全 文 ：法测定精制物溶液中总黄酮含量 , 加样回收率为
100.4%,相对标准偏差为 1.5%;同法测定粗品溶液
中总黄酮含量 ,加样回收率为 100.2%,相对标准偏
差为 1.7%,即回收率较高 ,偏差较小 ,重现性好 ,方
法准确度较高。
表 3　加样回收率试验结果
样品号 样品中总黄酮含量/mg
芦丁加入量
/mg
测定量
/mg
回收率
/ %
平均回收率
/ % 相对标准偏差
1 4.997 1.70 6.706 100.50
2 4.997 1.30 6.294 99.77
3 4.997 0.80 5.817 102.45 100.4 1.5
4 4.997 0.60 5.587 98.31
5 4.997 0.20 5.017 100.74
3　讨论
超声技术已经广泛应用于中草药成分的提取。
利用超声法提取甘草总黄酮能显著地提高浸出率 ,缩
短提取时间 ,节省溶剂 ,操作方便 ,无环境污染 ,总黄
酮的提取效果较好[ 1] 。含量测定时 ,按常规方法 ,用
简便灵敏的紫外分光光度法[ 6 , 7] ,以芦丁为对照品。
含量测定结果说明 ,新疆产胀果甘草和光果甘草粗提
物中总黄酮含量分别为 3.8%和 3.5%,即胀果甘草
中的总黄酮含量略高 。利用大孔树脂对各总黄酮粗
提物进行进一步分离和精制后 ,总黄酮含量显著提
高 ,即分别达 35.4%和 33.2%。这说明 ,大孔树脂法
可能比其它柱层析法更实用 ,而且其洗脱溶剂是稀乙
醇 ,成本较低 ,不污染环境 。但是 ,利用此方法获得的
甘草总黄酮纯度较低 ,需要反复过柱 ,摸索精制条件 ,
以进一步提高纯度。
参考文献:
[ 1] 　崔永明 ,余龙江 ,敖明章.甘草总黄酮的提取技术及其抑
菌活性研究[ J] .中药材 , 2006 , 29(8):838-842.
[ 2] 　唐栩 ,许东辉 , 梅雪婷 ,等.26 种黄酮类天然活性成分的
药理研究进展[ J] .中药材 , 2003 , 26(1):46-54.
[ 3] 　胡爱萍 , 肖明中.甘草的药理作用及其用于艾滋病的研
究进展[ J] .湖北中医杂志 , 2006 , 28(12):48-50.
[ 4] 　聂小华 , 尹光耀 ,史宝军 , 等.甘草有效成分体外抗肿瘤
活性和免疫活性的研究[ J] .中药材 , 2003 , 26(7):508-
509.
[ 5] 　田莉 , 高晓黎.甘草的抗肿瘤作用 ,西北药学杂志 , 2004 ,
19(3):133-135.
[ 6] 　刘红 , 郁晓艺 ,汪河滨 , 等.人工栽培光果甘草不同根系
黄酮含量的测定[ J] .西北药学杂志 , 2005 , 20(1):11-12.
[ 7] 　吕欣 , 付玉杰 ,王微 , 等.紫外分光光度法测定甘草黄酮
含量[ J] .植物研究 , 2003 , 23(2):192-193.
