Objective: To investigate the cardioprotective effects of total saponin from Panax japonicus pretreating on acute myocar-
dial ischemia injury induced by ligating coronary artery left anterior descending branch ( LAD) in rats. Methods: Rats were divided into
sham group,model group and total saponin group. The treatment group was given total saponin of Panax japonicus. After pretreating for
7 days,the rats acute myocardial ischemia model was induced by LAD. The electrocardiogram,hemodynamics,infarct size and histo-
morphology were assessed 12h after LAD,the serum levels of phosphokinase ( CK) ,lactate dehydrogenase ( LDH) ,superoxide dis-
mutase ( SOD) ,catalase ( CAT) and malondialdehyde ( MDA) were also measured. Results: Compared with the model group,total sap-
onin from Panax japonicus significantly improved heart function,heart histomorphology,opposed ECG T wave decreased and decreased
infarct size ; Remarkably decreased the contents of LDH,CK and MDA,increased the activity of SOD,CAT . Conclusion : Total saponin
·447· Journal of Chinese Medicinal Materials 第 35 卷第 5 期 2012 年 5 月
DOI:10.13863/j.issn1001-4454.2012.05.046
from Panax japonicus has cardioprotective effects on acute myocardial ischemic injury and the mechanism may be related to antioxida-
tion.
Key words Panax japonicus C. A. Mey. ; Total saponin; Acute myocardial ischemia; Cardioprotective effects
竹节参为五加科人参属植物竹节参( Panax ja-
ponicus C. A. Mey. ) 的干燥根茎,为我国少数民族
传统的益气活血中药。2010 年版药典记载该药具
有散瘀止血、消肿止痛、祛痰止咳、补虚强壮之功,主
要用于痨嗽咯血,跌扑损伤,咳嗽痰多,病后虚弱等
症〔1〕。其主要成分有皂苷类 ( 如竹节参皂苷 IV、
IVa、V,Pis-2,人参皂苷 Re 等) ,多以齐墩果烷型五
环三萜为主,达玛烷型四环三萜的原人参二醇型和
原人参三醇型皂苷含量相对较少,除此之外,还含有
多糖、氨基酸、挥发油及微量元素等成分。现代药理
学研究显示,竹节参具有较广泛的药理作用,对消化
系统、中枢神经系统、心脑血管系统、免疫系统和肿
瘤防治等均有较好作用〔2〕。近年来研究发现,竹节
参及其主要成分竹节参总皂苷在抗肿瘤、保护缺血
性脑损伤及抑制神经细胞凋亡等方面显示出较好的
疗效〔3,4〕,但在心血管研究方面,除了刘家兰和孙桂
波〔5,6〕等人对其进行过报道外,有关竹节参及其主
要活性成分竹节参总皂苷对冠脉结扎致大鼠急性心
