全 文 ：基金项目:云南省教育厅基金重点项目(2013Z153);大理学院 2012 年应用开发基金资助项目;大理学院 2011 年中青年学术带头人培养项目
作者简介:张琳，女，硕士研究生 研究方向:天然药物活性成分及质量控制 * 通讯作者:李海峰，男，教授，硕士生导师 研究方向:药
用植物次生代谢、品质评价及质量控制 Tel /Fax:(0872)2251475 E-mail:lihfzh888@ sina. com
滇龙胆花药材质量标准及品质评价的研究
张琳，罗智渊，冯丽丽，李晓东，李海峰* (大理学院药学与化学学院，云南 大理 671000)
摘要:目的 评价滇龙胆不同居群花的药材质量，探讨滇龙胆花是否可以与其根同等入药。方法 采用高效液相色谱法测定
滇龙胆花中活性成分龙胆苦苷、獐牙菜苦苷、獐牙菜苷含量，建立其高效液相色谱法(HPLC)指纹图谱及其与根比较的 HPLC
指纹图谱，并用单因素方差分析、聚类分析和主成分分析对其品质及质量等同性进行评价。结果 大理白族自治州滇龙胆不
同居群花间整体品质较好，龙胆苦苷含量较低的感通居群龙胆苦苷含量也与国家标准接近，滇龙胆不同居群间花中龙胆苦
苷、獐芽菜苦苷、獐芽菜苷含量具有极显著差异(P ＜ 0. 01);对不同居群花间质量等同性进行分析，确定 HPLC 指纹图谱中 15
个共有峰，滇龙胆不同居群花间 HPLC指纹图谱相似度均在 0. 809 以上，指认其中龙胆苦苷、獐牙菜苦苷、獐牙菜苷 3 个与活
性相关的特征峰，不同居群花间质量等同性基本一致;对不同居群间花与根进行指纹图谱分析，确定 HPLC指纹图谱中 8 个共
有峰，共有峰 HPLC指纹图谱相似度除了感通居群外，均在 0. 846 以上，说明花中所含有效成分与根相似，并且还有些根中未
检测到的成分;滇龙胆不同居群花间龙胆苦苷、獐牙菜苦苷、獐牙菜苷总含量聚类分析和 HPLC 指纹图谱主成分分析结果相
似。结论 从滇龙胆花中活性成分含量已达到药典标准要求。但是滇龙胆花与根比较的 HPLC 指纹图谱存在一定的差异。
因此滇龙胆花是否可以作为其根的替代品入药，仍需进一步做药理、毒理及临床实验。
关键词:滇龙胆花;高效液相色谱法;含量测定;指纹图谱;质量标准;品质评价
doi:10. 11669 /cpj. 2014. 16. 019 中图分类号:Ｒ284;Q945 文献标志码:A 文章编号:1001 －2494(2014)16 －1451 －07
Quality Evaluation of Flowers of Gentiana rigescens Franch
ZHANG Lin，LUO Zhi-yuan，FENG Li-li，LI Xiao-dong，LI Hai-feng* (College of Pharmacy and Chemistry，Dali Univer-
sity，Dali 671000，China)
ABSTＲACT:OBJECTIVE To evaluate the quality of the flowers of Gentiana rigescens Franch. from different populations in order to
explore whether the flowers can be used as a medicine as the roots. METHODS The contents of the active ingredients，ie，gentiopicro-
side，swertiamarin and sweroside，in the flowers of Gentiana rigescens Franch. were determined by HPLC. The HPLC fingerprint of the
flowers were established and compared with that of the roots. The quality and quality equivalence were evaluated by One-way ANOVA，
cluster analysis and principal component analysis (PCA). ＲESULTS The overall quality of the flowers of Gentiana rigescens Franch.
from different populations in Dali Yunnan was good. The content of gentiopicroside in the sample from Gantong population was lower than
those in the other populations，while it was close to the national standard. There was significant difference in the contents of gentiopicro-
side，swertiamarin，and sweroside in the flowers of Gentiana rigescens Franch from different populations (P ＜0. 01). Quality equivalence
of Gentiana rigescens Franch. from different populations was analyzed，and 15 common peaks in HPLC fingerprint were selected to evalu-
ate the similarities of the crude drugs. The similarities of the common peaks were all above 0. 809. Three characteristic peaks of gentiopi-
croside，swertiamarin and sweroside which were related to the activity of Gentiana rigescens Franch. were identified，and the quality of
different populations was basically equivalent. The HPLC fingerprints of the flowers of Gentiana rigescens Franch. from different popula-
tions were compared with that of the roots. And 8 common peaks were selected to evaluate the similarities of the crude drugs. The similar-
ity of the common peaks was all above 0. 846 except to Gantong population. The total contents of gentiopicroside，swertiamarin and swero-
side of Gentiana rigescens Franch. from different populations were similar as shown by cluster analysis and PCA of HPLC fingerprint.