(收稿日期:2008-03-05)
中药竹节参中总皂苷和齐墩果酸的
含量测定
袁　丁 ,何毓敏＊ , 鲁科明 ,张长城(三峡大学医学院 ,
湖北 宜昌 443002)
摘要:目的　建立竹节参中总皂苷和齐墩果酸的含量测定方
法。方法　以人参皂苷 Re 为指标 ,采用香草醛-高氯酸比色
法测定竹节参中总皂苷含量;竹节参中三萜苷元齐墩果酸的
含量采用高效液相色谱法测定 , 色谱条件采用 YMC-pack
ODS-AQ 色谱柱(250 mm×4.6 mm , 5 μm), 以甲醇-水-冰醋
酸-三乙胺(90∶10∶0.04∶0.02)为流动相 ,检测波长为 210
nm。结果　分别建立了竹节参中总皂苷和三萜苷元齐墩果
酸含量测定方法 , 并对湖北五峰 、恩施以及四川峨嵋地区竹节
参样品中总皂苷和齐墩果酸的含量进行了测定。结论　所建
立的方法均符合含量测定的要求 , 可分别用作竹节参中总皂
苷和齐墩果酸的含量测定。
基金项目:湖北省自然科学基金资助项目(2006ABA204);
湖北省科技攻关计划项目(2005AA301C06)
作者简介:袁丁 , 男 ,副教授＊通讯作者:何毓敏 , 男 , 讲师 , Tel:0717-6396818 , E-mail:
hym0811@163.com
关键词:竹节参;总皂苷;齐墩果酸;高效液相色谱;比色法
中图分类号:R927.2　　　文献标识码:A　　　
文章编号:1004-2407(2008)05-0278-03
竹节参别名竹节三七 、竹节人参 、白三七等 ,为五
加科人参属植物竹节参 Panax japonicus C.A.
Mey.的干燥根茎 ,是 1977 年以后各版《中国药典》
收载的品种之一 ,具有滋补强壮 、散瘀止痛 、止血祛痰
等功效 ,临床上常用于病后虚弱 、劳嗽咯血 、跌打损伤
等[ 1] 。竹节参的化学成分以皂苷类为主 ,其苷元主要
是齐墩果酸[ 2] 。综合文献报道 ,结合我们前期研究工
作表明 ,竹节参总皂苷具有抗炎 、抗氧化 、降血糖以及
抗肿瘤等多种药理活性[ 3 , 4] ,其主要苷元齐墩果酸则
表现出相类似的药理作用 ,因而测定两者的含量可以
在一定程度上反映药材的质量 。目前 ,对竹节参中齐
墩果酸的含量测定未见文献报道 。笔者采用比色法
测定竹节参中总皂苷的含量 ,并采用高效液相色谱
(HPLC)法测定竹节参中齐墩果酸的含量 ,经方法学
验证 ,具有准确度高 、重现性好等特点。
1　仪器与试药
1.1　仪器　Wate rs 2690型高效液相色谱仪 ,996型
二极管阵列检测器 , M illennium32色谱工作站 ,均为
美国Waters公司产品;UV-3010型紫外-可见分光光
度计 ,为日本 Hitachi(日立)公司产品;WFZ UV-
2100型紫外可见分光光度计 ,为尤尼柯(上海)仪器
有限公司产品。
1.2　试药　色谱分析用甲醇为色谱纯 ,其余试剂均
为分析纯;齐墩果酸对照品(批号 110709-200304),
278 西北药学杂志　2008 年 10 月　第 23 卷　第 5 期
人参皂苷 Re 对照品(批号 110754-200421),均购自
中国药品生物制品检定所;竹节参药材采购于湖北五
峰 、恩施以及四川峨嵋地区中药材收购站 ,经宜昌市
药检所 中药室鉴定 , 均为正品竹 节参 Panax
japonicus C.A.Mey 。
2　方法与结果
2.1　总皂苷的含量测定[ 5]
2.1.1　溶液的配制　样品溶液的制备:取竹节参药
材粉末(过 4号筛)1.0 g ,精密称定;置索氏提取器
中 ,加乙醚 200 mL ,加热回流 1 h ,弃去乙醚液 ,药渣
挥去乙醚;置于索氏提取器中 ,加甲醇 200 mL ,加热
提取至甲醇无色 ,取甲醇提取液 ,挥干;残渣以水 30
mL 分次转移至分液漏斗中 ,用水饱和正丁醇振摇提
取 5次 ,每次 20 mL ,合并正丁醇提取液 ,用正丁醇饱
和的水洗涤 2次 ,每次 30 mL ,合并正丁醇提取液;蒸
干 ,残渣加甲醇溶解并转移至 25 mL 量瓶中 ,加甲醇