肌缺血的研究鲜有报道。本研究在笔者前期进行竹
节参不同提取部位对冠脉结扎致急性心肌缺血损伤
活性评价的基础上〔8〕,探讨了其总皂苷对冠脉结扎
致急性心肌缺血损伤的保护作用,初步探寻其可能
的作用机制,为其应用于心血管疾病的防治提供理
论基础和实验依据。
1 材料与仪器
1. 1 实验动物 SPF 级雄性 Wistar 大鼠,体质量
( 200 ± 20) g,由湖北省疾病控制中心实验动物中心
提供,合格证: SCXK( 鄂) 2008-0005。动物分笼饲养
于空调室内,室温 ( 22 ± 2) ℃,湿度 ( 60 ± 5 ) %,每
笼 5 只,每天每只动物给予标准颗粒饲料,自由饮水
和摄食。
1. 2 药物与试剂 竹节参药材购于湖北省恩施椿
木营竹节参药材种植基地,经三峡大学湖北省天然
产物研究与利用重点实验室汪鋆植教授鉴定为五加
科人参属植物 Panax japonicus C. A. Mey. 的干燥
根茎,药材标本存放于三峡大学国家中医药管理局
中药药理科研三级实验室。乳酸脱氢酶( LDH) 、肌
酸激酶 ( CK ) 、超氧化物歧化酶 ( SOD ) 、丙二醛
( MDA) 、过氧化氢酶( CAT) 试剂盒,南京建成生物
工程研究所; 2,3,5-氯化三苯基四氮唑( TTC) ,美国
Sigma公司。
1. 3 主要仪器 Biopac 多导生理记录仪 ( Biopac
Systems,INC,MP150 ) ,美国 BIOPAC 公司; ALC-V8
型动物呼吸机,上海奥尔特生物科技有限公司; AV-
P960C数字展示台,日本 Victor 有限公司; UV-2000
型紫外-可见分光光度计,尤尼柯仪器有限公司;
LDZ5-2 型离心机,北京医用离心机厂; ULTRACUT-
R型超薄切片机,德国 Leica公司; Q500 型图像分析
仪,德国 Leica公司。
2 方法
2. 1 竹节参总皂苷的制备 取竹节参粗粉,加 10
倍量 60%的乙醇溶液,浸泡 2 h 后,加热回流提取 3
次,每次 3 h,合并滤液,滤过,得提取液; 提取液减压
回收溶剂至无醇味,加适量水稀释后放置,离心,取
上清液,用等量正丁醇萃取,减压回收溶剂,浓缩,得
正丁醇浸膏。取浸膏溶于水,过 D101 大孔树脂,依
次用水及 30 %、60 %、90 %乙醇冲洗。取 60 %洗
脱部位,经硅胶柱层析分离,采用三氯甲烷-甲醇梯
度洗脱,即得竹节参总皂苷。
2. 2 竹节参总皂苷的检测 按照笔者前期报道〔8〕
方法,采用高效液相色谱-蒸发光散射检测器( HPLC-
ELSD) 测定竹节参总皂苷含量。色谱条件为 Y MC-
pack ODS-AQ色谱柱( 416 mm ×250 mm,5 μm) ,乙腈
( A) -0. 5%乙酸水溶液( B) 为流动相,梯度洗脱( 0 ~5
min,20% ~40%A; 5 ~20 min,40% ~40%A) ;流速为
110 mL /min,柱温30 ℃。ELSD 检测器: 漂移管温度
为40 ℃,氮气释放压力为 33 Psi。
2. 3 动物分组与给药 手术前 1 w,选取心电图正
常的 30 只大鼠随机分为 3 组,每组 10 只: 假手术
组、模型组、竹节参总皂苷组( 给予竹节参总毛苷
200 mg /kg) 。各组动物灌胃给药 1 w,假手术和模
型组给予同体积生理盐水,末次给药 1 h 后进行结
扎心脏左冠状动脉前降支( ligation of the left anterior
descending branch,LAD) 手术。
2. 4 大鼠急性心肌缺血模型建立 采用结扎左冠
状动脉前降支复制心肌缺血模型,具体方法参见笔
者以前发表文章〔8〕。造模成功后,大鼠常规饲养。
此次实验模型成功情况: 假手术组成活 10 只,模型
组成活 8 只,竹节参总皂苷组成活 9 只。
2. 5 检测指标
2. 5. 1 心肌电生理指标测定: 将 3 个针形电极按
规定位置分别插入大鼠四肢皮下,记录肢体Ⅱ导联
·547·Journal of Chinese Medicinal Materials 第 35 卷第 5 期 2012 年 5 月
心电图,测量 T波高度。实验过程中心电图记录分
4 次,第 1 次: 灌胃给药前,选取心电图正常的大鼠
进行实验; 第 2 次: 行 LAD 术前记录心电图; 第 3