CONCLUSION The contents of active constituents of the flowers from Gentiana rigescens Franch. are already up to the national stand-
ard. But there are still some differences in HPLC fingerprints between the flower and roots，which indicates that the flowers not only con-
tain the active ingredients the roots contain，but also contain many ingredients that do not exist in the roots. Therefore，to decide whether
the flowers can replace the roots as a medicine，some pharmacological，toxicological and clinical experiments still need to be done.
KEY WOＲDS:Gentiana rigescens Franch. flowers;HPLC;content determination;fingerprint;quality standard;quality evaluation
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中国药学杂志 2014 年 8 月第 49 卷第 16 期 Chin Pharm J，2014 August，Vol. 49 No. 16
滇龙胆(Gentiana rigescens Franch. ex Hemsmal)
又称坚龙胆、滇龙胆草，为龙胆科(Gentianaceae)龙
胆属多年生宿根草本植物，是我国特有物种，云南、
贵州、四川、广西壮族自治区等省均有分布［1］。滇
龙胆在云南药用历史悠久，被历版《中国药典》收
录，为传统中药材龙胆的植物来源之一［2］。滇龙胆
根及根茎具有保肝、护肝、抗肿瘤、抗炎、抗癌、抗病
毒、健胃、治疗神经退行性疾病等多种功效［3-5］，近来
药理学研究表明，有抗呼吸道合胞病毒(respiratory
syncytial virus，ＲSV)、降血糖等功效［6-7］。滇龙胆的
主要有效成分是裂环烯醚萜类物质，其功效与龙胆
苦苷、獐牙菜苦苷、獐牙菜苷等 3 种裂环烯醚萜密切
相关。
随着滇龙胆的深入研究与开发，资源需求量不断
增加。滇龙胆在云南虽已有人工栽培，但野生资源在
市场中仍占较大份额，利益驱使及无序采挖使得野生
滇龙胆资源量锐减［8-9］。且《中国药典》规定其药用
部位为根及根茎［2］，滇龙胆花虽不是药典规定的药用
部位，但是据作者调查发现云南民间有以滇龙胆花入
药用药习惯，且滇龙胆花的价格要比根的价格高，因
此，本实验拟利用高效液相色谱法(HPLC)对云南大
理滇龙胆 10个居群花中龙胆苦苷、獐牙菜苦苷、獐牙
菜苷含量进行测定，并建立其 HPLC 指纹图谱，同时
进行滇龙胆花 HPLC 指纹图谱与根 HPLC 指纹图谱
共有模式进行比对分析。用单因素方差分析、聚类分
析和主成分分析(principal component analysis，PCA)
对其品质及质量等同性进行评价，初步探讨滇龙胆花
是否可以代替其根入药的可行性，以增加滇龙胆资源
的利用率，缓解资源匮乏的现状。
1 材料与设备
1. 1 原料与试剂
滇龙胆采样点选择与样品采集:2012 年 11 月，
在云南省大理白族自治州范围内选择滇龙胆野生资
源分布较丰富的 10 个县(市)，每个县(市)采集 1
个野生居群，居群间距离大于 100 km，采样点生境
以土壤类型为红壤的荒山向阳坡草地上的居群，每
个居群随机采集无病虫害的开花期植株 30 株，采集
植株之间的株距不小于 3 m，采集的植株自然干燥，
经大理学院李海峰教授鉴定为龙胆科滇龙胆(Genti-
ana rigescens Franch. )，样品信息见表 1。在滇龙胆
不同居群间花中龙胆苦苷、獐牙菜苦苷及獐牙菜苷
含量测定时，从每个居群中随机选取根质量在
2. 6 ～ 3. 0 g之间的植株 9 株的花混合作为样品。
龙胆苦苷对照品(中国药品生物制品检定研究
院，批号:110770-201013，含量以 96. 9%计)，獐牙菜
苦苷对照品(中国药品生物制品检定研究院，批号:
0785-200203，供鉴别用)，獐牙菜苷对照品(贵州迪
大生物有限公司，GAS NO:14215-86-2，纯度≥
98%)。高效液相流动相甲醇为色谱纯，提取样品
用甲醇为分析纯，水为超纯水(Millipore 纯水处理系
统制)，其余试剂均为分析纯。
1. 2 仪器与设备
Agilent1200 高效液相色谱仪，包括 G1313A
ALS自动进样器、G1315A /B DAD 检测器、Agilent
ChemStation 色谱工作站 (美国安捷伦公司);
SK5200H型超声波清洗仪(上海科导超声仪器有限
公司);梅特勒电子天平 AE240 (梅特勒-托利多仪
器有限公司);FY135 型中草药粉碎机(天津市泰斯
特仪器有限公司);Millipore纯水处理系统等。
2 方 法
2. 1 滇龙胆不同居群花中龙胆苦苷、獐牙菜苦苷、
獐牙菜苷含量测定
2. 1. 1 色谱条件 色谱柱:Thermore C18 (4. 6
mm ×250 mm，5 μm);流动相为甲醇-0. 1%磷酸水
(27∶ 73，V /V);龙胆苦苷检测波长 274 nm、獐牙菜苦
苷和獐牙菜苷检测波长 243 nm;柱温:25 ℃;流速:
1 mL·min －1。
2. 1. 2 对照品溶液的制备 分别精密称取龙胆苦
苷 3. 270 0 mg、獐牙菜苦苷 5. 000 0 mg、獐牙菜苷
4. 460 0 mg，分别置于 5、10、5 mL量瓶中，用甲醇溶
解并稀释至刻度，摇匀，分别配成 0. 654 0、0. 500 0、
0. 892 0 mg·mL －1溶液。
2. 1. 3 供试品溶液的制备 取滇龙胆样品粉碎，过
100 目筛，30 ℃烘箱中干燥直到恒重，精密称取滇龙
表 1 滇龙胆花药材信息
Tab. 1 The information of the flower samples of Gentiana riges-
cens Franch
No. Species Sample source Batch number Collected time Description
S1 G. rigesciens Gantong，Dali 121101 December，2012 Wild
S2 G. rigescens Eryuan，Dali 121102 December，2012 Wild
S3 G. rigesciens Weishan，Dali 121103 December，2012 Wild
S4 G. rigesciens Nanjian，Dali 121104 December，2012 Wild
S5 G. rigesciens Jianchuan，Dali 121105 December，2012 Wild
S6 G. rigesciens Heqing，Dali 121106 December，2012 Wild
S7 G. rigesciens Xiangyun，Dali 121107 December，2012 Wild
S8 G. rigesciens Binchuan，Dali 121108 December，2012 Wild
S9 G. rigesciens Midu，Dali 121109 December，2012 Wild
S10 G. rigesciens Yangbi，Dali 121110 December，2012 Wild
·2541· Chin Pharm J，2014 August，Vol. 49 No. 16 中国药学杂志 2014 年 8 月第 49 卷第 16 期
胆花药材粉末 0. 05 g(万分之一电子天平)于 50 mL
三角瓶中，加入 2 mL 甲醇，于 40 kHz、40 ℃超声处
理 20 min，滤纸过滤，滤渣用 2 mL 甲醇按此步骤重
复处理 1 次，合并 2 次提取滤液至 5 mL 量瓶中，冷
却至室温，加甲醇溶液至刻度，混匀，定容，即得供试
品溶液。
2. 1. 4 方法专属性 在“2. 1. 1”色谱条件下，分别
取对照品溶液和供试品溶液进样测定，得到特征峰，
供试品溶液与杂质分离良好，无干扰(图 1、2)。
2. 1. 5 线性关系 将龙胆苦苷对照品溶液依次稀
释成 0. 654 0、0. 261 6、0. 209 3、0. 104 6、0. 065 4、
0. 026 16 mg·mL －1溶液，獐牙菜苦苷对照品溶液依
次稀释成 0. 500 0、0. 200 0、0. 160 0、0. 080 0、0. 040
0、0. 020 0 mg·mL －1溶液，獐牙菜苷对照品溶液依
次稀释成 0. 892 0、0. 356 8、0. 285 4、0. 142 7、0. 071
36、0. 035 68 mg·mL －1溶液，在“2. 1. 1”色谱条件
下，每次进样 10 μL，分别测定龙胆苦苷、獐牙菜苦
苷、獐牙菜苷对照品峰面积，再分别以进样浓度对峰
面积进行回归，得回归方程，同时以信噪比 3 和 10
为标准考察检测限(LOD)和定量限(LOQ)，结果见
表 2。
2. 1. 6 精密度实验 取 0. 104 6 mL·min －1龙胆苦
苷、0. 02 mg·mL －1獐牙菜苦苷和 0. 356 8 mg·
mL －1獐牙菜苷对照品溶液，在“2. 1. 1”色谱条件下，
每次进样 10 μL，重复进样 6 次，测得平均峰面积分
别为 1 095、177. 7、3 680，ＲSD 分别为 0. 96%、
0. 99%、0. 14%(n = 6)，结果表明精密度良好。
2. 1. 7 重现性实验 精密称取同一批样品 6 份，按
“2. 1. 3”方法分别制备 6 份供试样品溶液，在
“2. 1. 1”色谱条件下，每次进样 10 μL，测定龙胆苦
苷、獐牙菜苦苷、獐牙菜苷含量变化，分别测得平均
峰面积为 943. 5、108. 6、84. 3，ＲSD 分别为 0. 51%、
2. 68%、2. 28%(n = 6)，表明实验重现性较好。
2. 1. 8 回收率实验 精密称取同一批次的滇龙胆
根样品约 0. 1 g 4 份，其中 3 份精密加入 0. 080 0
mg·mL －1的獐牙菜苦苷对照品溶液 0. 5 mL，另一
份作为空白，按“2. 1. 3”样品溶液制备方法和色谱
条件测定峰面积;另精密称取同一批次的滇龙胆根
及根茎样品约 0. 05 g，共 6 份，其中 3 份精密加入
0. 261 6 mg·mL －1的龙胆苦苷对照品溶液 1 mL，另
3 份加入 0. 028 54 mg·mL －1的獐牙菜苷对照品溶
液 0. 5 mL，按“2. 1. 3”溶液制备方法和色谱条件测
定峰面积，结果见表 3。
2. 1. 9 稳定性实验 取供试样品溶液 1 份，在
“2. 1. 1”色谱条件下，每次进样 10 μL，分别在 0、2、
4、6、8、10、12 h 进样，考察供试样品溶液中龙胆苦
苷、獐牙菜苦苷、獐牙菜苷含量变化，测得平均峰面
积为 983. 4、175. 4、68. 01，ＲSD 分别为 0. 661 1%、