至刻度 ,摇匀 ,即得。
对照品溶液的制备:精密称取人参皂苷 Re对照品
适量 ,置 10 mL 量瓶中 ,以甲醇制成每 1 mL 含 1.30
mg的对照品溶液 ,即得 。
2.1.2　最大吸收波长的确定　精密吸取 2.1.1项下
人参皂苷 Re 对照品溶液 50 μL 和竹节参样品溶液
40 μL ,分别置于 10 mL 具塞试管中 ,水浴挥干溶剂;
分别精密加入新配制的 5%香草醛-冰乙酸溶液 0.2
mL ,高氯酸 0.8 mL ,加塞 ,摇匀;于 60 ℃水浴加热
15 min ,取出 ,置冰水浴中冷却 3 min;分别精密加入
冰醋酸 5 mL ,摇匀 ,于可见波长段带(400 ～ 700 nm)
扫描 。结果表明 ,人参皂苷 Re 对照品溶液和竹节参
样品溶液经香草醛-高氯酸试剂显色后的吸收光谱基
本一致 ,均在 552 nm 处有最大吸收波长 ,故选择 552
nm 作为测定波长。
2.1.3　标准曲线的制备　分别精密吸取 2.1.1项下
人参皂苷 Re 对照品溶液 30 , 50 , 70 , 90 , 110 和 130
μL ,置于 10 mL 具塞试管中 ,水浴挥干溶剂 ,同 2.1.2
项下方法操作 ,随行试剂作空白 ,于552 nm处测定吸
光度 。以吸光度(A)对人参皂苷 Re 质量浓度 C
(mg ·L-1)进行线性回归 ,得回归方程:A =0.019 4
C-0.005 9 , r =0.999 8 ,该结果表明人参皂苷 Re在
6.50～ 28.17 mg ·L-1质量浓度范围内线性关系良好。
2.1.4　精密度与稳定性试验　精密吸取 2.1.1项下
竹节参溶液 40 μL ,共 5份 ,分别置于具塞试管中 ,按
标准曲线制备项下方法操作 ,于 552 nm 处测定吸光
度 ,结果 RSD为 1.09%(n =5)。
精密吸取 2.1.1项下竹节参溶液 40 μL ,按标准
曲线制备项下方法操作 ,每隔 5 min 测定 1 次吸光
度 ,共 14次 ,计算 RSD为1.24%(n =11),表明竹节
参总皂苷在显色终止反应后 65 min内测定稳定 。
2.1.5　重现性与回收率试验　精密称取同一批(批
号 05051501)竹节参药材粉末 5份 ,分别按照 2.2.1
项下方法制备样品溶液 ,按精密度试验法进行测定 ,
结果 RSD为 2.64%(n =5),表明本法重现性良好。
取已知总皂苷含量(163.25 mg · g-1)的竹节参
药材粉末 0.5 g ,共 6份 ,称定后分别加入人参皂苷 Re
对照品溶液适量 ,按照 2.2.1项下方法制备样品溶液 ,
按精密度试验法进行测定 ,计算得竹节参中总皂苷平
均加样回收率为 98.27%, RSD为 2.92%(n =6)。
2.1.6　样品的含量测定　取不同产地的竹节参药材
粉末 1.0 g ,称定后分别按照 2.2.1 项下方法制备样
品溶液 ,精密吸取该样品溶液 40 μL ,分别按标准曲
线制备项下方法操作 ,于 552 nm 处测定吸光度。由
标准曲线给出样品溶液相当于人参皂苷 Re 对照品
溶液的质量浓度 ,根据回归方程 ,计算样品中总皂苷
的含量 。
结果湖北恩施产竹节参(批号 05051501 和
05051501)总皂苷的含量分别为 163.25和 161.55
mg · g-1 , 五 峰产 竹 节参 (批 号 05051701 和
05051701)总皂苷的含量分别为 164.83和 163.21
mg · g-1 ;四川峨嵋产竹节参(批号 06041101)总皂苷
的含量为 150.53 mg ·g-1 。
2.2　齐墩果酸的含量测定[ 5]
2.2.1　色谱条件　色谱柱为 YMC-pack ODS - AQ
柱(250 mm ×4.6 mm ,5 μm);流动相为甲醇-水-冰
醋酸-三乙胺(90∶10∶0.04∶0.02);检测波长为
210 nm ;流速为 1.0 mL · min-1 ;柱温为 30 ℃。在
此色谱条件下 ,竹节参样品溶液中齐墩果酸与其它组
分能达到基线分离 ,色谱图见图 1 。