次:于 LAD 术后即刻记录心电图; 第 4 次: 与 LAD
术后 12 h记录心电图。
2. 5. 2 血流动力学测定:实验大鼠分别于 LAD 术
后 12 h 进行动物实验。20% 氨基甲酸乙酯溶液
( 1. 5 g /kg,ip) 麻醉大鼠后,颈部切开,分离右侧颈
总动脉,进行颈总动脉和左心室插管,测定左心室内
压。首先将连接换能器的聚乙烯导管从向心脏方向
由右侧颈总动脉插入约 1 cm,记录颈总动脉压 1
次,再进入左心室,记录血流动力学指标: 心率
( HR) ; 左心室收缩压 ( LVSP ) ; 左心室舒张末压
( LVEDP) ;左室内压上升最大速率( LV + dp /dtmax ) ;
左室内压下降最大速率( LV - dp /dtmin ) ,导管拔出
左心室后,再记录颈总动脉压 1 次。血流动力学指
标分别取 5 段进行统计,取平均值。
2. 5. 3 血清的生化指标测定: 记录完实验大鼠心
功能后,打开大鼠腹腔,腹后腔主动脉取血,3 500 r /
min离心 15 min,分离血清,按试剂盒说明书标示方
法测定血清中 LDH、CK、SOD、CAT、MDA。
2. 5. 4 心肌梗死面积测定:取血完毕后,快速取出
大鼠心脏,用生理盐水洗去残留血液,用洁净纱布吸
干水分后,进行全心拍照。然后沿长轴从心尖到心
底横向均切成 5 片,将心肌组织切片置于 1. 0% TTC
溶液中,37 ℃避光孵育,每隔 7 ~ 8 min翻动 1 次,染
色 15 min,然后用生理盐水冲洗干净,并经 AV-
P960C数字展示台拍照成像好后,用 Image /J 图像
分析软件计算心肌梗死面积。
2. 5. 5 心肌组织形态学指标测定: 另取心脏置于
4%多聚甲醛中固定。固定完毕后,将标本取出,常
规梯度乙醇脱水、二甲苯透明、浸蜡、包埋制成石蜡
切块,连续冠状切片,切片厚 5 μm,HE 染色后光镜
下观察。
2. 6 统计学处理 所有实验结果的数据以 珋x ± s
表示,所有数据分析在 SPSS 13. 0 统计软件包上进
行,以单因素方差分析进行多组间差异的比较,以
Dunnett-t检验比较两组间均数的差异; P < 0. 05 认
为差异有统计学差异。
3 结果
3. 1 竹节参总皂苷的组成及含量 结果如图 1 所
示:实验中共有 9 个皂苷的色谱峰被 HPLC-UV-ESI-
TOF-MS 检测到,根据分子量的有关数据,其中的
1 和 6 ~ 9峰分别为人参皂苷 Re、竹节参皂苷Ⅴ、Pjs-
2、竹节参皂苷Ⅳ、竹节参皂苷Ⅳa,其他的 4 个峰因
为峰面积偏小,没有进行鉴别。同时通过 HPLC-
ELSD 检测出竹节参总皂苷含量为 83. 48%。
图 1 竹节参总皂苷的 HPLC-ELSD典型色谱图
3. 2 竹节参总皂苷对急性心肌缺血大鼠心电图和
T波高度的影响 结果如图 2 所示,模型组在行
LAD术后即刻和 12 h 后心电图 T 波高度与假手术
组比较均显著降低( P < 0. 05 或 P < 0. 01 ) ; 与模型
组比较,竹节参总皂苷组心电图 T 波高度在行 LAD
术后即刻和 12 h 均显著抬高( P < 0. 05 或 P <
0. 01) 。结果表明,竹节参总皂苷能有效对抗 LAD
术诱发的心肌缺血大鼠心电图 T波降低。
图 2 竹节参总皂苷对急性心肌缺血
大鼠心电图及 T波高度的影响
注: 与假手术组比较,# P < 0. 05,## P < 0. 01; 与模型组比较
* P < 0. 05,**P < 0. 01
3. 3 竹节参总皂苷对急性心肌缺血大鼠血流动力
学的影响 与假手术组比较,模型组 LVSP、LV +
dp /dtmax、LV - dp /dtmin显著降低,LVEDP 显著升高
( P < 0. 05 或 P < 0. 01) ,提示心脏功能损伤; 用竹节
参总皂苷预处理后,升高的 LVEDP和降低的 LVSP、
LV + dp /dtmax、LV - dp /dtmin水平得到显著性逆转,与
模型组比较,差异显著( P < 0. 05) ,各实验组心率无
明显差异( 表 1) 。
·647· Journal of Chinese Medicinal Materials 第 35 卷第 5 期 2012 年 5 月
表 1 竹节参总皂苷对急性心肌缺血大鼠血液流变学指标的影响(珔x ± s)