图 1 龙胆苦苷对照品(A)及样品(B)色谱图
2 －龙胆苦苷
Fig. 1 HPLC Chromatograms of gentiopicroside reference sub-
stance (A )and sample (B)
2 － gentiopicroside
图 2 獐牙菜苦苷对照品(C)、獐牙菜苷对照品(D)及样品
(E)色谱图
1 －獐牙菜苦苷;3 －獐牙菜苷
Fig. 2 HPLC Chromatograms of swertiamarin reference sub-
stance (C)，sweroside reference substance (D)and sample(E)
1 － swertiamarin;3 － sweroside
表 2 滇龙胆中 3 种对照品标准曲线、检测限与定量限
Tab. 2 Calibration curves，LODs and LOQs of three reference substances of Gentiana rigescens Franch
Substance Ｒegression equation r Linear range /μg LOD /μg LOQ /μg
Gentiopicroside Y =1 046X －16. 832 0. 999 8 0. 261 6 － 6. 540 0. 116 5 0. 363 5
Swertiamarin Y =917. 56X －57. 832 0. 999 4 0. 200 0 － 5. 000 0. 150 8 0. 370 2
Sweroside Y =1 005. 5X +31. 517 0. 999 2 0. 356 8 － 8. 920 0. 108 8 0. 386 6
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中国药学杂志 2014 年 8 月第 49 卷第 16 期 Chin Pharm J，2014 August，Vol. 49 No. 16
2. 231%、2. 831%(n = 6)，结果表明，供试样品溶液
在 12 h内稳定。
2. 1. 10 样品测定 分别测定 11 个居群滇龙胆根
中龙胆苦苷、獐牙菜苦苷、獐牙菜苷含量，每个居群
均做 3 组平行实验，所得数据用 SPSS17. 0 统计软件
进行单因素方差分析。结果见表 4。
2. 2 大理白族自治州滇龙胆不同居群根指纹图谱
的建立
2. 2. 1 色谱条件 色谱柱:BDSHYPEＲSIL C18(4. 6
mm ×250 mm，5 μm);流动相 A 为甲醇;B 为 0. 1%
磷酸水;线性梯度洗脱:0 ～ 65 min，15% ～ 95% A;检
测波长:235 nm;柱温:25 ℃;流速:0. 8 mL·min －1。
2. 2. 2 对照品溶液的制备 同“2. 1. 2”龙胆苦苷、
獐牙菜苦苷、獐牙菜苷对照品溶液的制备。
2. 2. 3 供试品溶液的制备 同“2. 1. 3”样品溶液
的制备。
2. 2. 4 稳定性实验 取同一批次的样品，制备供试
品溶液，分别考察 0、2、4、6、8、12 h 的各共有峰的相
对峰面积和相对保留时间，采用“中药色谱指纹图
谱相似度评价系统 A 版”计算，得到相对保留时间
的 ＲSD 均小于 1. 1%，相对峰面积的 ＲSD 均小于
3. 0%，符合指纹图谱的要求，稳定性良好。
2. 2. 5 精密度实验 取同一批次的样品，制备供试
品溶液，连续进样 6 次，各共有峰的相对峰面积和相
对保留时间，采用“中药色谱指纹图谱相似度评价
系统 A版”计算，得到相对保留时间的 ＲSD均小于
0. 93%，相对峰面积的 ＲSD 均小于 2. 42%，符合指
纹图谱的要求，精密度良好。
2. 2. 6 重现性实验 取同一批次的样品，称取 6
份，制备供试品溶液，所得的各共有峰的相对峰面积
和相对保留时间，采用“中药色谱指纹图谱相似度
评价系统 A 版”计算，相对保留时间的 ＲSD 均小于
1. 53%，相对峰面积的 ＲSD 均小于 2. 79%，符合指
纹图谱的要求，重现性良好。
2. 2. 7 样品的测定 取 10 个居群滇龙胆花样品，
按照“2. 1. 3”项的方法制备样品，测定 10 个居群的
HPLC指纹图谱，用“中药色谱指纹图谱相似度评价
系统 2004A版”进行分析。
3 结果与分析
3. 1 滇龙胆不同居群花中龙胆苦苷、獐牙菜苦苷、
獐牙菜苷含量比较分析
滇龙胆不同居群花中龙胆苦苷、獐芽菜苦苷、獐
芽菜苷含量见表 4。龙胆苦苷、獐芽菜苦苷、獐芽菜
苷总含量在(1. 097 ± 0. 003 4)% ～ (8. 720 ±
0. 082)%之间。大理白族自治州滇龙胆不同居群
花中龙胆苦苷含量整体较高，含量较低的感通居群
中龙胆苦苷含量也与国家标准很接近［2］。对滇龙
胆不同居群花中龙胆苦苷、獐芽菜苦苷、獐芽菜苷及
其总含量进行显著性检验，结果表明，巍山居群滇龙
胆花中龙胆苦苷、獐牙菜苦苷、獐牙菜苷含量及其总
含量均极显著(P ＜ 0. 01)高于其他居群。
3. 2 聚类分析
参照文献［10］的方法，以表 4 中滇龙胆花中龙胆
苦苷、獐芽菜苦苷、獐芽菜苷总含量为依据，通过
SPSS17. 0 软件平方欧式距离计算样品间的相似系
数，并用 Ward法进行系统聚类。树状聚类结果(图
3)，根据滇龙胆花中龙胆苦苷、獐牙菜苦苷、獐牙菜
苷总含量可以将其分为 3 类。第一类为 S3(大理巍
山)，第二类为 S4(大理南涧)、S5(大理剑川)、S6
(大理鹤庆)、S7(大理祥云)、S8(大理宾川)、S9(大
理弥渡)、S10(大理漾濞)，第三类为 S1(大理感
通)、S2(大理洱源)。第一类与第二类距离较近，说
明第一类样品与第二类样品总含量相接近。从表 4
三种成分的总含量可知第一类含量最高，二类、三类