图 1　HPLC色谱图
A-齐墩果酸对照品溶液;B-竹节参样品溶液
2.2.2　标准曲线的制备　精密称取齐墩果酸对照品
适量 ,置10 mL 量瓶中 ,以甲醇制成每 1 mL 含 1.18
mg 的对照品溶液。分别精密吸取该对照品溶液 4 ,6 ,
8 ,10 ,15 和 20 μL ,按选定的色谱条件进样测定 。以
峰面积(Y)对进样量(X)进行线性回归 ,得回归方
程:Y =444 293.609 X +17 052.413 , r =0.999 9 ,
线性范围为 4.72 ～ 23.60μg 。
2.2.3　样品溶液的制备　取竹节参药材粉末 1.0 g ,
精密称定 ,置具塞锥形瓶中 ,精密加入甲醇 50 mL ,称
定质量;超声处理(功率 250 W , 频率 50 kHz)40
min ,再称定质量 ,用甲醇补足减失的质量 ,摇匀 ,滤过;
279西北药学杂志　2008 年 10 月　第 23 卷　第 5 期
精密量取续滤液 10 mL ,回收溶剂至干 ,残渣加 25%盐
酸20 mL 、三氯甲烷 25 mL ,加热水解1.0 h;水解物用
三氯甲烷振摇提取 2次 ,每次 25 mL ,合并提取液 ,回
收溶剂至干;残渣加甲醇溶解并转移至 10 mL 量瓶中 ,
加甲醇至刻度 ,摇匀 ,滤过 ,取续滤液 ,即得。
2.2.4　精密度与稳定性试验　精密吸取齐墩果酸对
照品溶液(1.18 g · L-1)10 μL ,在选定的色谱条件
下 ,重复进样 6次 。结果齐墩果酸峰面积的 RSD 为
0.77%。
取竹节参样品溶液 ,常规保存 。在选定的色谱条
件下 ,分别于放置 0 ,2 ,4 ,6和 8 h后进样 10 μL 进行
测定 。结果齐墩果酸峰面积的 RSD为 1.01%,表明
该样品溶液在 8 h内测定稳定 。
2.2.5　重现性与回收率试验　精密称取同一批(批
号 05051501)竹节参药材粉末 5份 ,分别按 2.2.3项
下方法制备样品溶液 ,在选定的色谱条件下 ,分别进
样 10 μL 进行测定 。结果齐墩果酸峰面积的 RSD为
1.56%,表明本方法重现性良好。
取已知齐墩果酸含量(64.36 mg · g-1)的竹节
参药材粉末0.5 g ,共 6份 ,称定后分别按已知含量的
80%,100%和 120%加入齐墩果酸对照品溶液适量 ,
按照 2.2.3项下方法制备样品溶液 ,依法测定 ,计算
得齐墩果酸平均回收率为 98.16%, RSD 为 2.04%
(n =6)。
2.2.6　样品测定　取不同产地的竹节参药材粉末
(过 4号筛)1.0 g ,称定后分别按 2.2.3项下方法制
备样品溶液 ,在选定的色谱条件下 ,分别进样 10 μL
进行测定 ,按面积外标法计算含量 。
结果湖北恩施产竹节参(批号05051501和 05051501)
齐墩果酸的含量分别为 64.36和 63.21 mg ·g-1 ,五峰
产竹节参(批号 05051701和 05051701)总皂苷的含量
分别为 65.26和 64.07 mg · g-1 ;四川峨嵋产竹节参
(批号 06041101)总皂苷的含量为 59.12 mg ·g-1 。
3　讨论
本文以人参皂苷 Re为指标 ,建立了以香草醛-高
氯酸比色法测定竹节参中总皂苷含量的方法;以齐墩
果酸为指标 ,建立了以 HPLC 法测定竹节参中三萜
苷元齐墩果酸含量的方法。齐墩果酸含量测定的系
统适用性试验表明 ,选择甲醇-水-冰醋酸-三乙胺的四
元流动相体系 ,既能使齐墩果酸峰形对称 ,又能与其
它组分达到基线分离 ,符合含量测定的要求。总皂苷
含量测定的方法学考察表明 ,该方法简单易行 ,回收
率高 ,重现性好 ,能准确快速进行竹节参中总皂苷的
含量测定 。
实际测定结果表明 ,不同产地的竹节参中总皂苷
和三萜苷元齐墩果酸的含量均较高 ,且两者呈一定的
对应关系 ,即总皂苷含量越高 ,齐墩果酸含量也越高 。
上述实验结果适用于对竹节参质量进行控制和评价 。
参考文献:
[ 1] 　中国药典 2005 年版[ S] .一部.2005:93.