组别 n /只 HR/( beats /min)
LVSP /
mmHg
LVEDP /
mmHg
LV + dp /dtmax /
( mmHg /s)
LV - dp /dtmin /
( mmHg /s)
假手术组 10 422 ± 56 142. 1 ± 5. 3 8. 68 ± 1. 34 3401. 1 ± 78. 0 - 3434. 40 ± 82. 3
模型组 8 412 ± 87 114. 5 ± 3. 6## 17. 14 ± 3. 29## 3011. 2 ± 60. 7## - 3135. 98 ± 72. 8#
竹节参总皂苷组 9 434 ± 14 125. 3 ± 3. 1* 13. 28 ± 2. 77* 3282. 8 ± 48. 3* - 3342. 04 ± 51. 8*
注:与假手术组比较,#P < 0. 05,##P < 0. 01;与模型组比较,* P < 0. 05
3. 4 竹节参总皂苷对急性心肌缺血大鼠血清心肌
酶的影响 结果如表 2 所示,与假手术组比较,模型
组大鼠血清 CK 和 LDH 活性显著升高( P < 0. 01 ) ;
与模型组比较,用竹节参总皂苷预处理后,CK 和
LDH活性均显著降低( P < 0. 05) 。
表 2 竹节参总皂苷对急性心肌缺血大鼠
血清心肌酶的影响(珔x ± s,n =6)
组别 n /只 CK/ ( U/mL) LDH/ ( U/L)
假手术组 10 0. 57 ± 0. 12 3113. 32 ± 363. 01
模型组 8 1. 54 ± 0. 26## 5259. 43 ± 253. 82##
竹节参总皂苷组 9 0. 74 ± 0. 21* 4535. 34 ± 470. 71*
注:与假手术组比较,##P < 0. 01;与模型组比较,* P < 0. 05
3. 5 竹节参总皂苷对急性心肌缺血大鼠血清
SOD、CAT活性及 MDA含量的影响 结果如表 3 所
示,与假手术组比较,模型组大鼠血清 SOD 和 CAT
活性显著降低( P < 0. 01) ,而血清 MDA含量显著升
高( P < 0. 01) ;与模型组比较,用竹节参总皂苷预处
理后大鼠血清 SOD 和 CAT 活性升高,MDA 含量降
低( P < 0. 05) 。结果表明竹节参总皂苷能升高急性
心肌缺血大鼠血清 SOD 和 CAT 活性,降低 MDA 含
量,减轻心肌缺血时的脂质过氧化损伤,对 LAD 诱
导的大鼠急性心肌缺血具有保护作用( 表 3) 。
表 3 竹节参总皂苷对急性心肌缺血大鼠血清 SOD、
CAT活性及MDA含量的影响(珔x ± s)
组别 n /只 SOD /( U /mL)
CAT /
( U /mL)
MDA /
( nmol /mL)
假手术组 10 111. 8 ± 4. 9 2. 21 ± 0. 38 4. 67 ± 0. 19
模型组 8 94. 2 ± 6. 7## 1. 18 ± 0. 24## 4. 99 ± 0. 13##
竹节参总皂苷组 9 111. 1 ± 7. 5* 2. 23 ± 0. 52* 4. 63 ± 0. 21*
注:与假手术组比较,##P < 0. 01;与模型组比较,* P < 0. 05
3. 6 竹节参总皂苷对急性心肌缺血大鼠心肌梗死
程度的影响 通过大鼠的全心的肉眼观察发现,除
模型组和竹节参总皂苷组心脏的左心室心尖部出现
轻度水肿外,基本上看不到缺血心脏外观与假手术
组心脏有明显的区别。心肌组织切片后,在横切面
可以看到缺血区颜色变浅,假手术组则无此类情况
出现。用 1. 0% TTC染色后,梗死部位为白色、非梗
死部位为红色,肉眼和光镜下可见散在的梗死区域。
通过使用 Image /J 图像分析软件计算心肌梗死面
积,经统计分析,模型组心肌梗死面积为 ( % ) :
15. 18 ± 1. 87,与假手术组( 0. 00 ± 0. 00) 比较,具有
显著性差异( P < 0. 01) ; 用竹节参总皂苷预处理后,
心肌梗死面积减小为: 11. 06 ± 1. 60,与模型组比较,
具有显著性差异( P < 0. 01) ( 图 3) 。
图 3 竹节参总皂苷对急性心肌缺血大鼠
心肌梗死面积的影响(珔x ± s,n =6)
注:与假手术组比较,##P <0. 01;与模型组比较,**P <0. 01