总含量依次降低(图 3)。
表 3 滇龙胆中 3 种指标成分的加样回收率实验结果
Tab. 3 Ｒesult of recovery tests of three index components in Gentiana rigescens Franch.
Component m(Background)/mg m(Added)/mg m(Found)/mg Ｒecovery /% Average recovery /% ＲSD /%
0. 235 0 0. 261 6 0. 490 0 101. 3
Gentiopicroside 0. 219 8 0. 261 6 0. 491 2 98. 00 99. 15 1. 879
0. 221 5 0. 261 6 0. 492 2 98. 15
0. 045 9 0. 040 0 0. 088 2 102. 6
Swertiamarin 0. 044 4 0. 040 0 0. 082 9 98. 16 99. 96 2. 336
0. 045 6 0. 040 0 0. 084 9 99. 12
0. 012 2 0. 017 84 0. 030 1 100. 20
Sweroside 0. 012 0 0. 017 84 0. 028 7 96. 18 98. 53 2. 124
0. 012 3 0. 017 84 0. 029 9 99. 20
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表 4 滇龙胆不同居群间花中龙胆苦苷、獐牙菜苦苷和獐牙菜苷的含量比较分析． n = 3，珋x ± s
Tab. 4 Comparative analysis of the contents of gentiopicroside，swertiamarin and sweroside in the flowers of Gentiana rigescens
Franch. from different populations． n = 3，珋x ± s
populations
Contents /%
Gentiopicroside Swertiamarin Sweroside
Total contents /% Similarity Similarity compared with root
Gantong，Dali 0. 916 3 ±0. 002 84)5 0. 181 0 ±0. 003 24)5)4 ND 1. 097 3 ±0. 003 45)5 0. 809 0. 627
Eryuan，Dali 2. 437 2 ±0. 015 73)4 0. 227 8 ±0. 001 12)23 0. 033 6 ±0. 003 52)3)234 2. 698 6 ±0. 018 24)4 0. 954 0. 846
Weishan，Dali 8. 171 4 ±0. 090 61)1 0. 313 4 ±0. 018 11)1 0. 235 3 ±0. 003 21)1 8. 720 1 ±0. 082 21)1 0. 996 0. 966
Nanjian，Dali 5. 587 4 ±0. 124 22)2 0. 232 3 ±0. 022 62)23 ND 5. 819 8 ±0. 123 72)3)2 0. 990 0. 957
Jianchuan，Dali 5. 183 2 ±0. 496 62)2 0. 214 1 ±0. 014 62)3)4)3 ND 5. 397 3 ±0. 507 62)3)2 0. 995 0. 960
Heqing，Dali 5. 465 1 ±0. 621 32)2 0. 219 2 ±0. 016 52)3)23 0. 046 2 ±0. 01292)3)23 5. 730 6 ±0. 628 22)3)2 0. 997 0. 980
Xiangyun，Dali 5. 500 6 ±0. 244 82)2 0. 188 5 ±0. 009 73)4)5)4 0. 060 1 ±0. 018 02)2 5. 749 2 ±0. 249 02)3)2 0. 995 0. 972
Binchuan，Dali 5. 760 0 ±0. 601 22)2 0. 247 2 ±0. 014 02)2 ND 6. 007 2 ±0. 601 12)2 0. 998 0. 975
Midu，Dali 5. 420 0 ±0. 095 32)2 0. 175 3 ±0. 010 45)4 0. 016 1 ±0. 027 93)34 5. 611 4 ±0. 110 42)3)2 0. 994 0. 965
Yangbi，Dali 4. 501 2 ±0. 669 22)3 0. 139 9 ±0. 001 36)5 0. 031 9 ±0. 027 72)3)234 4. 673 1 ±0. 653 43)3 0. 976 0. 931
注:采用最小显著差异法进行方差分析，不同 1)、2)、3)、4)、5)、6)表示差异极显著(P ＜0. 01)，不同 1、2、3、4、5、6表示差异显著(P ＜ 0. 05)，ND 表示未检出。
龙胆苦苷含量:与感通、洱源、南涧、剑川、鹤庆、祥云、宾川、弥渡、漾濞居群比较1)，P ＜0. 01;与感通、洱源居群比较2)，P ＜ 0. 01;与感通居群比较3)，P ＜ 0. 01;与感
通、洱源、南涧、剑川、鹤庆、祥云、宾川、弥渡、漾濞居群比较1，P ＜0. 05;与感通、洱源、漾濞居群比较2，P ＜ 0. 05;与感通、洱源居群比较3P ＜ 0. 05;与感通居群比
较4，P ＜0. 05。獐牙菜苦苷含量:与感通、洱源、南涧、剑川、鹤庆、祥云、宾川、弥渡、漾濞居群比较1)，P ＜ 0. 01;与感通、剑川、鹤庆、祥云、弥渡、漾濞居群比较2)，