[ 2] 　国家中医药管理局《中华本草》编委会.中华本草[ M] .
第五卷.上海:上海科学技术出版社 , 1999:832-834.
[ 3] 　郑虎占 , 董泽宏 , 佘靖.中药现代研究与应用[ M ] .第
6卷.北京:学苑出版社 , 1998:5627-5630.
[ 4] 　袁丁 , 左锐 , 张长城.竹节参总皂苷抑制小鼠肿瘤生长的
实验研究[ J] .时珍国医国药, 2007 , 18(2):277-278.
[ 5] 　张克 ,党全训 , 李华.HPLC 法测定龙牙肝泰胶囊中齐墩
果酸的含量[ J] .西北药学杂志 , 2007 , 22(5):239-240.
(收稿日期:2008-05-19)
基金项目:科技部科技支撑计划资助(2006BAI06A20-10)
作者简介:姚亚红 , 女 ,硕士
＊通讯作者:张立伟, 男, 教授, Tel:0351-7017924 , E-mail:lwzhang@sxu.edu.cn
黄芩素提取工艺研究
姚亚红1 ,张立伟2＊(1.西安建筑科技大学理学院 , 陕西 西
安 710055;2.山西大学分子科学研究所 , 山西 太原 030006)
摘要:目的　优选黄芩中黄芩素的提取工艺。方法　以黄芩
素的含量为指标 ,利用正交试验确定了提取黄芩素的工艺条
件。结果　超声提取最佳工艺条件是:超声 30 min , 提取 2
次 , 乙醇加入量为药材量 10倍。结论　超声法优于浸渍提取
法 , 该优化工艺合理。
关键词:黄芩素;高效液相色谱法;提取工艺;正交设计
中图分类号:R284　　　文献标识码:A　　　
文章编号:1004-2407(2008)05-0280-03
黄芩素(baicalein)是中药黄芩(Scutellaria baica-
lensis Geo rgi)的主要有效成分之一 , 为黄酮类化合
物 ,具有抗菌 、抗病毒 、抑制炎症反应 、保肝 、利胆 、利
尿 、抗氧化及抗癌等多种药理作用[ 1] 。目前 ,黄芩素
的提取多采用浸渍法 ,该法费时 ,收率也低 ,且国内的
研究主要集中在黄芩素的提取分离 ,而对其工艺的研
究尚未见报道。本实验综合利用酶解法和超声法对黄
芩素进行提取 ,并对其主要影响因素进行了考察 ,探索
一种快速 、简便 、提取率高的黄芩素提取方法 。
1　仪器与试剂
KQ3200超声波清洗器(昆山市超声仪器有限公
司);黄芩(市售 , 粉碎后过 80 目筛备用);Agilent
1100 型高效液相色谱仪(美国安捷伦公司);黄芩素
对照品(中国药品生物制品检定所 , 批号 111595-
200301);冰醋酸 、乙腈和甲醇均为色谱纯;其它试剂
均为分析纯 。
2　方法与结果
280 西北药学杂志　2008 年 10 月　第 23 卷　第 5 期