3. 7 竹节参总皂苷对急性心肌缺血大鼠心肌组织
病理学的影响 假手术组大鼠心肌组织结构正常,
未见充血、出血或炎性细胞反应,可见心肌肌原纤维
排列整齐,肌节长度一致、排列规整,肌纤维清晰,染
色质清楚。与假手术组比较,心肌缺血模型组大鼠
心肌内可见较大范围局灶性病变,并伴有明显的变
性和坏死;心肌纤维变长呈波浪形,排列紊乱和断
裂;肌纤维间距增宽,肌节缩短,排列不规整; 间质水
肿、充血或出血,有炎症细胞浸润。与模型组比较,
竹节参总皂苷组大鼠心肌病变的程度明显减轻,大
部分心肌无明显病变,有病变的心肌病灶也较局限,
局部有散在心肌细胞变性坏死,仅少量炎细胞浸润;
心肌肌原纤维排列较规整,肌节排列亦较为整齐。
结果提示竹节参总皂苷对 LAD 术致急性心肌缺血
大鼠的心肌损伤有较好保护作用( 图 4) 。
4 讨论
心肌缺血是临床的常见病和多发病,其对心肌直
接的影响是心肌梗塞,由于其起病迅速、发病率、死亡
率高,严重威胁人类健康,目前已成为人类三大致死
疾病之一,因而如何切实有效地减轻因心肌缺血导致
损伤成为了防治和抑制其进一步恶化重要目标〔9〕。
·747·Journal of Chinese Medicinal Materials 第 35 卷第 5 期 2012 年 5 月
图 4 竹节参总皂苷对急性心肌缺血大鼠心肌组织病理学的影响
竹节参具有较广泛的药理作用,对消化系统、中
枢神经系统、心脑血管系统、免疫系统等具有广泛的
药理作用[3,4〕,其主要成分竹节参总皂苷除具有抗
肿瘤、保护脑缺血性损伤外〔5,6〕,笔者前期研究发现
竹节参不同提取部位预处理对 LAD 致大鼠急性心
肌缺血损伤具有较好的保护作用〔7〕,为了进一步观
察其主要成分竹节参总皂苷对心肌缺血性保护作用
及可能的机制,笔者设计了本实验。实验研究结果
表明,竹节参总皂苷对急性心肌缺血大鼠受损的心
功能具有显著改善作用,能有效逆转心肌缺血升高
的 LVEDP 和降低的 LVSP、LV + dp /dtmax、LV-dp /
dtmin水平; 在改善心电图方面,竹节参总皂苷能有效
对抗 LAD术诱发的心肌缺血大鼠心电图 T波降低,
显示出对心肌缺血良好的保护作用。通常心肌组织
病理学可以直接反应出心肌缺血时心肌细胞受损伤
的程度,在心肌梗死程度和形态学分析中,笔者发现
竹节参总皂苷能显著降低缺血心肌梗死面积,使心
肌病变的程度明显减轻,减少炎细胞浸润,显示出了
对心肌缺血性损伤较好的保护作用。
近年来,随着对自由基( O -·2 、H2O2、OH·、NO及
ONOO - ) 研究的深入,证实了自由基的大量堆积及
脂质过氧化反应是导致心肌缺血性损伤的重要机制
之一。研究表明,在正常情况下,机体内氧自由基的
产生和清除是平衡的,当心肌缺血时,引起高能磷酸
化合物耗竭,使依赖能量的离子泵功能受损,导致线
粒体钙超载,并通过不同的信号传导途径产生大量
毒性氧自由基,而破坏线粒体膜和心肌细胞膜的完
整性,使心肌细胞膜的通透性增加,导致细胞内酶
CK与 LDH 大量释放〔10,11〕。故氧自由基损伤被认
为是心肌缺血时心肌损伤的主要机制。笔者在进行
血液的生化分析中,发现模型组大鼠的心肌酶和氧
化还原系统受到明显破坏,提示 LAD术诱发了心肌
细胞氧化损伤,实验结果与文献报道一致〔12〕。当心
肌组织缺血时,XOD 生成迅速增加,进而产生大量
的次黄嘌呤 ( HX) ,HX 和分子氧在 XOD 的催化下
生成大量的氧自由基( O -·2 及 OH·) 。一方面,在
SOD的作用下生成 H2O2,同时它又可通过 Fenton
反应和 Haber-weiss反应生成 OH·,另一方面,又可
与 NO反应形成 ONOO -,引起细胞膜脂质过氧化反
应; 同时 OH·还是一种特别不稳定氧化剂,可与细
胞膜脂质反应,引发细胞膜脂质过氧化连锁反应,导
致膜结构遭到破坏,造成心肌细胞凋亡或坏死。当
心肌细胞受损、细胞膜完整性破坏后,心肌酶便会外
漏释放入血,心肌酶在心肌细胞中含量较高,故其的
活性可反映心肌缺血损伤的范围和心肌细胞损伤的
严重程度〔13〕。在实验中,实验大鼠经竹节参总皂苷
预处理后血液中 CAT、SOD 酶的活性明显活性升
高,CK、LDH酶活性和 MDA含量显著降低。通过综
合分析本研究的实验结果,笔者初步证实了竹节参
总皂苷是通过对抗自由基、拮抗心肌组织过氧化损
伤,保持细胞膜的完整性及减少心肌酶的释放,来减