P ＜0. 01;与感通、剑川、祥云、弥渡、漾濞居群比较3)，P ＜0. 01;与感通、祥云、弥渡、漾濞居群比较4)，P ＜ 0. 01;与漾濞居群比较5)，P ＜ 0. 01;与感通、洱源、南涧、剑
川、鹤庆、祥云、宾川、弥渡、漾濞居群比较1P ＜0. 05;与感通、洱源、南涧、剑川、鹤庆、祥云、弥渡、漾濞居群比较2，P ＜0. 05;与感通、祥云、弥渡、漾濞居群比较3P ＜
0. 05;与漾濞居群比较4，P ＜0. 05。獐牙菜苷含量:与感通、洱源、南涧、剑川、鹤庆、祥云、宾川、弥渡、漾濞居群比较1)，P ＜ 0. 01;与感通、洱源、南涧、剑川、鹤庆、宾
川、弥渡、漾濞居群比较2)，P ＜0. 01;与感通、南涧、剑川、宾川居群比较3)，P ＜0. 01;与感通、洱源、南涧、剑川、鹤庆、祥云、宾川、弥渡、漾濞居群比较1，P ＜ 0. 05;与
感通、洱源、南涧、剑川、鹤庆、宾川、弥渡、漾濞居群比较2，P ＜0. 05;与感通、洱源、南涧、剑川、宾川、弥渡、漾濞居群比较3，P ＜ 0. 05;与感通、南涧、剑川、宾川居群
比较4P ＜0. 05。总含量:与感通、洱源、南涧、剑川、鹤庆、祥云、宾川、弥渡、漾濞居群比较1)，P ＜0. 01;与感通、洱源、南涧、剑川、鹤庆、祥云、弥渡、漾濞居群比较2)，
P ＜0. 01;与感通、洱源居群比较3)，P ＜0. 01;与感通、洱源、南涧、剑川、鹤庆、祥云、宾川、弥渡、漾濞居群比较1，P ＜ 0. 05;与感通、洱源、漾濞居群比较2，P ＜ 0. 05;
与感通、洱源居群比较3，P ＜0. 05;与感通居群比较4，P ＜0. 05
Note:1)，2)，3)，4)，5)，6)，1，2，3，4，5，6significant differences in LSD at the 0. 01 and 0. 05 level. ND represents no detected. The contents of Gentiopicro-
side:compared with Gantong，Eryuan，Nanjian，Jianchuan，Heqing，Xiangyun，Binchuan，Midu，Yangbi，the difference being extremely significant，1)P ＜0. 01;compared
with Gantong，Eryuan，the difference being extremely significant，2)P ＜0. 01;compared with Gantong，the difference being extremely significant，3)P ＜0. 01;compared with
Gantong，Eryuan，Nanjian，Jianchuan，Heqing，Xiangyun，Binchuan，Midu，Yangbi，the difference being extremely significant，1P ＜ 0. 05;compared with Gantong，
Eryuan，Yangbi，the difference being extremely significant，2P ＜0. 05;compared with Gantong，Eryuan，the difference being extremely significant，3P ＜ 0. 05;compared
with Gantong，the difference being extremely significant，4P ＜ 0. 05. The contents of swertiamarin:compared with Gantong，Eryuan，Nanjian，Jianchuan，Heqing，Xian-
gyun，Binchuan，Midu，Yangbi，the difference being extremely significant，1)P ＜0. 01;compared with Gantong，Jianchuan，Heqing，Xiangyun，Midu，Yangbi，the differ-
ence being extremely significant，2)P ＜0. 01;compared with Gantong，Jianchuan，Xiangyun，Midu，Yangbi，the difference being extremely significant，3)P ＜ 0. 01;com-
pared with Gantong，Xiangyun，Midu，Yangbi，the difference being extremely significant，4)P ＜ 0. 01;compared with Yangbi，the difference being extremely significant，
5)P ＜0. 01;compared with Gantong，Eryuan，Nanjian，Jianchuan，Heqing，Xiangyun，Binchuan，Midu，Yangbi，the difference being extremely significant，1P ＜ 0. 05;
compared with Gantong，Eryuan，Nanjian，Jianchuan，Heqing，Xiangyun，Midu，Yangbi，the difference being extremely significant，2P ＜ 0. 05;compared with Gantong，
Xiangyun，Midu，Yangbi，the difference being extremely significant，3P ＜0. 05;compared with Yangbi，the difference being extremely significant，4P ＜0. 05. The contents
of Sweroside:compared with Gantong，Eryuan，Nanjian，Jianchuan，Heqing，Xiangyun，Binchuan，Midu，Yangbi，the difference being extremely significant，1)P ＜0. 01;
compared with Gantong，Eryuan，Nanjian，Jianchuan，Heqing，Binchuan，Midu，Yangbi，the difference being extremely significant，2)P ＜0. 01;compared with Gantong，
Nanjian，Jianchuan，Binchuan，the difference being extremely significant，3)P ＜0. 01;compared with Gantong，Eryuan，Nanjian，Jianchuan，Heqing，Xiangyun，Binchuan，
Midu，Yangbi，the difference being extremely significant，1P ＜0. 05;compared with Gantong，Eryuan，Nanjian，Jianchuan，Heqing，Binchuan，Midu，Yangbi，the differ-
ence being extremely significant，2P ＜0. 05;compared with Gantong，Eryuan，Nanjian，Jianchuan，Binchuan，Midu，Yangbi，the difference being extremely significant，
3P ＜0. 05;compared with Gantong，Nanjian，Jianchuan，Binchuan，the difference being extremely significant，4P ＜ 0. 05. Total contents:compared with Gantong，
Eryuan，Nanjian，Jianchuan，Heqing，Xiangyun，Binchuan，Midu，Yangbi，the difference being extremely significant，1)P ＜0. 01;compared with Gantong，Eryuan，Nan-
jian，Jianchuan，Heqing，Xiangyun，Midu，Yangbi，the difference being extremely significant，2)P ＜0. 01;compared with Gantong，Eryuan，the difference being extremely
significant，3)P ＜0. 01;compared with Gantong，Eryuan，Nanjian，Jianchuan，Heqing，Xiangyun，Binchuan，Midu，Yangbi，the difference being extremely significant，
1P ＜0. 05;compared with Gantong，Eryuan，Yangbi，the difference being extremely significant，2P ＜0. 05;compared with Gantong，Eryuan，the difference being extreme-
ly significant，3P ＜0. 05;compared with Gantong，the difference being extremely significant，4P ＜0. 05
3. 3 滇龙胆不同居群花间指纹图谱共有模式的建
立及相似度评价
本实验在做指纹图谱时考虑到在 235 nm 时各
居群出峰数目最多，且 3 种有效成分的峰面积整体
较大，故不选择 3 种有效成分各自的最大吸收波长，
而选择 235 nm作为指纹图谱的检测波长。对 10 个
居群滇龙胆样品测定结果及数据进行分析，将 10 个
居群花的指纹图谱的 AIA格式的原始数据导入“中
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中国药学杂志 2014 年 8 月第 49 卷第 16 期 Chin Pharm J，2014 August，Vol. 49 No. 16
药色谱指纹图谱相似度评价系统 2004A 版”软件系
统，以 S10 为参照图谱，选取“时间窗宽度”为 0. 1
min，经过多点校正，自动匹配，以中位数法，生成对
照图谱 Ｒ，有匹配数据的输出结果得到共有峰 15
个，并进行相似度分析(表 4)，10 个居群间相似度
均在 0. 809 以上，不同居群花间指纹图谱相似性良
好。经过与对照品保留时间比较，确认 8 号峰为龙
胆苦苷，5 号峰为獐牙菜苦苷，9 号峰为獐牙菜苷，其
中龙胆苦苷的峰面积比例较大，分离度能够达到要
求，是滇龙胆药材的药效成分，因此选作参照峰，建
立滇龙胆花 HPLC指纹图谱共有模式(图 4)。
3. 4 滇龙胆不同居群花间与根比较指纹图谱共有
模式的建立及相似度评价
按照“3. 3”的方法，以 S11 即根的图谱为参照
图谱，建立滇龙胆花与根比较的 HPLC 指纹图谱共
有模式(图 5)。从图 5 可知花与根的共有峰有 8
图 3 滇龙胆花中龙胆苦苷、獐牙菜苦苷、獐牙菜苷总含量