轻心肌缺血对心肌组织所造成损伤,进而实施对缺
血心肌实施保护作用。
综上所述,竹节参总皂苷能提高急性心肌缺血
大鼠血液 CAT、SOD 酶活性,增强了内源性氧自由
基清除系统的功能,降低 CK、LDH 酶活性和减少心
肌损伤和血清脂质过氧化产物 MDA 的水平,减轻
了氧自由基对心肌的损伤,降低心肌梗死面积和心
肌缺血性损伤,进而改善心功能。实验研究证实竹
节参总皂苷具有清除自由基和抗脂质过氧化作用,
这可能也是其保护缺血时心肌细胞损伤的机制之
一,然而详细的作用机制尚有待进一步研究。
参 考 文 献
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收稿日期: 2011-11-4
基金项目:中国博士后科学基金特别资助 ( 201003073 ) ; 中国博士后科学基金资助 ( 20090450017 ) ; 教育部高等学校博士点基金项目
( 200807330006)
作者简介:卫东锋( 1982-) ,男,博士,主要从事中药药理学研究; Tel: 13919828695,E-mail: weidongfeng888@ yahoo. cn。
* 通讯作者:程卫东,Tel: 0931-8915184,E-mail: chengweidong888@ sina. com。
红芪多糖对 S180瘤细胞化疗协同增效
作用的蛋白质组学分析
卫东锋1,赵春燕2,程卫东1,3* ,韦艳霞1,张李峰4,苏 刚4
( 1. 兰州大学中西医结合研究所,甘肃 兰州 730000; 2. 兰州大学药学院,甘肃 兰州 730000; 3. 北京师范
大学,北京 100009; 4. 兰州大学基础医学院,甘肃 兰州 730000)
摘要 目的:分析红芪多糖( Radix Hedysari polysaccharides,HPS) 对 S180瘤细胞化疗协同增效作用的差异蛋白
质。方法: 以环磷酰胺( Cyclophsphamide,Cy) 和 HPS联合 Cy治疗荷瘤小鼠后提取瘤细胞总蛋白,用双向电泳对蛋
白质进行分离,使用 PDQuest 8. 0 软件对双向电泳图谱进行差异分析,通过质谱技术鉴定差异明显的蛋白点,并用
蛋白免疫印迹方法对其中 1 个蛋白质进行验证。结果: HPS 联合 Cy 组中有 24 个蛋白点发生明显改变,经质谱和
Mascot软件分析,成功鉴定了 5 个蛋白质,分别为热休克蛋白 84 ( HSP90β) 、载脂蛋白 A、白蛋白、热休克蛋白 β1
( HSP27) 、未命名蛋白,其中 1 个高表达,4 个低表达。蛋白印迹验证与蛋白质组结果一致。结论:通过蛋白质组学
技术,发现了 HPS对 S180小鼠瘤细胞化疗增效作用的靶标蛋白,这些蛋白质涉及能量代谢、氧化应激反应和凋亡信
号转导。
关键词 红芪多糖; S180瘤细胞;蛋白质组学;增殖抑制相关蛋白;凋亡诱导相关蛋白
中图分类号: R285. 5 文献标识码: A 文章编号: 1001-4454( 2012) 05-0749-08
Proteomics Analysis of the Synergy Effect of Radix Hedysari Polysaccharides
Combined with Chemotherapy on S180 Tumor Cells
WEI Dong-feng1,ZHAO Chun-yan2,CHENG Wei-dong1,3,WEI Yan-xia1,ZHANG Li-feng4,SU Gang4
( 1. Institute of Integrated Chinese and Western Medicine,Lanzhou University,Lanzhou 730000,China; 2. College of pharmacy,
Lanzhou University,Lanzhou 730000,China; 3. Beijing Normal University,Beijing 100009,China; 4. School of Basic Medical Sci-
ences,Lanzhou University,Lanzhou 730000,China)
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