的聚类树状图
Fig. 3 Cluster tree of total content of gentiopicroside and swer-
tiamarin and sweroside in the flowers of Gentiana rigescens
Franch
图 4 滇龙胆不同居群花的 HPLC指纹图谱共有模式
7 －獐牙菜苦苷;8 －龙胆苦苷;9 －獐牙菜苷
Fig. 4 Mutual mode of HPLC fingerprints of the flowers of Gen-
tiana rigescens Franch. from different populations
7 － swertiamarin;8 － gentiopicroside;9 － sweroside
个，而花自身的共有峰有 15 个，说明花中所含有效
成分与根相似，并且还有些根中未检测到的成分。
并进行相似度分析(表 4)，花与根比较中相似性除
感通居群外，均高于 0. 846，相似性良好。经过与对
照品保留时间比较，确认 6 号峰为龙胆苦苷，5 号峰
为獐牙菜苦苷，7 号峰为獐牙菜苷。
3. 5 滇龙胆不同居群花间指纹图谱的主成分分析
参照文献［11］的方法，将滇龙胆 10 个居群花
HPLC 图谱各共有峰的峰面积相对药材称样量之
比，即单位质量药材峰面积进行量化，得到 10 × 15
阶的数据矩阵，应用 SPSS17. 0 统计分析软件对其进
行主成分分析。以特征值大于 1 为提取标准，得到
5 个主成分，累积贡献率达到 91. 07%。其中，第一
主成分 λ = 5. 15，方差贡献率为 34. 31%，贡献率最
大，包含的信息最多。第二主成分 λ = 4. 07，方差贡
献率为 27. 12%;第三主成分 λ = 2. 07，方差贡献率
为 13. 81%;第四主成分 λ = 1. 23，方差贡献率为
8. 19%;第五主成分 λ = 1. 14，方差贡献率为
7. 63%。第一第二主成分方差总的贡献率为
61. 43%，我们选择第一第二主成分做主成分得分图
(图 6)。从图 6 可见，10 个居群样品被分为 3 组，其
分组结果与聚类分析结果相一致。
4 讨 论
本实验从活性成分含量测定和 HPLC 指纹图谱
技术方面同时对大理州不同居群滇龙胆花的品质及
质量等同性进行评价。活性成分含量测定结果表
明，大理州滇龙胆不同居群间花中龙胆苦苷含量整
体较高，含量较低的感通居群中龙胆苦苷含量也与
图 5 滇龙胆不同居群花与根比较的HPLC指纹图谱共有模式
5 －獐牙菜苦苷;6 －龙胆苦苷;7 －獐牙菜苷
Fig. 5 Mutual mode of HPLC fingerprints of the flowers of Gen-
tiana rigescens Franch. from different populations compared with
the root
5 － swertiamarin;6 － gentiopicroside;7 － sweroside
·6541· Chin Pharm J，2014 August，Vol. 49 No. 16 中国药学杂志 2014 年 8 月第 49 卷第 16 期
图 6 不同居群间滇龙胆花中主成分得分图
Fig. 6 PCA Scores of Gentiana rigescens Franch. flowers from
different populations
国家标准接近［2］，其余产地花中龙胆苦苷含量均高
于国家标准。虽然《中国药典》2010 年版对滇龙胆
花中獐芽菜苦苷、獐芽菜苷含量未作具体要求，但
是，滇龙胆的功效与獐芽菜苦苷、獐芽菜苷等环烯醚
萜类物质紧密相关［12］，大理州滇龙胆不同居群间花
中獐芽菜苦苷含量高于沈涛等［13］报道的(0. 135 ±
0. 033)%。说明滇龙胆花从有效成分含量上看可
以代替根入药。
用“中药色谱指纹图谱相似度评价系统 2004A
版”对滇龙胆 10 个居群间 HPLC指纹图谱共有模式
进行分析，10 个居群花间指纹图谱相似度均在
0. 809 以上，说明不同居群花指纹图谱相似性良好，
为来源于大理的滇龙胆药材“道地性”提供重要依
据。从 100 多个色谱峰中确定 15 个共有峰，指认了
共有模式中的龙胆苦苷、獐牙菜苦苷和獐牙菜苷 3
个与活性相关的化合物为特征峰，比李莎等［14］确定
坚龙胆中 7 个共有峰、指认了共有模式中的龙胆苦
苷 1 个化合物为特征峰的质量控制标准多 2 个指标
性成分和 8 个共有峰。
对滇龙胆不同居群花的指纹图谱相似度及其与
根进行比较的相似度分析表明，花与根中相似性除
感通居群外，均高于 0. 846，说明不同居群花与根比
较指纹图谱相似性较好。从图 3 可知，花与根的共
有峰有 8 个，而花自身的共有峰有 15 个，说明花中
所含有效成分与根相似，并且还有些根中未检测到
的成分。因此，虽然长期以来民间以滇龙胆花替代
根入药，且疗效与根相似，但是滇龙胆花是否能替代
根入药，还需进一步做药理、毒理实验证明。
滇龙胆 10 个居群间花中龙胆苦苷、獐牙菜苦
苷、獐牙菜苷含量方差分析及其总含量聚类分析和
15 个共有峰主成分分析结果基本一致，为从活性成
分和“活性物质群”角度评价滇龙胆花品质优劣提
供依据;滇龙胆花中龙胆苦苷成分含量已达到药典
标准要求，但是滇龙胆花与根比较的 HPLC 指纹图
谱存在差异，因此滇龙胆花是否可以作为其根的替
代品入药，仍需进一步做药理、毒理及临床试验。
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(收稿日期:2014-04-17)
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